d****i
发帖数: 2346 | 1 Fu, Y., J. A. Foden, C. Khayter, M. L. Maeder, D. Reyon, J. K. Joung, and J.
D. Sander. 2013. High-frequency off-target mutagenesis induced by CRISPR-
cas nucleases in human cells. Nat Biotech advance online publication(June).
http://www.nature.com/nbt/journal/vaop/ncurrent/full/nbt.2623.h |
s*****g
发帖数: 87 | |
s******9
发帖数: 283 | 3 Can't expect much to let a very active bacterial nuclease lacking a
stringent proofreading activity play on a genome of 3 billion base pairs. |
l****y
发帖数: 398 | 4 Too bad!
J.
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8
【在 d****i 的大作中提到】
: Fu, Y., J. A. Foden, C. Khayter, M. L. Maeder, D. Reyon, J. K. Joung, and J.
: D. Sander. 2013. High-frequency off-target mutagenesis induced by CRISPR-
: cas nucleases in human cells. Nat Biotech advance online publication(June).
: http://www.nature.com/nbt/journal/vaop/ncurrent/full/nbt.2623.h
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r********e
发帖数: 84 | 5 大家认为有什么办法可以降低off-target effect吗？ |
d*****n
发帖数: 166 | 6 Make it less active?
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.8
【在 r********e 的大作中提到】
: 大家认为有什么办法可以降低off-target effect吗？
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H*******i
发帖数: 196 | 7 原核里面off-target 比例也类似么？ 弄一堆容易出现的off-target序列，放在生存
必须的基因里，但是target的序列条件致死（比如和一个筛选因子结合后致死）。然后
error-prone PCR crisper系统 电转不知
道可以不。。
【在 r********e 的大作中提到】
: 大家认为有什么办法可以降低off-target effect吗？
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M*****n
发帖数: 16729 | 8 昨天俺刚刚跟postdoc说了这么个project.
不过这东西拿grant也不容易，最好是让风投来做一个startup.
【在 H*******i 的大作中提到】
: 原核里面off-target 比例也类似么？ 弄一堆容易出现的off-target序列，放在生存
: 必须的基因里，但是target的序列条件致死（比如和一个筛选因子结合后致死）。然后
: error-prone PCR crisper系统 电转不知
: 道可以不。。
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t******y
发帖数: 716 | 9 我觉得CRISPR的特异性应该还行，至少从上述的Paper里20个碱基，只要3-4个以上有变
异，off target效应就急剧下降。 |
a*****n
发帖数: 2835 | 10 做细胞的话多选几个克隆，设计2－3个CRISPR，得到一致的表型就行了
做动物的话，得到杂合体后back cross几代应该就没事了
【在 t******y 的大作中提到】
: 我觉得CRISPR的特异性应该还行，至少从上述的Paper里20个碱基，只要3-4个以上有变
: 异，off target效应就急剧下降。
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b****r
发帖数: 17995 | 11 要这么麻烦的话，为何不用其他方法，反正都能搞出来，就看哪个时间成本低
【在 a*****n 的大作中提到】
: 做细胞的话多选几个克隆，设计2－3个CRISPR，得到一致的表型就行了
: 做动物的话，得到杂合体后back cross几代应该就没事了
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m***u
发帖数: 39 | 12 ankyrin说的对。其实siRNA和shRNA同样有这个问题，任何技术都不是万能的。 |
