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Biology版 - 请问mutagenesis最多能插入过多少个碱基?
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Re: who has experience with PCR-based mutangenesis?Dumb question
请大家推荐一个mutagenesis kit吧Mutagenesis 求助:请问如何插入一段 ~20bp的片段?
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f******g
发帖数: 16
1
正好看到有人问类似的问题。我也问一个,以前都是插一个3或6个base,这回想做大概
20个插在同一个点上,不知道一步行不行?还是得分两步来。那些说明上都没有说清楚
。看看有没有前辈做过。
个人觉得插入应该比置换容易一些吧。 插入的都不会mismatch,就是不知两边
overhang要不要特别增加些? 我以前都是每边用~15base
多谢
b******n
发帖数: 4225
2
两边用20好了,中间插的这20个nt当做互补的部分
应该没问题

【在 f******g 的大作中提到】
: 正好看到有人问类似的问题。我也问一个,以前都是插一个3或6个base,这回想做大概
: 20个插在同一个点上,不知道一步行不行?还是得分两步来。那些说明上都没有说清楚
: 。看看有没有前辈做过。
: 个人觉得插入应该比置换容易一些吧。 插入的都不会mismatch,就是不知两边
: overhang要不要特别增加些? 我以前都是每边用~15base
: 多谢

d******1
发帖数: 709
3
inver-PCR, for 100-200 bp insertion.
K*C
发帖数: 2825
4
之前那问题是我问的。目前看来置换20个氨基酸没问题,插入更容易。

【在 f******g 的大作中提到】
: 正好看到有人问类似的问题。我也问一个,以前都是插一个3或6个base,这回想做大概
: 20个插在同一个点上,不知道一步行不行?还是得分两步来。那些说明上都没有说清楚
: 。看看有没有前辈做过。
: 个人觉得插入应该比置换容易一些吧。 插入的都不会mismatch,就是不知两边
: overhang要不要特别增加些? 我以前都是每边用~15base
: 多谢

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