w********a 发帖数: 324 | 1 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。
那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation
插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理??
谢谢! |
a***o 发帖数: 129 | 2 没这么干过,不过是个很有意思的问题。如果你的引物没有磷酸化标记,pcr产物末端
应该也不会有5'-P, 应该不会自联。建议lz试试看,把结果通知大家一下 |
b******n 发帖数: 4225 | 3 你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
否则一般的Ligase没法连上
ligation
【在 w********a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。 : 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation : 插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理?? : 谢谢!
|
w********a 发帖数: 324 | 4 OK. 那也就是说不用担心自链的问题了??、、
【在 b******n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸 : 否则一般的Ligase没法连上 : : ligation
|
s******s 发帖数: 13035 | 5 一般vector都不用去磷,因为严重影响连接效率。
我宁愿多screen几个colony
ligation
【在 w********a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。 : 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation : 插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理?? : 谢谢!
|
d**l 发帖数: 1546 | 6 no
ligation
【在 w********a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理,以防ligation的时候自链。 : 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物,在进行ligation : 插入insert之前,是不是最好也要进行去磷处理?? : 谢谢!
|