h********n
发帖数: 4079 | 1 用P2A链接两个基因在plasmid里面表达, gene1-P2A-gene2,
是不是P2A后面紧接着gene2的ATG....
谢谢谢谢. |
w*e
发帖数: 740 | 2 第二个基因不要ATG；
同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon |
g*********5
发帖数: 2533 | |
h********n
发帖数: 4079 | 4 太感谢了.
【在 w*e 的大作中提到】
: 第二个基因不要ATG；
: 同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon
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r***e
发帖数: 2539 | 5 第二个基因可以有ATG。
要在同一个reading frame里面。
【在 w*e 的大作中提到】
: 第二个基因不要ATG；
: 同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon
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h********n
发帖数: 4079 | 6 BTW, 能说说为什么吗?
谢谢
【在 w*e 的大作中提到】
: 第二个基因不要ATG；
: 同时第一个基因也不要TAA, TAG, TGA这些stop codon
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c********r
发帖数: 189 | 7 Essentially, you are trying to generate a construct to expression a fused
protein (with a self cleaving poly-protein in the middle),so you need to
have two proteins in frame. ATG codes for Met. You can include atg, in my
opinion. |
w*e
发帖数: 740 | 8 因为翻译是从第一个基因的ATG开始的，只要这个准确，后面的只要in frame就没问题
了，而且一般met氨基酸最后都去掉了，所以我们lab的vector种第2个基因都没有用ATG.
【在 h********n 的大作中提到】
: BTW, 能说说为什么吗?
: 谢谢
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h********n
发帖数: 4079 | 9 这样. 那如果带上ATG会有问题吗?
ATG.
【在 w*e 的大作中提到】
: 因为翻译是从第一个基因的ATG开始的，只要这个准确，后面的只要in frame就没问题
: 了，而且一般met氨基酸最后都去掉了，所以我们lab的vector种第2个基因都没有用ATG.
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w*e
发帖数: 740 | 10 应该没有问题，多一个met后来也会被切掉。
我查了几个商用的2a vector，有的有第二个atg, 有的没有
【在 h********n 的大作中提到】
: 这样. 那如果带上ATG会有问题吗?
:
: ATG.
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d****d
发帖数: 214 | 11 Why do you want to use P2A? I suggest you use T2A. Before I use 2A strategy
to make a knockin mouse, I tested all four 2A and found that T2A is the best
(and the shortest too).
【在 h********n 的大作中提到】
: 用P2A链接两个基因在plasmid里面表达, gene1-P2A-gene2,
: 是不是P2A后面紧接着gene2的ATG....
: 谢谢谢谢.
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h********n
发帖数: 4079 | 12 thank you for your suggestion
strategy
best
【在 d****d 的大作中提到】
: Why do you want to use P2A? I suggest you use T2A. Before I use 2A strategy
: to make a knockin mouse, I tested all four 2A and found that T2A is the best
: (and the shortest too).
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g*********5
发帖数: 2533 | 13 P2A is the best according one plosone work.
http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.p
strategy
best
【在 d****d 的大作中提到】
: Why do you want to use P2A? I suggest you use T2A. Before I use 2A strategy
: to make a knockin mouse, I tested all four 2A and found that T2A is the best
: (and the shortest too).
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d****d
发帖数: 214 | 14 The difference might be due to different constructs were used for testing.
In this plosOne paper, the coding sequences of two fluorescent proteins are
linked by different 2A sequences. In my experiment, the coding sequences of
a membrane protein and a fluorescent protein were linked by different 2A
sequences. So it is possible that even the same 2A can function differently
in the context of different constructs.
【在 g*********5 的大作中提到】
: P2A is the best according one plosone work.
: http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal.p
:
: strategy
: best
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