w****o 发帖数: 781 | 1 目前的protocol是切一小块tissue放到lysis buffer里homogenize,超声,冰上裂解之
后离心取上清测蛋白浓度。存在的主要问题有两个:一是tissue里的脂类成分离心完会
在上面漂着,很难除干净;二是在取tissue的时候有时会混有血导致最后得到的不同
sample的lysate颜色不一致,干扰浓度的测定。请问大家有什么好的经验解决这两个问
题?或者有没有更好的protocol?目前主要在提取mouse mammary gland的tumor
tissue,非常感谢! |
s*****i 发帖数: 315 | 2 除去脂是非常难的 (如果不用超速离心的话),我做过的就是加大体积,每次只取中
层,多离心几次。
出去血液比较简单,用心脏灌流术把血都洗掉就好了
操作方法就是把几十毫升ice-cold PBS 缓缓的从左心室用注射器打入,同时把右心房
用剪子剪断,把血液都冲出来。这种方法可以把绝大部分血细胞清除干净,但是对脾脏
无效,不知道为啥。
【在 w****o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 目前的protocol是切一小块tissue放到lysis buffer里homogenize,超声,冰上裂解之 : 后离心取上清测蛋白浓度。存在的主要问题有两个:一是tissue里的脂类成分离心完会 : 在上面漂着,很难除干净;二是在取tissue的时候有时会混有血导致最后得到的不同 : sample的lysate颜色不一致,干扰浓度的测定。请问大家有什么好的经验解决这两个问 : 题?或者有没有更好的protocol?目前主要在提取mouse mammary gland的tumor : tissue,非常感谢!
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y****i 发帖数: 2194 | 3 不要用枪,改用1ml注射器带针头伸到脂层下面去上清 可以取的很干净
【在 w****o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 目前的protocol是切一小块tissue放到lysis buffer里homogenize,超声,冰上裂解之 : 后离心取上清测蛋白浓度。存在的主要问题有两个:一是tissue里的脂类成分离心完会 : 在上面漂着,很难除干净;二是在取tissue的时候有时会混有血导致最后得到的不同 : sample的lysate颜色不一致,干扰浓度的测定。请问大家有什么好的经验解决这两个问 : 题?或者有没有更好的protocol?目前主要在提取mouse mammary gland的tumor : tissue,非常感谢!
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w****o 发帖数: 781 | 4 多谢!请问大家每次杀老鼠取tissue之前都做perfusion么?
【在 s*****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 除去脂是非常难的 (如果不用超速离心的话),我做过的就是加大体积,每次只取中 : 层,多离心几次。 : 出去血液比较简单,用心脏灌流术把血都洗掉就好了 : 操作方法就是把几十毫升ice-cold PBS 缓缓的从左心室用注射器打入,同时把右心房 : 用剪子剪断,把血液都冲出来。这种方法可以把绝大部分血细胞清除干净,但是对脾脏 : 无效,不知道为啥。
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w****o 发帖数: 781 | 5 good idea!多谢!
【在 y****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 不要用枪,改用1ml注射器带针头伸到脂层下面去上清 可以取的很干净
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s*****i 发帖数: 315 | 6 这个完全取决于你的实验目的啊,如果你发现血液干扰,当然要perfuse,如果无所谓
,当然怎么方便怎么来
【在 w****o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 多谢!请问大家每次杀老鼠取tissue之前都做perfusion么?
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h*******o 发帖数: 4884 | 7 做不做perfusion, 要看实验设计,有些必须做,有些不能做 |
g*********5 发帖数: 2533 | 8 说说看那些试验需要,那些不需要呢 ?
【在 h*******o 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 做不做perfusion, 要看实验设计,有些必须做,有些不能做
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