l********s 发帖数: 70 | 1 tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊! |
l**********1 发帖数: 5204 | 2 Please try NYU Sun-lab free protocol links:
a)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-
lab/attachments/CPSC.Ch5.Genetic%20Manipulation%20of%20Stem%20Cells.pdf
b)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch19.Tissue%20Analysis.pdf
c)
//webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPMB.Ch.29.MousePhenotyping.pdf
plus alfa
//biology.hunter.cuny.edu/molecularbio/Class%20Materials%20Spring%202011%20BIol302/Lecture%2023/I
nducible%20Cre.pdf
and beta
//biologie.univ-mrs.fr/upload/p102/Kwan2002.pdf
【在 l********s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊!
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S******9 发帖数: 2837 | 3 你是成鼠做还是D1,还是妊娠母鼠?
这个很容易,不要跪求,说说条件吧 |
z****u 发帖数: 1007 | 4 Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表示
无压力。情绪稳定。有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。
【在 l********s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊!
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n********k 发帖数: 2818 | 5 Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表
示无压力。情绪稳定。
How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i
am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg)
有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。
Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and
cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7
doses... |
S******9 发帖数: 2837 | 6 我是那ethol溶解,然后sunflower oil稀释10倍。
每天是1mg, 连续10天。老鼠在3-4天有点精神不是很好。
如果是3mg/d。老鼠在3天以后很容易死。
1mg/d x 5天我们的target基因deletion大概是90-93%, 如果是10天就可以到97-99%之
间。 |
l********s 发帖数: 70 | 7 谢谢大侠!!! 好人有好报!
20Analysis.pdf
MousePhenotyping.pdf
20BIol302/Lecture%2023/I
【在 l**********1 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Please try NYU Sun-lab free protocol links: : a) : //webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun- : lab/attachments/CPSC.Ch5.Genetic%20Manipulation%20of%20Stem%20Cells.pdf : b) : //webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPCB.ch19.Tissue%20Analysis.pdf : c) : //webdoc.nyumc.org/nyumc/files/sun-lab/attachments/CPMB.Ch.29.MousePhenotyping.pdf : plus alfa : //biology.hunter.cuny.edu/molecularbio/Class%20Materials%20Spring%202011%20BIol302/Lecture%2023/I
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l********s 发帖数: 70 | 8 先做成鼠,实验室买的是 tamoxifen-citrate 注射的。估计这个只能feed,不能注射
谢过这位大哥了!
【在 S******9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你是成鼠做还是D1,还是妊娠母鼠? : 这个很容易,不要跪求,说说条件吧
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l********s 发帖数: 70 | 9 非常有用!,谢谢,我看很多是酒精稀释的。 我们暂买的是 tamoxifen-citrate
非常感谢您!
7
【在 n********k 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表 : 示无压力。情绪稳定。 : How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i : am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg) : 有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。 : Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and : cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7 : doses...
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l********s 发帖数: 70 | 10 谢谢您!,
我也想做primary cell的,最近老板催的紧。非常有用,收下啦!
【在 S******9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我是那ethol溶解,然后sunflower oil稀释10倍。 : 每天是1mg, 连续10天。老鼠在3-4天有点精神不是很好。 : 如果是3mg/d。老鼠在3天以后很容易死。 : 1mg/d x 5天我们的target基因deletion大概是90-93%, 如果是10天就可以到97-99%之 : 间。
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l********s 发帖数: 70 | 11 我想把 tamoxifen-citrate 溶解在水中,给老鼠
tramoxifen-citrate 经过stomach 后,可以分解成citrate 和tamoxifen-free base。
不过剂量还没找到,呵呵,打算用食物比例算算,您有什么建议吗?
【在 S******9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我是那ethol溶解,然后sunflower oil稀释10倍。 : 每天是1mg, 连续10天。老鼠在3-4天有点精神不是很好。 : 如果是3mg/d。老鼠在3天以后很容易死。 : 1mg/d x 5天我们的target基因deletion大概是90-93%, 如果是10天就可以到97-99%之 : 间。
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z****u 发帖数: 1007 | 12 我就是拿Sigma的corn oil 20mg/ml就是最大溶解度了。 37度下溶解。然后冻存。剂量
4mg/30g ..差不多就是150mg/kg. 老鼠年龄3周以上。 一般打2-4天。看Cre的效率了。
有的cre很好,一天就够。想要保证高效的就打4天。so far还不错。没打过超过4天的
还。
酒精稀释感觉坏处很大。 一来把tamoxifen稀释了,注射volume得提高,再来酒精打到
腹膜下反应很大,有好些老鼠甚至当场死亡。
7
【在 n********k 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Tamoxifen拿corn oil 配成20mg/ml 浓度。然后每天给成鼠注射4mg IP. 成鼠对此表 : 示无压力。情绪稳定。 : How many days can you inject without killing them? how old are the mice? i : am trying to get your dosing(ours are at between 150mg-180mg/kg) : 有的protocol还拿酒精稀释。我的经验是那样经常会把老鼠打死。 : Yes, with this one, at our dose, the mice feel the stress after 3 days and : cannot tolerate more than 6 days...lethality could be up to 20-30% with 6-7 : doses...
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l**********1 发帖数: 5204 | 13 De rien.
plus
Bouvier J and Cheng JG.
Recombineering-based procedure for creating Cre/loxP conditional knockouts
in the mouse. (2009)
Curr Protoc Mol Biol. Chapter 23:Unit 23.13.
//www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19170029
【在 l********s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 谢谢大侠!!! 好人有好报! : : 20Analysis.pdf : MousePhenotyping.pdf : 20BIol302/Lecture%2023/I
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S******9 发帖数: 2837 | 14 这个我也做过,灌胃,每天是3mg,连续5天。这个deletion效果一样。
不能加到水里喂,效果不好。
有那种和食物做到一起的,但是好像很贵,我老板以前舍不得出钱,看见有一个实验室喂含在食物
里面的,每天是1mg,喂42天,我们没买这个食物,结果我给老鼠灌胃了42天,最后还是效果不
好,最后发现是那个Cre的老鼠不work。
base。
【在 l********s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我想把 tamoxifen-citrate 溶解在水中,给老鼠 : tramoxifen-citrate 经过stomach 后,可以分解成citrate 和tamoxifen-free base。 : 不过剂量还没找到,呵呵,打算用食物比例算算,您有什么建议吗?
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b*****n 发帖数: 1841 | 15 搭车问:
Topical application真的能只在涂抹的地方敲除吗?
有的说可以,效果很好;有的说这种情况tamoxifen需要转运到肝脏代谢然后分布全身
,其实跟IP的效果差不多。
【在 l********s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : tamoxifen 用来做条件性敲出的。谢谢各位大侠啊!
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