m**u
发帖数: 3348 | 1 我最近用酵母表达一种膜蛋白，表达的量还可以，detergent 我尝试过用DDM或者DM，
大概每5g-7g yeast用50mM的DDM 50ml,但每次solubilization 4度过夜，第二天离心的
时候仍然可见很多似乎未完全溶解的膜，查了一些资料，没有看到有人提到到底应该用
多少detergent，甚至有时候再加倍也能看到不少膜沉淀。不知道哪位大虾这方面的经
验吗？一般什么样的detergent最有效，能做到完全溶解膜从而减少蛋白的损失呢？非
常感谢！ 呵呵 |
k******0
发帖数: 1073 | 2 50 mM DDM 的浓度大约2。5％ 左右，已经很高了。我一般不超过1。5％。
不管你用多少detergent，都会有沉淀，不一定就是未溶解的膜。比如DNA了，不容的蛋
白质了等等。只有你回收到你想要的蛋白质就好了。
【在 m**u 的大作中提到】
: 我最近用酵母表达一种膜蛋白，表达的量还可以，detergent 我尝试过用DDM或者DM，
: 大概每5g-7g yeast用50mM的DDM 50ml,但每次solubilization 4度过夜，第二天离心的
: 时候仍然可见很多似乎未完全溶解的膜，查了一些资料，没有看到有人提到到底应该用
: 多少detergent，甚至有时候再加倍也能看到不少膜沉淀。不知道哪位大虾这方面的经
: 验吗？一般什么样的detergent最有效，能做到完全溶解膜从而减少蛋白的损失呢？非
: 常感谢！ 呵呵
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m**u
发帖数: 3348 | 3 主要是担心损失太多蛋白了
那如何确定比如说10g cell到底需要多少某种detergent
这是个需要计算的过程还是仅仅经验摸索？
【在 k******0 的大作中提到】
: 50 mM DDM 的浓度大约2。5％ 左右，已经很高了。我一般不超过1。5％。
: 不管你用多少detergent，都会有沉淀，不一定就是未溶解的膜。比如DNA了，不容的蛋
: 白质了等等。只有你回收到你想要的蛋白质就好了。
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k******0
发帖数: 1073 | 4 我的实验是测定出来的。因为我不想用太高浓度的DDM，担心复合体的稳定性。如果有
更多的样品，我只好加大体积并保持一定的DDM浓度。
【在 m**u 的大作中提到】
: 主要是担心损失太多蛋白了
: 那如何确定比如说10g cell到底需要多少某种detergent
: 这是个需要计算的过程还是仅仅经验摸索？
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m**u
发帖数: 3348 | 5 ok, thank you so much!
【在 k******0 的大作中提到】
: 我的实验是测定出来的。因为我不想用太高浓度的DDM，担心复合体的稳定性。如果有
: 更多的样品，我只好加大体积并保持一定的DDM浓度。
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