w********a
发帖数: 324 | 1 Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
吗？
多谢！ |
s******s
发帖数: 13035 | 2 扔掉。
buffer不值钱，值钱的是column。
kit
【在 w********a 的大作中提到】
: Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
: Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
: 的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
: 吗？
: 多谢！
|
s******y
发帖数: 28562 | 3 EZ BioResearch 的柱子是可以和qiagen 的混用的。
我们用过，效率其实比qiagen的还稍微高一些。
kit
【在 w********a 的大作中提到】
: Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
: Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
: 的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
: 吗？
: 多谢！
|
s******y
发帖数: 17729 | 4 直接扔掉
虽然可以和其他公司的混用，不管是PCR clean-up还是胶回收的，基本上所有的公司的
都是buffer有多柱子不够
kit
【在 w********a 的大作中提到】
: Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
: Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
: 的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
: 吗？
: 多谢！
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G*******a
发帖数: 414 | 5 buffer是Qiagen额外送给你多的，剩下直接扔掉就可以了。 |
s******y
发帖数: 28562 | 6 EZ BioResearch 可以直接订管子。还是比连溶液一起订稍微便宜了那么一点。
【在 s******y 的大作中提到】
: 直接扔掉
: 虽然可以和其他公司的混用，不管是PCR clean-up还是胶回收的，基本上所有的公司的
: 都是buffer有多柱子不够
:
: kit
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w********a
发帖数: 324 | 7 ok. 非常感谢！
我说的就是这个意思。单独订管子，把剩余的buffer利用起来。
【在 s******y 的大作中提到】
: EZ BioResearch 可以直接订管子。还是比连溶液一起订稍微便宜了那么一点。
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w********a
发帖数: 324 | 8
【在 w********a 的大作中提到】
: ok. 非常感谢！
: 我说的就是这个意思。单独订管子，把剩余的buffer利用起来。
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r******g
发帖数: 600 | 9 You can order columns and make the buffer on your own. All recipes are very
standard and available from Qiagen site. My homemade QF, QC, P1, P2 always
work well. |
w********a
发帖数: 324 | 10 Where do you order your columns, for the PCR clean-up and Gel-extraction
columns?
Thanks
very
【在 r******g 的大作中提到】
: You can order columns and make the buffer on your own. All recipes are very
: standard and available from Qiagen site. My homemade QF, QC, P1, P2 always
: work well.
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w********a
发帖数: 324 | 11 胖老师，您多久之前从 EZ BioResearch订过东西啊？我让秘书帮我定东西，他打电话
联系这个公司。接电话的人好像在一个人声嘈杂的地方，不像在办公室里，怕被骗，秘
书没敢订，呵呵
【在 s******y 的大作中提到】
: EZ BioResearch 可以直接订管子。还是比连溶液一起订稍微便宜了那么一点。
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g*********5
发帖数: 2533 | 12 胖老师??
【在 w********a 的大作中提到】
: 胖老师，您多久之前从 EZ BioResearch订过东西啊？我让秘书帮我定东西，他打电话
: 联系这个公司。接电话的人好像在一个人声嘈杂的地方，不像在办公室里，怕被骗，秘
: 书没敢订，呵呵
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x********e
发帖数: 35261 | 13 QIAGEN的buffer单买真不便宜
【在 s******s 的大作中提到】
: 扔掉。
: buffer不值钱，值钱的是column。
:
: kit
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h**********r
发帖数: 671 | 14 大多数不同公司的都可以混着用的，有时效果还更好。
你也可以用它来回收液体PCR，DNA酶切product。 |
R*****o
发帖数: 14902 | 15 I have reused qiaquick columns, and it worked fine.
rinse with water or tris at ph 8 in between samples. you can easily reuse
the columns for 5 times.
doesn't take a genius to figure this out
kit
【在 w********a 的大作中提到】
: Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
: Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
: 的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
: 吗？
: 多谢！
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m***0
发帖数: 7 | 16 我们一直都用miniprep的column来做pcr purification和gel extraction,虽然他们网
站上说不能通用，其实是可以的 |
r******g
发帖数: 600 | 17 我们学校的stockroom有卖的，qiagen官网也有miniprep的column卖啊
http://www.qiagen.com/products/catalog/sample-technologies/dna-
我只用miniprep的column，其他的什么gel extraction啊，pcr purification我都是用
的old school homemade的方法，便宜，也挺好用！ 就是可能慢一些！
【在 w********a 的大作中提到】
: Where do you order your columns, for the PCR clean-up and Gel-extraction
: columns?
