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Biology版 - Flow Cytometry到底有多复杂?
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Immunohistochemistry 只用有荧光标记的一抗效果怎样?谁能推荐一本flow cytometry 的书
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话题: cytometry话题: flow话题: 荧光话题: 细胞话题: 复杂
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1 (共1页)
D***e
发帖数: 44
1
本来我想这就是个小实验,检测细胞的吞噬作用。实验设想是,我用一种荧光颗粒,孵
育细胞不同时间和经过不同处理后,看哪种条件下细胞吞进去的多。细胞是贴壁生长的
,荧光孵育后我用Trypsin处理,冲洗多次,以确保没有会影响结果的荧光颗粒残留,
再去上Flow Cytometry。
以前没接触过Flow Cytometry。今天去了core facility,结果对方直接否定了我的方
案,说不够精确,要用更复杂的,又要染细胞膜,又要染细胞核,还要用indicator区
分到底是胞内还是胞外的,还要一个一个titration试。
我深深钦佩对方工作认真负责的态度,今天我也长了很多知识,理解到Flow Cytometry
是一门博大可深刻挖掘的技术。但无奈老板push,要求我这篇文章在一个月内投出去,
实在不行就去掉Flow Cytometry的部分。但我觉得有了还是加分的。
想听听大家的看法?
d***s
发帖数: 1062
2
你这是要用ImageStream吗?普通flow cytometry染核干嘛呀
D***e
发帖数: 44
3
是的,对方推荐用ImageStream。我开始只要求用一个简单的,结果对方说不reliable
之类的。我也搞不清了,像我这种实验目的有必要上个这么高端的吗?

【在 d***s 的大作中提到】
: 你这是要用ImageStream吗?普通flow cytometry染核干嘛呀
m******5
发帖数: 1383
4
真是有人星夜赶考,有人天明辞官。
有imagestream为啥不用……我这里想用都没得用
D***e
发帖数: 44
5
我想用啊……关键是时间不允许了……

【在 m******5 的大作中提到】
: 真是有人星夜赶考,有人天明辞官。
: 有imagestream为啥不用……我这里想用都没得用

x*****e
发帖数: 309
6
他可能给你更多的选择,我以前已用flow做过胞吞。我是消化下来,荧光标记的蛋白和
细部一起37度30-60min,用酸性的buffer洗掉表面接合的荧光标记蛋白,然后用flow定
量一下荧光强度。不过我同时结合confocal检测的胞吞后的亚细部定位。

Cytometry

【在 D***e 的大作中提到】
: 本来我想这就是个小实验,检测细胞的吞噬作用。实验设想是,我用一种荧光颗粒,孵
: 育细胞不同时间和经过不同处理后,看哪种条件下细胞吞进去的多。细胞是贴壁生长的
: ,荧光孵育后我用Trypsin处理,冲洗多次,以确保没有会影响结果的荧光颗粒残留,
: 再去上Flow Cytometry。
: 以前没接触过Flow Cytometry。今天去了core facility,结果对方直接否定了我的方
: 案,说不够精确,要用更复杂的,又要染细胞膜,又要染细胞核,还要用indicator区
: 分到底是胞内还是胞外的,还要一个一个titration试。
: 我深深钦佩对方工作认真负责的态度,今天我也长了很多知识,理解到Flow Cytometry
: 是一门博大可深刻挖掘的技术。但无奈老板push,要求我这篇文章在一个月内投出去,
: 实在不行就去掉Flow Cytometry的部分。但我觉得有了还是加分的。

d***s
发帖数: 1062
7
也不怎么高端,数据分析很简单,一步一步软件都会引导你的。花的时间和flow
cytometry的时间差不多。

reliable

【在 D***e 的大作中提到】
: 是的,对方推荐用ImageStream。我开始只要求用一个简单的,结果对方说不reliable
: 之类的。我也搞不清了,像我这种实验目的有必要上个这么高端的吗?

D***e
发帖数: 44
8
谢谢!我不怕数据分析,但听core facility的人说起来,前面的预实验和titration貌
似很花时间,怕来不及了。真的有那么复杂吗?比如说染核,还要求我进行好多的
Serial Dilutions

【在 d***s 的大作中提到】
: 也不怎么高端,数据分析很简单,一步一步软件都会引导你的。花的时间和flow
: cytometry的时间差不多。
:
: reliable

l**********1
发帖数: 5204
9
>比如说染核,还要求我进行好多的
of course,
pls refer,
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31849061.html
g*********9
发帖数: 3528
10
小实验就小做,做个样品,找个朋友小run一下。有阳性数据了,再考虑高端大气上档
次。

Cytometry

【在 D***e 的大作中提到】
: 本来我想这就是个小实验,检测细胞的吞噬作用。实验设想是,我用一种荧光颗粒,孵
: 育细胞不同时间和经过不同处理后,看哪种条件下细胞吞进去的多。细胞是贴壁生长的
: ,荧光孵育后我用Trypsin处理,冲洗多次,以确保没有会影响结果的荧光颗粒残留,
: 再去上Flow Cytometry。
: 以前没接触过Flow Cytometry。今天去了core facility,结果对方直接否定了我的方
: 案,说不够精确,要用更复杂的,又要染细胞膜,又要染细胞核,还要用indicator区
: 分到底是胞内还是胞外的,还要一个一个titration试。
: 我深深钦佩对方工作认真负责的态度,今天我也长了很多知识,理解到Flow Cytometry
: 是一门博大可深刻挖掘的技术。但无奈老板push,要求我这篇文章在一个月内投出去,
: 实在不行就去掉Flow Cytometry的部分。但我觉得有了还是加分的。

D***e
发帖数: 44
11
谢谢啦

【在 g*********9 的大作中提到】
: 小实验就小做,做个样品,找个朋友小run一下。有阳性数据了,再考虑高端大气上档
: 次。
:
: Cytometry

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