h******o 发帖数: 9 | 1 查了些资料,对这两个名词有所了解,但是不知是否准确。请大家指点。
是不是因为F0代敲除鼠是嵌合体,所以需要做回交?
怎么做回交?
做完回交后的老鼠是不是就是纯背景的老鼠了,他们的后代的每个基因的表型(如毛色
,眼睛颜色)理论上是一模一样的(除被敲除的基因所在的染色体上的基因) |
D*a 发帖数: 6830 | 2 嵌合鼠的“不纯”和需要回交的老鼠的不纯不是一个概念。
在基因敲除老鼠中,一般把做过基因修饰的胚胎干细胞注射到小鼠的完整胚胎中,借助
小鼠的完整胚胎进行发育。这个过程中为了区分外源胚胎干细胞和受体小鼠细胞,一般
采用两种花色的老鼠比如agouti色的129老鼠注入到黑色B6老鼠中,这样出来的是嵌合
鼠,它的每个细胞都是纯合的,或者是129纯合,或者是B6纯合,但是老鼠全身因为含
有两种品系的老鼠细胞,所以总体上不是“纯系”。
这样的老鼠,理论上生殖系统也会有这两种品系的细胞构成,因此,跟129交配,生出
来的或者是杂合的129-B6的老鼠(不带有转基因),或者是纯合的129老鼠(带有转基
因)。
做回交的老鼠,是比如上面我拿到了纯合129的转基因老鼠,我希望研究这个基因在C3H
这个品系上的应用,那么我用纯的129老鼠和C3H老鼠交配,这样的老鼠出来的每个细胞
都是不纯的,因为每个细胞都含有一条C3H的染色体和一条129的染色体。然后这样的第
一代老鼠F1继续跟C3H老鼠交配,第二代老鼠就含有多一点C3H(大约75%),少一点129。
循环往复跟C3H老鼠交配,129越来越少,直到达到纯系C3H的标准,一般认为需要10代
以上。
=做完回交后的老鼠是不是就是纯背景的老鼠了,他们的后代的每个基因的表型(如毛色
,眼睛颜色)理论上是一模一样的(除被敲除的基因所在的染色体上的基因)
-----是的。 |
h******o 发帖数: 9 | 3 非常感谢Dua, 学到不少知识。
现在的问题是:我的基因敲除老鼠生的小老鼠有黑色也有灰色,而且两种颜色的老鼠都
有(+/-)基因型(这是不是说明被敲除的基因和毛色基因不在同一条染色体上)。现
在不敢继续用他们做实验了,担心不是纯的,难道还要我做10代的回交?那可得1-2年
呀。
有没有其他人也遇到过这种情况,请大家帮忙解释一下。 |
D*a 发帖数: 6830 | 4 啊。。。理论上细胞之间不会交换的吧。。被敲除的基因和毛色基因在不在同一条染色
体上,一个精子也只能最终追溯到一个细胞而来而不是两个细胞,所以精子应该是纯合
细胞。
你能不能详细说说你用的各种老鼠的background和毛色显隐性。。。是不是你ES毛色基
因本来就不是纯合的。。。
【在 h******o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 非常感谢Dua, 学到不少知识。 : 现在的问题是:我的基因敲除老鼠生的小老鼠有黑色也有灰色,而且两种颜色的老鼠都 : 有(+/-)基因型(这是不是说明被敲除的基因和毛色基因不在同一条染色体上)。现 : 在不敢继续用他们做实验了,担心不是纯的,难道还要我做10代的回交?那可得1-2年 : 呀。 : 有没有其他人也遇到过这种情况,请大家帮忙解释一下。
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h******o 发帖数: 9 | 5 是129(ES)和C57BL/6老鼠。
我想无论ES毛色基因是怎么样的,如果和C57bl/6反复回交后,毛色基因应该已经被全
部替换成C57bl/6的毛色基因了,也就是说应该是黑色。可是我目前的老鼠有黑有灰。
高度怀疑没有回交。
网上查的Genotype of mice:
C57Bl/6: C/C, P/P, a/a
129/Sv C/C, P/P, Aw/Aw
black: C (or tyr+); tyrosinase locus
albino (white): c (or tyr-); loss of tyrosinase activity; no eumalanin,
little if any phaoemelanin
C/C black coat
C/c black coat
c/c white coat
Pink eye dilution: p locus; change in shape of the pigment; granule (lighter
black coat and pink eyes)
p/p pink eye light gray coat
P/p black coat and black eye
P/P black coat and black eye
Agouti (white bellied): Aw locus; controls what kind of pigment is deposited
on the hair; agouti color is derived from depositing layers of black and
yellow melanin; a single mutation in the agouti locus causes phenotype; 17
different mutations have been detected in this locus.
