i*****e
发帖数: 633 | 1 大家好。有个解剖老鼠的问题想向高手请教。
我们有个课题是研究成年老鼠不同部分的CNS细胞的电生理。第一个问题就是如何分离
出各个部位的神经细胞。现在在做的是海马细胞和皮质细胞，我是新手，在学如何弄出
来皮质细胞，但是觉得很难。
一个原因是成年大鼠（几周大）的软脑膜已经和脑组织贴得很牢靠，不象胚胎老鼠那么
容易撕开。另一个原因是血管已经长到脑子里面去了。皮质就那么很薄的一层， 感觉
很难干净利落的剥下来。我们现在的做法是直接切下一块，连同脑膜和白质一起切成小
块，做组织消化，再过２００目筛子。其结果是有大量的杂质和碎片，不知道是什么东
西。
请问高手可以给我些指导吗？非常感谢！ |
h*******o
发帖数: 4884 | 2 Adult neuronal culture is indeed very tricky. And most of what you get is
debris.
But to dissect out cerebral cortex is easy. By 软脑膜, do you mean meninges?
You can actually start from inside. Use a sharp pair of tweezers to snip out
the meniges on the outside, then flip open the hemisphere, there you will
be able to identify hippocampus and cerebral cortex. You can use tweezers to
snip out cortical pieces.
There will be a lot of debris (actually the majority of the fresh tissue
culture will be debris but after a few days there will be neurons growing
and you can get rid of the debris by centrifuging.
It is very hard for us to do adult neuronal culture as the yield is low and
variabilities between different cultures are huge. We pretty much gave up on
adult neuronal culture. But it should be doable for electrophysiological
studies. |
i*****e
发帖数: 633 | 3 谢谢！请问你的意思是用镊子把皮质＂刮＂（snip）出来吗？我画了个草图。我不太明
白snip out的意思。
meninges?
out
to
【在 h*******o 的大作中提到】
: Adult neuronal culture is indeed very tricky. And most of what you get is
: debris.
: But to dissect out cerebral cortex is easy. By 软脑膜, do you mean meninges?
: You can actually start from inside. Use a sharp pair of tweezers to snip out
: the meniges on the outside, then flip open the hemisphere, there you will
: be able to identify hippocampus and cerebral cortex. You can use tweezers to
: snip out cortical pieces.
: There will be a lot of debris (actually the majority of the fresh tissue
: culture will be debris but after a few days there will be neurons growing
: and you can get rid of the debris by centrifuging.
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h*******o
发帖数: 4884 | 4 用带尖头的镊子夹出来
直接google的镊子图片，差不多类型的就行
【在 i*****e 的大作中提到】
: 谢谢！请问你的意思是用镊子把皮质＂刮＂（snip）出来吗？我画了个草图。我不太明
: 白snip out的意思。
:
: meninges?
: out
: to
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h*******o
发帖数: 4884 | |
i*****e
发帖数: 633 | 6 thank you so much!!!
【在 h*******o 的大作中提到】
: Greg Brewer 专门做这个的
: 你可以看看他的protocol
: http://www.nature.com/nprot/journal/v2/n6/abs/nprot.2007.207.ht
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i*****e
发帖数: 633 | |
T****u
发帖数: 424 | |
w******y
发帖数: 4871 | 9 当年做过这个实验，真是考验我的耐心啊，最后是培养microglia cell,那是9年前的一
个暑假在一个教授那里轮转所做的。用的就是这样的镊子还有手术刀片。我最后就没选
这位教授做我的导师。不过教授人太好了，最后5年前和2年前工作面试，她还给我写了
超级棒的推荐信，后来她圆满退休，好人有好报啊。
【在 h*******o 的大作中提到】
: 用带尖头的镊子夹出来
: 直接google的镊子图片，差不多类型的就行
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i*****e
发帖数: 633 | 10 原来你也做过。
话说虽然生物系里坏教授不少
可是绝大多数也都是好人啊
【在 w******y 的大作中提到】
: 当年做过这个实验，真是考验我的耐心啊，最后是培养microglia cell,那是9年前的一
: 个暑假在一个教授那里轮转所做的。用的就是这样的镊子还有手术刀片。我最后就没选
: 这位教授做我的导师。不过教授人太好了，最后5年前和2年前工作面试，她还给我写了
: 超级棒的推荐信，后来她圆满退休，好人有好报啊。
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j******n
发帖数: 941 | 11 成年小鼠的海马回好像就是拨开花卷样白质皮质 就藏在中间一小块 与周围其他脑组织
分离的挺好的 用镊子一夹就出来了 也不需要特别挖吧？不知道对不对 十年前做过一
阵子 |
h*******o
发帖数: 4884 | 12 恩，用gradient 会把debris去掉多不少
【在 i*****e 的大作中提到】
: protocol里用了gradient方法呀？
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i*****e
发帖数: 633 | 13 讨论得开心，再送你个漫画吧！周末愉快！
话说我家有个馋嘴的灰猫和一个nerdy的猫妈。。。
【在 h*******o 的大作中提到】
: 恩，用gradient 会把debris去掉多不少
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i*****e
发帖数: 633 | 14 我看同事剥海马，是用刀片切出来的。成年老鼠的脑组织都长在一起了，没有youtube
上显示的胎鼠好分离。
【在 j******n 的大作中提到】
: 成年小鼠的海马回好像就是拨开花卷样白质皮质 就藏在中间一小块 与周围其他脑组织
: 分离的挺好的 用镊子一夹就出来了 也不需要特别挖吧？不知道对不对 十年前做过一
: 阵子
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D*a
发帖数: 6830 | |
n****y
发帖数: 6260 | 16 你做电生理做的是acutely isolated cells 还是培养细胞，还是脑片？这个是完全不
同的技术范围。
要是acutely isolated, 看你的描述像是这个，那还真的就是用蛋白酶消化，然后打碎
然后记录。一般在显微镜下面，pyramidal cell 是非常好认的啊。这个技术应该很成
熟了，大家从上个世纪80年代就开始做了。
【在 i*****e 的大作中提到】
: 大家好。有个解剖老鼠的问题想向高手请教。
: 我们有个课题是研究成年老鼠不同部分的CNS细胞的电生理。第一个问题就是如何分离
: 出各个部位的神经细胞。现在在做的是海马细胞和皮质细胞，我是新手，在学如何弄出
: 来皮质细胞，但是觉得很难。
: 一个原因是成年大鼠（几周大）的软脑膜已经和脑组织贴得很牢靠，不象胚胎老鼠那么
: 容易撕开。另一个原因是血管已经长到脑子里面去了。皮质就那么很薄的一层， 感觉
: 很难干净利落的剥下来。我们现在的做法是直接切下一块，连同脑膜和白质一起切成小
: 块，做组织消化，再过２００目筛子。其结果是有大量的杂质和碎片，不知道是什么东
: 西。
: 请问高手可以给我些指导吗？非常感谢！
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