D***e
发帖数: 44 | 1 本来我想这就是个小实验，检测细胞的吞噬作用。实验设想是，我用一种荧光颗粒，孵
育细胞不同时间和经过不同处理后，看哪种条件下细胞吞进去的多。细胞是贴壁生长的
，荧光孵育后我用Trypsin处理，冲洗多次，以确保没有会影响结果的荧光颗粒残留，
再去上Flow Cytometry。
以前没接触过Flow Cytometry。今天去了core facility，结果对方直接否定了我的方
案，说不够精确，要用更复杂的，又要染细胞膜，又要染细胞核，还要用indicator区
分到底是胞内还是胞外的，还要一个一个titration试。
我深深钦佩对方工作认真负责的态度，今天我也长了很多知识，理解到Flow Cytometry
是一门博大可深刻挖掘的技术。但无奈老板push，要求我这篇文章在一个月内投出去，
实在不行就去掉Flow Cytometry的部分。但我觉得有了还是加分的。
想听听大家的看法？ |
d***s
发帖数: 1062 | 2 你这是要用ImageStream吗？普通flow cytometry染核干嘛呀 |
D***e
发帖数: 44 | 3 是的，对方推荐用ImageStream。我开始只要求用一个简单的，结果对方说不reliable
之类的。我也搞不清了，像我这种实验目的有必要上个这么高端的吗？
【在 d***s 的大作中提到】
: 你这是要用ImageStream吗？普通flow cytometry染核干嘛呀
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m******5
发帖数: 1383 | 4 真是有人星夜赶考，有人天明辞官。
有imagestream为啥不用……我这里想用都没得用 |
D***e
发帖数: 44 | 5 我想用啊……关键是时间不允许了……
【在 m******5 的大作中提到】
: 真是有人星夜赶考，有人天明辞官。
: 有imagestream为啥不用……我这里想用都没得用
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x*****e
发帖数: 309 | 6 他可能给你更多的选择，我以前已用flow做过胞吞。我是消化下来，荧光标记的蛋白和
细部一起37度30-60min,用酸性的buffer洗掉表面接合的荧光标记蛋白，然后用flow定
量一下荧光强度。不过我同时结合confocal检测的胞吞后的亚细部定位。
Cytometry
【在 D***e 的大作中提到】
: 本来我想这就是个小实验，检测细胞的吞噬作用。实验设想是，我用一种荧光颗粒，孵
: 育细胞不同时间和经过不同处理后，看哪种条件下细胞吞进去的多。细胞是贴壁生长的
: ，荧光孵育后我用Trypsin处理，冲洗多次，以确保没有会影响结果的荧光颗粒残留，
: 再去上Flow Cytometry。
: 以前没接触过Flow Cytometry。今天去了core facility，结果对方直接否定了我的方
: 案，说不够精确，要用更复杂的，又要染细胞膜，又要染细胞核，还要用indicator区
: 分到底是胞内还是胞外的，还要一个一个titration试。
: 我深深钦佩对方工作认真负责的态度，今天我也长了很多知识，理解到Flow Cytometry
: 是一门博大可深刻挖掘的技术。但无奈老板push，要求我这篇文章在一个月内投出去，
: 实在不行就去掉Flow Cytometry的部分。但我觉得有了还是加分的。
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d***s
发帖数: 1062 | 7 也不怎么高端，数据分析很简单，一步一步软件都会引导你的。花的时间和flow
cytometry的时间差不多。
reliable
【在 D***e 的大作中提到】
: 是的，对方推荐用ImageStream。我开始只要求用一个简单的，结果对方说不reliable
: 之类的。我也搞不清了，像我这种实验目的有必要上个这么高端的吗？
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D***e
发帖数: 44 | 8 谢谢！我不怕数据分析，但听core facility的人说起来，前面的预实验和titration貌
似很花时间，怕来不及了。真的有那么复杂吗？比如说染核，还要求我进行好多的
Serial Dilutions
【在 d***s 的大作中提到】
: 也不怎么高端，数据分析很简单，一步一步软件都会引导你的。花的时间和flow
: cytometry的时间差不多。
:
: reliable
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l**********1
发帖数: 5204 | |
g*********9
发帖数: 3528 | 10 小实验就小做，做个样品，找个朋友小run一下。有阳性数据了，再考虑高端大气上档
次。
Cytometry
【在 D***e 的大作中提到】
: 本来我想这就是个小实验，检测细胞的吞噬作用。实验设想是，我用一种荧光颗粒，孵
: 育细胞不同时间和经过不同处理后，看哪种条件下细胞吞进去的多。细胞是贴壁生长的
: ，荧光孵育后我用Trypsin处理，冲洗多次，以确保没有会影响结果的荧光颗粒残留，
: 再去上Flow Cytometry。
: 以前没接触过Flow Cytometry。今天去了core facility，结果对方直接否定了我的方
: 案，说不够精确，要用更复杂的，又要染细胞膜，又要染细胞核，还要用indicator区
: 分到底是胞内还是胞外的，还要一个一个titration试。
: 我深深钦佩对方工作认真负责的态度，今天我也长了很多知识，理解到Flow Cytometry
: 是一门博大可深刻挖掘的技术。但无奈老板push，要求我这篇文章在一个月内投出去，
: 实在不行就去掉Flow Cytometry的部分。但我觉得有了还是加分的。
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D***e
发帖数: 44 | 11 谢谢啦
【在 g*********9 的大作中提到】
: 小实验就小做，做个样品，找个朋友小run一下。有阳性数据了，再考虑高端大气上档
: 次。
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: Cytometry
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