: Thanks
:
: very
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r******g
发帖数: 600 | 18 thank you a lot. Know this for the first time.
【在 R*****o 的大作中提到】
: I have reused qiaquick columns, and it worked fine.
: rinse with water or tris at ph 8 in between samples. you can easily reuse
: the columns for 5 times.
: doesn't take a genius to figure this out
:
: kit
|
D***s
发帖数: 5613 | 19 买大瓶的，价格马马虎虎
让一些美国学生配那真是啥问题都能弄出来，而且搞得他们很frustrated，打击积极性
【在 x********e 的大作中提到】
: QIAGEN的buffer单买真不便宜
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r******y
发帖数: 21907 | 20 我们用macherey-nagel的，一德国公司，column buffer都可以单独定，也适用qiagen
的buffer,已经弃qiagen了。
kit
【在 w********a 的大作中提到】
: Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
: Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
: 的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
: 吗？
: 多谢！
|
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w********a
发帖数: 324 | 21 似乎这个公司的kit和column有些小贵啊。。
qiagen
【在 r******y 的大作中提到】
: 我们用macherey-nagel的，一德国公司，column buffer都可以单独定，也适用qiagen
: 的buffer,已经弃qiagen了。
:
: kit
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s*****g
发帖数: 7857 | 22 牛。真会过日子！
very
【在 r******g 的大作中提到】
: You can order columns and make the buffer on your own. All recipes are very
: standard and available from Qiagen site. My homemade QF, QC, P1, P2 always
: work well.
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s*****g
发帖数: 7857 | 23 是，美国本科学生和中国本科学生大提，中国学生结果很好，美国学生什么也没得到。
。。每一步还是紧跟中国学生一起做的。。。
【在 D***s 的大作中提到】
: 买大瓶的，价格马马虎虎
: 让一些美国学生配那真是啥问题都能弄出来，而且搞得他们很frustrated，打击积极性
|
s*****g
发帖数: 7857 | 24 你更牛！更会过日子！以后就跟你学了！
【在 R*****o 的大作中提到】
: I have reused qiaquick columns, and it worked fine.
: rinse with water or tris at ph 8 in between samples. you can easily reuse
: the columns for 5 times.
: doesn't take a genius to figure this out
:
: kit
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s******s
发帖数: 13035 | 25 reuse做克隆太ws了，倒是做酶切鉴定没问题。以前用过
真空一排八个的那种prepcolumn, 类似qiavac 96，都是reuse
无数遍。载体自连啥的都不用考虑，做不出的就小抽48个，
里面终归有对的
【在 R*****o 的大作中提到】
: I have reused qiaquick columns, and it worked fine.
: rinse with water or tris at ph 8 in between samples. you can easily reuse
: the columns for 5 times.
