w********a
发帖数: 324 | 1 一直以来的一个问题：
PCR产物如果用Qiagen kit切胶提纯后，再作为Template,用Neb的Q5或者Phusion继续做
PCR （尤其条带比较长的时候），经常做不出来。打电话问了一下Neb的technician。
他们说他们也发现了这个问题
。他们觉得可能是Qiagen kit提纯后，最后的elute里面有某种inhibitor影响了后续
PCR的反应。但是他们也没有想出有效的办法来解决这个问题。
不知道版上的牛牛们有没有遇到类似的问题？是怎么解决的？另外，有别的公司的Gel
extraction kit会避免这个问题吗？
多谢！ |
x********e
发帖数: 35261 | 2 zymo 我再也不用QIAGEN的胶回收kit了，各种问题
Gel
【在 w********a 的大作中提到】
: 一直以来的一个问题：
: PCR产物如果用Qiagen kit切胶提纯后，再作为Template,用Neb的Q5或者Phusion继续做
: PCR （尤其条带比较长的时候），经常做不出来。打电话问了一下Neb的technician。
: 他们说他们也发现了这个问题
: 。他们觉得可能是Qiagen kit提纯后，最后的elute里面有某种inhibitor影响了后续
: PCR的反应。但是他们也没有想出有效的办法来解决这个问题。
: 不知道版上的牛牛们有没有遇到类似的问题？是怎么解决的？另外，有别的公司的Gel
: extraction kit会避免这个问题吗？
: 多谢！
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a*******a
发帖数: 4233 | 3 最后一步你用水还是elution buffer?
我猜用水就好了
Gel
【在 w********a 的大作中提到】
: 一直以来的一个问题：
: PCR产物如果用Qiagen kit切胶提纯后，再作为Template,用Neb的Q5或者Phusion继续做
: PCR （尤其条带比较长的时候），经常做不出来。打电话问了一下Neb的technician。
: 他们说他们也发现了这个问题
: 。他们觉得可能是Qiagen kit提纯后，最后的elute里面有某种inhibitor影响了后续
: PCR的反应。但是他们也没有想出有效的办法来解决这个问题。
: 不知道版上的牛牛们有没有遇到类似的问题？是怎么解决的？另外，有别的公司的Gel
: extraction kit会避免这个问题吗？
: 多谢！
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X***l
发帖数: 456 | 4 你可以试试clonetech的，我觉得比qiagen的好，至少我用从来没出过问题 |
s******s
发帖数: 13035 | 5 我说了有20遍了，qiagen gel extraction以后，通通过一遍minElute浓缩换buffer
Gel
【在 w********a 的大作中提到】
: 一直以来的一个问题：
: PCR产物如果用Qiagen kit切胶提纯后，再作为Template,用Neb的Q5或者Phusion继续做
: PCR （尤其条带比较长的时候），经常做不出来。打电话问了一下Neb的technician。
: 他们说他们也发现了这个问题
: 。他们觉得可能是Qiagen kit提纯后，最后的elute里面有某种inhibitor影响了后续
: PCR的反应。但是他们也没有想出有效的办法来解决这个问题。
: 不知道版上的牛牛们有没有遇到类似的问题？是怎么解决的？另外，有别的公司的Gel
: extraction kit会避免这个问题吗？
: 多谢！
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w********a
发帖数: 324 | 6 一直用水。但还是有这个问题。
【在 a*******a 的大作中提到】
: 最后一步你用水还是elution buffer?
: 我猜用水就好了
:
: Gel
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w********a
发帖数: 324 | 7 你是说搞两遍吗？一般的Qiagen gel kit搞一遍，再用MiniElute的column搞一遍？
钱啊！MiniElute kit好贵啊！
【在 s******s 的大作中提到】
: 我说了有20遍了，qiagen gel extraction以后，通通过一遍minElute浓缩换buffer
:
: Gel
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a*******a
发帖数: 4233 | 8 是么。，， 额
我以前在国内用天根的加q5一直挺好的，到了美国换了q家的就不行了。。
【在 w********a 的大作中提到】
: 一直用水。但还是有这个问题。
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H*g
发帖数: 2333 | 9 PCR产物为什么要用切胶提纯，而不直接用Qiagen PCR Purification Kit提纯？
Gel
【在 w********a 的大作中提到】
: 一直以来的一个问题：
: PCR产物如果用Qiagen kit切胶提纯后，再作为Template,用Neb的Q5或者Phusion继续做
: PCR （尤其条带比较长的时候），经常做不出来。打电话问了一下Neb的technician。
: 他们说他们也发现了这个问题
: 。他们觉得可能是Qiagen kit提纯后，最后的elute里面有某种inhibitor影响了后续
: PCR的反应。但是他们也没有想出有效的办法来解决这个问题。
: 不知道版上的牛牛们有没有遇到类似的问题？是怎么解决的？另外，有别的公司的Gel
: extraction kit会避免这个问题吗？
: 多谢！
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M******g
发帖数: 152 | 10 Probably you got too much salt in your DNA after the qiagen gel kit.
Use PE washed twice and in each PE wash, after you add PE, let it stay for 2
-3 min before you spin. |
x********e
发帖数: 35261 | 11 话说Tiagen是山寨版吗？我在国内用得也挺好，上QIAGEN死活有问题。
【在 a*******a 的大作中提到】
: 是么。，， 额
: 我以前在国内用天根的加q5一直挺好的，到了美国换了q家的就不行了。。
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a*******a
发帖数: 4233 | 12 很多年前被q家收购了，他们销售说用的柱子都是一样的。
【在 x********e 的大作中提到】
: 话说Tiagen是山寨版吗？我在国内用得也挺好，上QIAGEN死活有问题。
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H*g
发帖数: 2333 | 13 It may be due to the remaining agarose and its residues in the elution. Try
Qiagen PCR Purification Kit to purify your products. It may solve your
problem.
Gel
【在 w********a 的大作中提到】
: 一直以来的一个问题：
: PCR产物如果用Qiagen kit切胶提纯后，再作为Template,用Neb的Q5或者Phusion继续做
: PCR （尤其条带比较长的时候），经常做不出来。打电话问了一下Neb的technician。
: 他们说他们也发现了这个问题
: 。他们觉得可能是Qiagen kit提纯后，最后的elute里面有某种inhibitor影响了后续
: PCR的反应。但是他们也没有想出有效的办法来解决这个问题。
: 不知道版上的牛牛们有没有遇到类似的问题？是怎么解决的？另外，有别的公司的Gel
: extraction kit会避免这个问题吗？
: 多谢！
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x********e
发帖数: 35261 | 14 lz既然说要胶回收做PCR，大概率是有non-specific bands。
Try
【在 H*g 的大作中提到】
: It may be due to the remaining agarose and its residues in the elution. Try
: Qiagen PCR Purification Kit to purify your products. It may solve your
: problem.
:
: Gel
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