d****i
发帖数: 2346 | 1 以前都是tissue裂解以后lysate放在-80冻着，第二天再拿出来定量，溶解要一些时间
。问一下有没有人把lysate （with inhibitor cocktail）放在cold room过一晚上？
会不会降解？
谢谢！ |
j******i
发帖数: 939 | 2 我觉得没问题啊。牛奶四度都能放一周呢。
【在 d****i 的大作中提到】
: 以前都是tissue裂解以后lysate放在-80冻着，第二天再拿出来定量，溶解要一些时间
: 。问一下有没有人把lysate （with inhibitor cocktail）放在cold room过一晚上？
: 会不会降解？
: 谢谢！
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s*****g
发帖数: 7857 | 3 应该没有问题。因为裂解液里也有很多化学的inhibitor.
跑完的膜啥的不夜访四度么？要是那么娇气，cell signaling的抗体就别卖了。 |
d****i
发帖数: 2346 | 4
牛奶里面应该没有细胞内那么多各种protease。。。。。。。
【在 j******i 的大作中提到】
: 我觉得没问题啊。牛奶四度都能放一周呢。
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d****i
发帖数: 2346 | 5
跑完的膜上各种蛋白都分开了，即使与某种protease接触也是极少量的接触，所以比较
安全。
【在 s*****g 的大作中提到】
: 应该没有问题。因为裂解液里也有很多化学的inhibitor.
: 跑完的膜啥的不夜访四度么？要是那么娇气，cell signaling的抗体就别卖了。
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s*****g
发帖数: 7857 | 6 我们实验室烙印把裂解液室温过夜。因为是病人样品，不舍得扔，第二天就跑胶了。结
果好好的。(不推荐这么做啊！)
细胞免疫荧光染色不也有放了抗体，4度过夜的么。
另外蛋白离心也是四度啊。如果死度就玩完了，这种提取方法也就不那么robust了
还有IP-WB不也四度过夜么（我也是放了inhibitor cocktail）？ |
m***g
发帖数: 22 | |
t**l
发帖数: 109 | 8 感觉没问题啊。做CHIP, IP的时候 protein都是incubation overnight |
d****i
发帖数: 2346 | 9 非常感谢大家！还是没敢。。。。。打算找一个不重要的lysate对比一下。 |
