s******8
发帖数: 233 | 1 刚开始做p53的一点调控，看了很多文章，想重复一下1个实验, p53 half life
我看别人２０分钟就能看到减少， 我到３小时也看不到， 用cycloheximide 50ug/ml.
我觉得可能和cell line有关， 用了不同的 cell line， 象２９３T， MCF７啦，应该
是p53 wildtype的， 但是都没有重复出２０分钟的half life
请求建议 | r***e
发帖数: 2539 | 2 哈哈，p53在293T中被stabilized by sv40 t-antigen.
做p53非常tricky，要读很多文献，先掌握基本情况。
新手不建议跳坑。
ml.
【在 s******8 的大作中提到】
: 刚开始做p53的一点调控，看了很多文章，想重复一下1个实验, p53 half life
: 我看别人２０分钟就能看到减少， 我到３小时也看不到， 用cycloheximide 50ug/ml.
: 我觉得可能和cell line有关， 用了不同的 cell line， 象２９３T， MCF７啦，应该
: 是p53 wildtype的， 但是都没有重复出２０分钟的half life
: 请求建议
| s******8
发帖数: 233 | 3 现在是非要碰这个呀， 有什么建议吗？
什么cell line好做p53啊？ | j******n
发帖数: 941 | 4 我做了几个细胞株大概都是4-6小时之间
你要是做癌细胞可要小心了 不少癌细胞株 尤其是乳腺癌的 表达极少 或突变检测不到 | r***e
发帖数: 2539 | 5 很多做p53的人用U2OS。
p53做了以后发文章也难，除非你老板是圈内人士。
【在 s******8 的大作中提到】
: 现在是非要碰这个呀， 有什么建议吗？
: 什么cell line好做p53啊？
| l**********1
发帖数: 5204 | 6 Re LZ:
try Stem Cell line: H9 hESCs
cited from
Das B. et al. (2012)
HIF-2a Suppresses p53 to Enhance the Stemness and Regenerative
Potential of Human Embryonic Stem Cells.
Stem Cells. 30: 1685-95.
>
hESC Culture and Induction of Hypoxia
Due permissions were obtained to culture hESCs both at Department
of Medicine, Stanford University (Stem Cell Research
Oversight protocol #285, director: BD) and at Department of
Laboratory Medicine and Pathobiology, Hospital for Sick Children.
BGO1 and H9 hESCs (WiCell Inc., Madison, WI, www.wi
cell.org) were expanded on Mitomycin-C (10 lg/ml; Sigma)-inactivated
mouse embryonic fibroblast (MEF) feeders, cultured in
knockout Dulbecco’s modified Eagle’s medium/F12 with
20% knockout serum replacement (KOSR, #12660012, and
#10828-028; Invitrogen Life Technologies, Grand Island, NY),
and 4 ng/ml FGF-2 (#PHG0024, Gibco, Life Technologies,
Grand Island, NY, www.invitrogen.com) as described elsewhere
[23, 24].
web link:
HTTP: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22689594
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【在 r***e 的大作中提到】
: 很多做p53的人用U2OS。
: p53做了以后发文章也难，除非你老板是圈内人士。
| i*****g
发帖数: 11893 | 7 p53这个蛋白被做烂了
几乎每一个氨基酸都被摸过了
前几年，还有个尾巴lys的methylation(acetylation) 还发了一篇 N or S article，
你可以想象被研究到什么程度 |
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