w********a
发帖数: 324 | 1 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
谢谢！ |
a***o
发帖数: 129 | 2 没这么干过，不过是个很有意思的问题。如果你的引物没有磷酸化标记，pcr产物末端
应该也不会有5'-P, 应该不会自联。建议lz试试看，把结果通知大家一下 |
b******n
发帖数: 4225 | 3 你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
否则一般的Ligase没法连上
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
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w********a
发帖数: 324 | 4 OK. 那也就是说不用担心自链的问题了？？、、
【在 b******n 的大作中提到】
: 你的引物得在合成的时候让公司给5'端加磷酸
: 否则一般的Ligase没法连上
:
: ligation
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s******s
发帖数: 13035 | 5 一般vector都不用去磷，因为严重影响连接效率。
我宁愿多screen几个colony
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
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d**l
发帖数: 1546 | 6 no
ligation
【在 w********a 的大作中提到】
: 一般Vector在酶切以后要进行去磷处理，以防ligation的时候自链。
: 那么我如果用PCR的方法扩增得到的blunt end的Vector的 PCR 产物，在进行ligation
: 插入insert之前，是不是最好也要进行去磷处理？？
: 谢谢！
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