w****o
发帖数: 781 | 1 目前的protocol是切一小块tissue放到lysis buffer里homogenize，超声，冰上裂解之
后离心取上清测蛋白浓度。存在的主要问题有两个：一是tissue里的脂类成分离心完会
在上面漂着，很难除干净；二是在取tissue的时候有时会混有血导致最后得到的不同
sample的lysate颜色不一致，干扰浓度的测定。请问大家有什么好的经验解决这两个问
题？或者有没有更好的protocol？目前主要在提取mouse mammary gland的tumor
tissue，非常感谢！ |
s*****i
发帖数: 315 | 2 除去脂是非常难的 （如果不用超速离心的话），我做过的就是加大体积，每次只取中
层，多离心几次。
出去血液比较简单，用心脏灌流术把血都洗掉就好了
操作方法就是把几十毫升ice-cold PBS 缓缓的从左心室用注射器打入，同时把右心房
用剪子剪断，把血液都冲出来。这种方法可以把绝大部分血细胞清除干净，但是对脾脏
无效，不知道为啥。
【在 w****o 的大作中提到】
: 目前的protocol是切一小块tissue放到lysis buffer里homogenize，超声，冰上裂解之
: 后离心取上清测蛋白浓度。存在的主要问题有两个：一是tissue里的脂类成分离心完会
: 在上面漂着，很难除干净；二是在取tissue的时候有时会混有血导致最后得到的不同
: sample的lysate颜色不一致，干扰浓度的测定。请问大家有什么好的经验解决这两个问
: 题？或者有没有更好的protocol？目前主要在提取mouse mammary gland的tumor
: tissue，非常感谢！
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y****i
发帖数: 2194 | 3 不要用枪，改用1ml注射器带针头伸到脂层下面去上清 可以取的很干净
【在 w****o 的大作中提到】
: 目前的protocol是切一小块tissue放到lysis buffer里homogenize，超声，冰上裂解之
: 后离心取上清测蛋白浓度。存在的主要问题有两个：一是tissue里的脂类成分离心完会
: 在上面漂着，很难除干净；二是在取tissue的时候有时会混有血导致最后得到的不同
: sample的lysate颜色不一致，干扰浓度的测定。请问大家有什么好的经验解决这两个问
: 题？或者有没有更好的protocol？目前主要在提取mouse mammary gland的tumor
: tissue，非常感谢！
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w****o
发帖数: 781 | 4 多谢！请问大家每次杀老鼠取tissue之前都做perfusion么？
【在 s*****i 的大作中提到】
: 除去脂是非常难的 （如果不用超速离心的话），我做过的就是加大体积，每次只取中
: 层，多离心几次。
: 出去血液比较简单，用心脏灌流术把血都洗掉就好了
: 操作方法就是把几十毫升ice-cold PBS 缓缓的从左心室用注射器打入，同时把右心房
: 用剪子剪断，把血液都冲出来。这种方法可以把绝大部分血细胞清除干净，但是对脾脏
: 无效，不知道为啥。
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w****o
发帖数: 781 | 5 good idea！多谢！
【在 y****i 的大作中提到】
: 不要用枪，改用1ml注射器带针头伸到脂层下面去上清 可以取的很干净
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s*****i
发帖数: 315 | 6 这个完全取决于你的实验目的啊，如果你发现血液干扰，当然要perfuse，如果无所谓
，当然怎么方便怎么来
【在 w****o 的大作中提到】
: 多谢！请问大家每次杀老鼠取tissue之前都做perfusion么？
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h*******o
发帖数: 4884 | 7 做不做perfusion, 要看实验设计，有些必须做，有些不能做 |
g*********5
发帖数: 2533 | 8 说说看那些试验需要，那些不需要呢 ？
【在 h*******o 的大作中提到】
: 做不做perfusion, 要看实验设计，有些必须做，有些不能做
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