Aw/Aw agouti coat
Aw/a agouti coat
a/a no effect
【在 D*a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 啊。。。理论上细胞之间不会交换的吧。。被敲除的基因和毛色基因在不在同一条染色 : 体上,一个精子也只能最终追溯到一个细胞而来而不是两个细胞,所以精子应该是纯合 : 细胞。 : 你能不能详细说说你用的各种老鼠的background和毛色显隐性。。。是不是你ES毛色基 : 因本来就不是纯合的。。。
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D*a 发帖数: 6830 | 6 C/C是黑色的话,对agouti是隐性,Aw/Aw是agouti显性。灰的是啥?Aw应
该是黄黑的啊。也就是说你母老鼠如果用129(Aw/Aw),所有小鼠都是agouti色,一半是
纯的,一半是129-B6
【在 h******o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是129(ES)和C57BL/6老鼠。 : 我想无论ES毛色基因是怎么样的,如果和C57bl/6反复回交后,毛色基因应该已经被全 : 部替换成C57bl/6的毛色基因了,也就是说应该是黑色。可是我目前的老鼠有黑有灰。 : 高度怀疑没有回交。 : 网上查的Genotype of mice: : C57Bl/6: C/C, P/P, a/a : 129/Sv C/C, P/P, Aw/Aw : black: C (or tyr+); tyrosinase locus : albino (white): c (or tyr-); loss of tyrosinase activity; no eumalanin, : little if any phaoemelanin
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y****i 发帖数: 2194 | 7 你这个情况八成是没有回交过
或者就是后来被其他品系污染过
如果实验需要纯系的话 老老实实重新回交吧
如果想确定的话,你可以送genomic DNA去做array
可以定量的看每个品系的percentage
我自己也遇到过要来的老鼠这种情况 最后不得不自己悲剧的回交了一年多
【在 h******o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是129(ES)和C57BL/6老鼠。 : 我想无论ES毛色基因是怎么样的,如果和C57bl/6反复回交后,毛色基因应该已经被全 : 部替换成C57bl/6的毛色基因了,也就是说应该是黑色。可是我目前的老鼠有黑有灰。 : 高度怀疑没有回交。 : 网上查的Genotype of mice: : C57Bl/6: C/C, P/P, a/a : 129/Sv C/C, P/P, Aw/Aw : black: C (or tyr+); tyrosinase locus : albino (white): c (or tyr-); loss of tyrosinase activity; no eumalanin, : little if any phaoemelanin
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h******o 发帖数: 9 | 8 请问哪些实验需要纯系老鼠,哪些又可以不需要纯的?
我做的是肿瘤方面的实验。需要回交得到纯系吗?如不不用纯系老鼠会是什么后果呢?
【在 y****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你这个情况八成是没有回交过 : 或者就是后来被其他品系污染过 : 如果实验需要纯系的话 老老实实重新回交吧 : 如果想确定的话,你可以送genomic DNA去做array : 可以定量的看每个品系的percentage : 我自己也遇到过要来的老鼠这种情况 最后不得不自己悲剧的回交了一年多
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l**********1 发帖数: 5204 | 9 这几个要等本版 癌老大 等其有空了 回帖你吧
要是急的话 站内PM 人家下 如何?
Ps: 有的纯系 肿瘤方面的实验mouse 可能花费 比 航公 "辽宁号" 当初买回白兔的
20 million usd 还要多的美刀和更长的时间吧 >one decade?
【在 h******o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请问哪些实验需要纯系老鼠,哪些又可以不需要纯的? : 我做的是肿瘤方面的实验。需要回交得到纯系吗?如不不用纯系老鼠会是什么后果呢?
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D*a 发帖数: 6830 | 10 你到底是拿的别人的老鼠还是自己做的老鼠
拿的别人的话,先开始正常做preliminary的实验,一步一步往下做,后期等到F6的时
候重复一下关键的结果,确保background没有影响,用纯的结果做figures就可以了。
F6一般会在methods里面写一下,但是发表的很多是F6。大家都是到处要老鼠,可以理
解。
【在 h******o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请问哪些实验需要纯系老鼠,哪些又可以不需要纯的? : 我做的是肿瘤方面的实验。需要回交得到纯系吗?如不不用纯系老鼠会是什么后果呢?
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h******o 发帖数: 9 | 11 担心用回交前后的老鼠做的实验的结果会不一样,岂不是浪费时间和经费?
【在 D*a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你到底是拿的别人的老鼠还是自己做的老鼠 : 拿的别人的话,先开始正常做preliminary的实验,一步一步往下做,后期等到F6的时 : 候重复一下关键的结果,确保background没有影响,用纯的结果做figures就可以了。 : F6一般会在methods里面写一下,但是发表的很多是F6。大家都是到处要老鼠,可以理 : 解。
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l**********1 发帖数: 5204 | 12 恩 最佳是捞现成的flox的老鼠跟不同的cre和疾病gene交 省了十年工夫 哈
LZ
if you want to know more about this topic,
pls refer one old post:
同主题阅读:Re: 据说做果蝇和线虫的都是相亲相爱大家庭,有人现身说法一下
[版面:生物学][首篇作者:Dua] , 2012年08月23日
that post reply:
发信人: Oncogene (何时问天), 信区: Biology
标 题: Re: 据说做果蝇和线虫的都是相亲相爱大家庭,有人现身说法一下
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 24 11:37:30 2012, 美东)
其实还有一个很重要的原因,就是以前很多实验室一个老鼠就可以维持好多人好多年
的科研,所以别人来要,总是要担心自己的生计。很正常。
现在做knockout transgenic knockin啥的越来越容易,而且JAX也在努力收集散养在
各个实验室的老鼠系,IKMC正在试图做遍所有基因的KO,所以这个问题会慢慢得到解决。
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发信人: Dua (Dua), 信区: Biology
标 题: Re: 据说做果蝇和线虫的都是相亲相爱大家庭,有人现身说法一下
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 24 15:46:37 2012, 美东)
一只flox的老鼠跟不同的cre和疾病gene交,做10年也做不完。很多基因的功能其实并
不是那么清晰都发现完了的。我说的做十年也不是说从CNS做到两三分的杂志的那种。
有时候是已经建立了合作了,相同领域的人又来要,就不是做老鼠的人决定给不给了。
我说的合作是做老鼠的人是n作甚至不进作者名单的那种合作。
link:
http://www.mitbbs.com/article_t1/Biology/31720125_0_2.html |
h******o 发帖数: 9 | 13 我看了些用基因敲除鼠发表的文章,很多都没有写明回交了多少代呀。 |