q****m
发帖数: 116 | 1 请教下大家，如果做一个基因的 overexpression stable clone 细胞，用药物筛选2周
多后拿到的阳性克隆细胞冻存后再次复苏或者后续用来做实验的话还需要再次加药筛选
吗？谢谢大家！ |
s******s
发帖数: 13035 | 2 如果你肯定是stable clone, 那就不用
【在 q****m 的大作中提到】
: 请教下大家，如果做一个基因的 overexpression stable clone 细胞，用药物筛选2周
: 多后拿到的阳性克隆细胞冻存后再次复苏或者后续用来做实验的话还需要再次加药筛选
: 吗？谢谢大家！
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w***a
发帖数: 1053 | |
f*c
发帖数: 2726 | 4 same
【在 w***a 的大作中提到】
: 我一般是用筛选浓度的一半去culture
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q****m
发帖数: 116 | 5 为什么要用筛选浓度的一半去培养？不会对细胞有影响吗？如果不用药的话
overexpression会降低吗？ |
a*******a
发帖数: 1240 | 6 哎。
肯定要加药maintain选择压力的。
即便如此，连续培养60天左右，stable expression也会消失。 |
s******s
发帖数: 13035 | 7 stable克隆已经整合染色体，那么DNA方面就不会有问题。
至于是不是加药，其实没啥意义，因为你选择的是抗性基因
表达，不是target基因表达。我的经验是，少用CMV, 最好用
2A加抗性基因，最好inducible
【在 a*******a 的大作中提到】
: 哎。
: 肯定要加药maintain选择压力的。
: 即便如此，连续培养60天左右，stable expression也会消失。
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