e****p
发帖数: 354 | 1 刚开始做IF, DABI GFP RFP都染了，结果发现GFP negative control还较强,确定没有
加一抗，加了一抗的更强， 请问是否有遇到过这种情况，不知道有什么解决方法。。
。 | W****7
发帖数: 426 | 2 细胞自发荧光很正常，我觉得如果你做荧光定量的话可以不用理它，就选几个背景细胞
subtract掉就行了。
最简单的方法就是把你的激发光强度降下来，当然这个只能降低一些自发荧光估计不会
一点都没有。
听说有人用一些filter能降低background，我不知道怎么用。
其他常用的方法有Glycine，CuSO4，NaBH4，ammonium salts和苏丹黑等一些染料，
具体方法自己google一下吧。 | e****p
发帖数: 354 | | i***0
发帖数: 160 | 4 GFP有自发荧光，如果做GFP的immunostain， 得避开其自发荧光的区域 （ex/em：485/
525）
另，你的negative control是什么？ 不表达GFP的细胞，还是表达GFP的细胞不加一抗
？ 如果第一次做，最好两个control都上一下， 这样便于trouble shooting。如果你
染的是组织切片，只加二抗的control会有荧光，尤其血管区，因为有IgG。比较样本染
色，其有正信号，而control没有信号的区域显示有该蛋白的表达
如果你染的是细胞，只加二抗看到的均匀的荧光背景，则如2楼所言；如果看到点状荧
光，则多为二抗没有洗干净。 |
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