g*******3
发帖数: 2520 | 1 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。 |
s******y
发帖数: 28562 | 2 没有问题
GFP
【在 g*******3 的大作中提到】
: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。
|
g*******3
发帖数: 2520 | 3 哇，sunnyday大侠亲自出马指导，这下放心了。
【在 s******y 的大作中提到】
: 没有问题
:
: GFP
|
r***e
发帖数: 2539 | 4 IRES后面的基因表达非常tricky，
前面的比较好弄，不建议动后面的。
GFP
【在 g*******3 的大作中提到】
: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。
|
g*******3
发帖数: 2520 | 5 可是我好像看见（忘了是不是clonetech)的ires 和eGFP中间是有酶切位点啊。
【在 r***e 的大作中提到】
: IRES后面的基因表达非常tricky，
: 前面的比较好弄，不建议动后面的。
:
: GFP
|
r***e
发帖数: 2539 | 6 可以试试，但是如果不行就算了，很难搞。
另外，我没看懂你问什么加酶切位点。
【在 g*******3 的大作中提到】
: 可是我好像看见（忘了是不是clonetech)的ires 和eGFP中间是有酶切位点啊。
|
l***y
发帖数: 638 | 7 most likely it is NcoI site CCATGG andw eGFP starts with ATGG.
addgene has a ton of plasmids with IRES-eGFP, i would buy one and take out
the whole fragment to avoid any trouble.
【在 g*******3 的大作中提到】
: 可是我好像看见（忘了是不是clonetech)的ires 和eGFP中间是有酶切位点啊。
|
g*******3
发帖数: 2520 | 8 说起来比较尴尬，找了一圈没找到谁有ires-CFP的载体，现在想把已经有的GFP换成CFP
, 又不想设计Overlap primer,干脆加一个方便克隆的位点。先把IRES装进去（屁股后
面带个那个位点），然后再把头上加那个位点的CFP PCR产物装进去 （我们有个CFP的
老鼠，准备从基因组里直接把CFP,PCR出来）。就是图个方便，无他。
【在 r***e 的大作中提到】
: 可以试试，但是如果不行就算了，很难搞。
: 另外，我没看懂你问什么加酶切位点。
|
s******s
发帖数: 13035 | 9 能用2A的用2A, 实在不行再想ires
GFP
【在 g*******3 的大作中提到】
: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。
|
l**********1
发帖数: 5204 | 10 RE LZ
here you go
Plasmid Information
Toolbox-No. 114
Functional Description Retroviral expression vector derives from pMIG;
the GFP of the original IRES-GFP casette is exchanged with the enhanced cyan
flourescent protein. . The vector allows cloning of genes of interest on
the N-terminus of IRES for co-expression with CFP in cells.
web link:
http://www.bioss.uni-freiburg.de/toolbox/products.php?PL-62
then pls send mail to German side for it:
link:
http://www.bioss.uni-freiburg.de/toolbox/info.php?contact&osCsi
Ps:
LZ 有包子 就给个
CFP
【在 g*******3 的大作中提到】
: 说起来比较尴尬，找了一圈没找到谁有ires-CFP的载体，现在想把已经有的GFP换成CFP
: , 又不想设计Overlap primer,干脆加一个方便克隆的位点。先把IRES装进去（屁股后
: 面带个那个位点），然后再把头上加那个位点的CFP PCR产物装进去 （我们有个CFP的
: 老鼠，准备从基因组里直接把CFP,PCR出来）。就是图个方便，无他。
|
p*****e
发帖数: 93 | 11 you can, but you also have to be careful, the distance between the IRES and
the ATG is very important, which will influence the expression of the
following gene. therefore, you'd better use the same amount of bases as that
in the original vector.
GFP
【在 g*******3 的大作中提到】
: 想在中间加个酶切位点，应该没问题吧。我的理解不需要IRES序列后就非要直接跟GFP
: 的ATG start codon.不知道理解的对不对。急，请回答。
|
l**********1
发帖数: 5204 | 12 Mark.
and
that
【在 p*****e 的大作中提到】
: you can, but you also have to be careful, the distance between the IRES and
: the ATG is very important, which will influence the expression of the
: following gene. therefore, you'd better use the same amount of bases as that
: in the original vector.
:
: GFP
|