: doesn't take a genius to figure this out
:
: kit
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s******s
发帖数: 13035 | 26 你片段比较大问题不大，小片段容易丢光了
【在 m***0 的大作中提到】
: 我们一直都用miniprep的column来做pcr purification和gel extraction,虽然他们网
: 站上说不能通用，其实是可以的
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x********e
发帖数: 35261 | 27 。。。分人吧 跟国籍无关
【在 D***s 的大作中提到】
: 买大瓶的，价格马马虎虎
: 让一些美国学生配那真是啥问题都能弄出来，而且搞得他们很frustrated，打击积极性
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s******y
发帖数: 28562 | 28 我们在Suntronics 买的。但是直接从EZ BioResearch买应该也行（不过我们从来没有
直接在那里买过。。。）
【在 w********a 的大作中提到】
: 胖老师，您多久之前从 EZ BioResearch订过东西啊？我让秘书帮我定东西，他打电话
: 联系这个公司。接电话的人好像在一个人声嘈杂的地方，不像在办公室里，怕被骗，秘
: 书没敢订，呵呵
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w********a
发帖数: 324 | 29 更新一下：
从EZ bioresearch定了Gel extraction的spin column，用了一下感觉还行。准备从他
家再定点别的试试。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们在Suntronics 买的。但是直接从EZ BioResearch买应该也行（不过我们从来没有
: 直接在那里买过。。。）
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b***2
发帖数: 348 | |
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b*****s
发帖数: 169 | 31 做酶切鉴定或是测序，我从来不用kit，效果是good enough，已经测序有近2000个样品
了。只有做转染才用kit。
我的方法是挑菌落到1ml LB in 1.5ml eppendorf tube, culture for 16h, 吸取50-
100ul culture in 96-well plate 放在4oC 用于以后正确克隆的扩大培养。离心
13200rpm for
0.5min. The pellet is resuspended in 200ul P1, then P2, then P3, spin at
13200rpm for 15min after stored at 4oC for 30min. add equal volume
isopropanol to the supernate in a new tube, spin for 15min, wash with 70%
ETOH. 然后溶于50-100ul水或是TE即可，浓度在150ng/ul 左右。一天做96个克隆是不
难的。
这种样品测序时我试过两个公司，同一样品，genewiz可以得到23个有用的序列from 24
samples，但另外一个公司只有6个可用，没有再试别的公司。
【在 s******s 的大作中提到】
: 你片段比较大问题不大，小片段容易丢光了
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M*****n
发帖数: 16729 | 32 问问大家这些column是不是RNAse free的？
我们要经常做RNA in vitro synthesis，需要用column来clean up DNA template.
大家有没有用的比较好的column (必须是 RNAase free)
thanks. |
M*****n
发帖数: 16729 | |
s******s
发帖数: 13035 | 34 柱子多数应该没问题把，倒是buffer可能问题大点。
你不放心的话，最后的wash和elute自己用RNAse free的水配
一下，有点残留也该洗掉了
【在 M*****n 的大作中提到】
: 问问大家这些column是不是RNAse free的？
: 我们要经常做RNA in vitro synthesis，需要用column来clean up DNA template.
: 大家有没有用的比较好的column (必须是 RNAase free)
: thanks.
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j***x
发帖数: 1469 | 35 不同切口的片段，可以反复用用过的柱子。
kit
【在 w********a 的大作中提到】
: Qiagen kit 经常是column用完了，但是还剩很多buffer。
: Miniprep kit 的column是可以单独定的。但是PCR clean-up或者Gel extraction kit
: 的column不能单独定。不知道大家是怎么处理的？有其他公司的column可以作为替代品
: 吗？
: 多谢！
