m*****r
发帖数: 1164 | 1 想用western blot做某蛋白膜在cytoplasma和plasma membrane的分布，请问大家推荐
用什么kit或者buffer。谢谢。 |
B*N
发帖数: 455 | 2 如果你只想分离膜和cytosol，用0.05%digitonin在细胞上打洞，一离心，cytosol会从
细胞内挤出来到buffer中。
如果你一定要提plasma membrane，你用220mM蔗糖溶液重悬细胞，然后用针头或者玻璃
杵匀浆，通过差速离心，可以分离。但是质膜和内质网分不开。
【在 m*****r 的大作中提到】
: 想用western blot做某蛋白膜在cytoplasma和plasma membrane的分布，请问大家推荐
: 用什么kit或者buffer。谢谢。
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m*****r
发帖数: 1164 | 3 有人用过thermal scientific的这个subcellular protein fractionation kit的么
http://www.piercenet.com/previews/2012-articles/subcellular-pro
【在 B*N 的大作中提到】
: 如果你只想分离膜和cytosol，用0.05%digitonin在细胞上打洞，一离心，cytosol会从
: 细胞内挤出来到buffer中。
: 如果你一定要提plasma membrane，你用220mM蔗糖溶液重悬细胞，然后用针头或者玻璃
: 杵匀浆，通过差速离心，可以分离。但是质膜和内质网分不开。
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r***e
发帖数: 2539 | 4 顶这个，没错。
其实都不要digitonin，直接上低渗buffer，我用0.1M TrisHCl, no salt。冰上放10分
钟。10万g离心，上清就是cytosol，pellet用含1% Triton 的buffer弄出membrane pro
tein。
【在 B*N 的大作中提到】
: 如果你只想分离膜和cytosol，用0.05%digitonin在细胞上打洞，一离心，cytosol会从
: 细胞内挤出来到buffer中。
: 如果你一定要提plasma membrane，你用220mM蔗糖溶液重悬细胞，然后用针头或者玻璃
: 杵匀浆，通过差速离心，可以分离。但是质膜和内质网分不开。
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