b****e
发帖数: 52 | 1 因为样品宝贵,取了一半脑做WB,一半固定(没有灌流),结果发现anti-mouse 2nd Ab识别
很多血管的非特异信号.请问有什么办法可以降低background吗?只能选择灌流吗?出生
几天(P10)的小鼠也能灌流吗? 谢谢了 |
S******9
发帖数: 2837 | 2 脑子如果灌注以后很容易没有背景的
10天的老鼠可以，直接左心室灌注，用30G的针头
现在可以试一下blocking buffer： 5%BSA+5%FBS+0.3%Triton 100 |
t******k
发帖数: 599 | |
g*****n
发帖数: 250 | 4 在一抗前，用anti-m 抗体封蔽。脑子都抠出来了，切一半做WB, 那还怎么灌？ |
b****e
发帖数: 52 | 5 谢谢大家.我现在用的是5%NGS,0.1%Tx100 blocking, 有什么区别吗? HRP coupled
anti-mouse Ab 可以用来做封蔽吗?我们lab没有uncoupled Ab. 1:5000 1hr? |
h*******o
发帖数: 4884 | 6 换个rabbit的抗体是最简单的方法
或者就像楼上说的，用anti－mouse IgG block |
g*****n
发帖数: 250 | 7 在5%NGS,0.1%Tx100溶液里加点抗体。NGS还得要。HRP coupled
anti-mouse Ab 可以用，只要你不用其底物来检测。1:500－1000 1hr。 |
w********r
发帖数: 1431 | |
