从cDNA文库中克隆基因 - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 从cDNA文库中克隆基因

相关主题
● 用自己提取的cDNA来克隆gene可行么？	● qPCR检测到Ct值在32左右的基因用western检测到蛋白会有多强？
● 怎么克隆出未知基因，真心请教各位牛人们	● GAPDH的Ct值在30以上，这结果还可靠不？
● 18S rRNA做内参的问题	● SYBR real-time PCR误差很大？
● 11kb gene 5'RACE	● 下个月在日本的拟楠芥会议有人同去吗？
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● 比较不同基因在同一和不同细胞系中的表达量————qPCR结果要怎样分析	● 求助反转录PCR
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● PCR std dev 总是太高。。。	● cDNA克隆的编码区缺失一个核苷酸？

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E*****e 发帖数: 54	1 克隆好几个基因，RT-PCR能检测到基因表达（ct～29， GAPDH ct～18），但用PCR （ 35 cycle）一个都没能克隆出来。请教一下从自制cDNA文库中克隆基因有什么窍门吗？
x*****e 发帖数: 309	2 用什么引物作的反转录？用什么反转录酶？有的基因CDS离3‘段很远，我用随机引物，选扩增片段〉5kb的酶。【在 E*****e 的大作中提到】 : 克隆好几个基因，RT-PCR能检测到基因表达（ct～29， GAPDH ct～18），但用PCR （ : 35 cycle）一个都没能克隆出来。 : 请教一下从自制cDNA文库中克隆基因有什么窍门吗？
f*****f 发帖数: 195	3 rt-pcr检测只能说明对应的amplicon存在于你的cDNA中。你要克隆的基因多大？cDNA文库是如何制备的？仅仅用普通逆转录出来的文库往往丰度不高，而且很多都转录不完全或是只能得到一些基因的片段。假如基因比较大的话很难pcr出来
w***7 发帖数: 463	4 non specific band? "RT-PCR能检测到基因表达" 但用PCR （【在 E*****e 的大作中提到】 : 克隆好几个基因，RT-PCR能检测到基因表达（ct～29， GAPDH ct～18），但用PCR （ : 35 cycle）一个都没能克隆出来。 : 请教一下从自制cDNA文库中克隆基因有什么窍门吗？

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● cDNA克隆的编码区缺失一个核苷酸？	● 能用real time RT-PCR来比较同一细胞的不同gene的含量吗？
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● 大家克隆promoter都用什么方法？谢谢！	● 问个qRT-PCR加样顺序的问题
● 小白求大侠们指点3‘RACE	● PCR std dev 总是太高。。。
● 用自己提取的cDNA来克隆gene可行么？	● qPCR检测到Ct值在32左右的基因用western检测到蛋白会有多强？
● 怎么克隆出未知基因，真心请教各位牛人们	● GAPDH的Ct值在30以上，这结果还可靠不？
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● 11kb gene 5'RACE	● 下个月在日本的拟楠芥会议有人同去吗？

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