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r******g
发帖数: 600 | 36 我就用碱法提啊，并且还挺好用呢~ 比如我上次screen了50个克隆，你想想，要是用
qiagen柱子，这一下就要花几十块，我用old school的方法，省了不少钱，也多花不了
多少时间~ 其实我也就是帮老板省点钱呢！
我一般是确定了clone以后，再用柱子来purify for sequencing
我们实验室，也从来不要gel extraction, 我也是用的old school dialysis tubing
purification的办法~ 挺好用的，只要实验work，什么办法都是好的！
其实用old school的办法，可以搞明白到底technique是怎么work 的啊，有问题的时候
，比较容易troubleshooting！
【在 M*****n 的大作中提到】
: 原来现在还是有人用碱法小提质粒，
|
s******s
发帖数: 13035 | 37 要省钱省时间都不用碱法。我以前做过热解发，直接从plate用牙签
把colony刮下来，放到裂解液里煮个几分钟就可以上样了，省了所有
抽提步骤，而且省了一天的试管培养时间。坏处是，没有片段太小
比较难区分，因为没有酶切
【在 r******g 的大作中提到】
: 我就用碱法提啊，并且还挺好用呢~ 比如我上次screen了50个克隆，你想想，要是用
: qiagen柱子，这一下就要花几十块，我用old school的方法，省了不少钱，也多花不了
: 多少时间~ 其实我也就是帮老板省点钱呢！
: 我一般是确定了clone以后，再用柱子来purify for sequencing
: 我们实验室，也从来不要gel extraction, 我也是用的old school dialysis tubing
: purification的办法~ 挺好用的，只要实验work，什么办法都是好的！
: 其实用old school的办法，可以搞明白到底technique是怎么work 的啊，有问题的时候
: ，比较容易troubleshooting！
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r******g
发帖数: 600 | 38 你这种情况只适用于pcr，不能酶切啊～ 我做过这个啊，直接把colony刮下来，放到水
里面boil一下，直接pcr，最方便了～
完全同意！
【在 s******s 的大作中提到】
: 要省钱省时间都不用碱法。我以前做过热解发，直接从plate用牙签
: 把colony刮下来，放到裂解液里煮个几分钟就可以上样了，省了所有
: 抽提步骤，而且省了一天的试管培养时间。坏处是，没有片段太小
: 比较难区分，因为没有酶切
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s******s
发帖数: 13035 | 39 非也非也。你说的是colony pcr，这个我也经常在96孔板里做。
我说的是更加lazy的，连PCR步骤都没有，直接煮过就走胶，哈哈
【在 r******g 的大作中提到】
: 你这种情况只适用于pcr，不能酶切啊～ 我做过这个啊，直接把colony刮下来，放到水
: 里面boil一下，直接pcr，最方便了～
: 完全同意！
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s******y
发帖数: 28562 | 40 PCR的话我都是直接把colony刮下来放进PCR tube里面。
【在 r******g 的大作中提到】
: 你这种情况只适用于pcr，不能酶切啊～ 我做过这个啊，直接把colony刮下来，放到水
: 里面boil一下，直接pcr，最方便了～
: 完全同意！
|
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j****x
发帖数: 1704 | 41 没太明白这个的目的是啥？鉴定克隆？
【在 s******s 的大作中提到】
: 要省钱省时间都不用碱法。我以前做过热解发，直接从plate用牙签
: 把colony刮下来，放到裂解液里煮个几分钟就可以上样了，省了所有
: 抽提步骤，而且省了一天的试管培养时间。坏处是，没有片段太小
: 比较难区分，因为没有酶切
|
s******s
发帖数: 13035 | 42 对啊。
【在 j****x 的大作中提到】
: 没太明白这个的目的是啥？鉴定克隆？
|
j****x
发帖数: 1704 | 43 那抽出来的应该是超螺旋DNA吧，怎么判断size呢?另外，如果刮colony直接热解的话，
就算鉴定出来正确的克隆咋扩增呢？
【在 s******s 的大作中提到】
: 对啊。
|
s******s
发帖数: 13035 | 44 也有线性的。单独一个判断size不行，不过load一排和边上比比也是很明显的。
刮的时候用mark笔在plate后面圈上1，2，3，4，回头再挑点培养就行了。
这个的好处就是快
【在 j****x 的大作中提到】
: 那抽出来的应该是超螺旋DNA吧，怎么判断size呢?另外，如果刮colony直接热解的话，
: 就算鉴定出来正确的克隆咋扩增呢？
|
m*****z
发帖数: 1451 | 45 哥们，你这做96个至少半天时间搭进去了吧。。。
时间这么不值钱啊
【在 b*****s 的大作中提到】
: 做酶切鉴定或是测序，我从来不用kit，效果是good enough，已经测序有近2000个样品
: 了。只有做转染才用kit。
: 我的方法是挑菌落到1ml LB in 1.5ml eppendorf tube, culture for 16h, 吸取50-
: 100ul culture in 96-well plate 放在4oC 用于以后正确克隆的扩大培养。离心
: 13200rpm for
: 0.5min. The pellet is resuspended in 200ul P1, then P2, then P3, spin at
: 13200rpm for 15min after stored at 4oC for 30min. add equal volume
: isopropanol to the supernate in a new tube, spin for 15min, wash with 70%
: ETOH. 然后溶于50-100ul水或是TE即可，浓度在150ng/ul 左右。一天做96个克隆是不
: 难的。
|
m*****z
发帖数: 1451 | 46 便宜好用的kit大概5毛钱一个，你这50个克隆就25块，用这个钱来雇打工的
undergraduate两个小时还装不了几盒枪头洗几个瓶子呢。。。。
【在 r******g 的大作中提到】
: 我就用碱法提啊，并且还挺好用呢~ 比如我上次screen了50个克隆，你想想，要是用
: qiagen柱子，这一下就要花几十块，我用old school的方法，省了不少钱，也多花不了
: 多少时间~ 其实我也就是帮老板省点钱呢！
: 我一般是确定了clone以后，再用柱子来purify for sequencing
: 我们实验室，也从来不要gel extraction, 我也是用的old school dialysis tubing
: purification的办法~ 挺好用的，只要实验work，什么办法都是好的！
: 其实用old school的办法，可以搞明白到底technique是怎么work 的啊，有问题的时候
: ，比较容易troubleshooting！
|
b*****s
发帖数: 169 | 47 请问你用kit抽96个质粒要花多长时间？从离心菌液开始算。求推荐kit，以后备用。
我们实验室没用过那种专门96孔提质粒的kit，他们用普通的miniprep kit，比我这个
麻烦啊。
【在 m*****z 的大作中提到】
: 哥们，你这做96个至少半天时间搭进去了吧。。。
: 时间这么不值钱啊
|
M*****n
发帖数: 16729 | 48 什么牌子5毛钱一个？俺想买点用用
谢谢
【在 m*****z 的大作中提到】
: 便宜好用的kit大概5毛钱一个，你这50个克隆就25块，用这个钱来雇打工的
: undergraduate两个小时还装不了几盒枪头洗几个瓶子呢。。。。
|
r******g
发帖数: 600 | 49 我直接 把colony刮下来，然后 先在一个新的 petri dish上面点一下，然后再全部放
到eppendorf的水里面，然后直接boil一下，然后直接pcr，跑出来结果以后，直接找那
个新的petri dish上面的那个colony～ 然后，再miniculture
【在 j****x 的大作中提到】
: 那抽出来的应该是超螺旋DNA吧，怎么判断size呢?另外，如果刮colony直接热解的话，
: 就算鉴定出来正确的克隆咋扩增呢？
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m*****z
发帖数: 1451 | 50 zyppy miniprep是$336/400reactions,经常8折，算下来0.67一个，这个kit操作时间短
。genejet的大概$250/250reactions,碰上BOGO的时候屯上，就是5毛一个。不过我个人
倾向用zyppy，操作省一半，贵点也认了。
【在 M*****n 的大作中提到】
: 什么牌子5毛钱一个？俺想买点用用
: 谢谢
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m*****z
发帖数: 1451 | 51 用zyppy的话大概15-20分钟24个样品吧，普通的P1,2,3的kit，我得用40分钟以上，只
要是开盖关盖操作太费手了。。。
【在 b*****s 的大作中提到】
: 请问你用kit抽96个质粒要花多长时间？从离心菌液开始算。求推荐kit，以后备用。
: 我们实验室没用过那种专门96孔提质粒的kit，他们用普通的miniprep kit，比我这个
: 麻烦啊。
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b*****s
发帖数: 169 | 52 谢谢!看了下操作步骤，确实比较省时间。
【在 m*****z 的大作中提到】
: 用zyppy的话大概15-20分钟24个样品吧，普通的P1,2,3的kit，我得用40分钟以上，只
: 要是开盖关盖操作太费手了。。。
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w********a
发帖数: 324 | 53 要是把用过的column全部收集，一起autoclave一下再reuse呢？是否可行？
【在 R*****o 的大作中提到】
: I have reused qiaquick columns, and it worked fine.
: rinse with water or tris at ph 8 in between samples. you can easily reuse
: the columns for 5 times.
: doesn't take a genius to figure this out
:
: kit
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