d****i 发帖数: 2346 | 1 以前都是tissue裂解以后lysate放在-80冻着,第二天再拿出来定量,溶解要一些时间
。问一下有没有人把lysate (with inhibitor cocktail)放在cold room过一晚上?
会不会降解?
谢谢! |
j******i 发帖数: 939 | 2 我觉得没问题啊。牛奶四度都能放一周呢。
【在 d****i 的大作中提到】 : 以前都是tissue裂解以后lysate放在-80冻着,第二天再拿出来定量,溶解要一些时间 : 。问一下有没有人把lysate (with inhibitor cocktail)放在cold room过一晚上? : 会不会降解? : 谢谢!
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s*****g 发帖数: 7857 | 3 应该没有问题。因为裂解液里也有很多化学的inhibitor.
跑完的膜啥的不夜访四度么?要是那么娇气,cell signaling的抗体就别卖了。 |
d****i 发帖数: 2346 | 4
牛奶里面应该没有细胞内那么多各种protease。。。。。。。
【在 j******i 的大作中提到】 : 我觉得没问题啊。牛奶四度都能放一周呢。
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d****i 发帖数: 2346 | 5
跑完的膜上各种蛋白都分开了,即使与某种protease接触也是极少量的接触,所以比较
安全。
【在 s*****g 的大作中提到】 : 应该没有问题。因为裂解液里也有很多化学的inhibitor. : 跑完的膜啥的不夜访四度么?要是那么娇气,cell signaling的抗体就别卖了。
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s*****g 发帖数: 7857 | 6 我们实验室烙印把裂解液室温过夜。因为是病人样品,不舍得扔,第二天就跑胶了。结
果好好的。(不推荐这么做啊!)
细胞免疫荧光染色不也有放了抗体,4度过夜的么。
另外蛋白离心也是四度啊。如果死度就玩完了,这种提取方法也就不那么robust了
还有IP-WB不也四度过夜么(我也是放了inhibitor cocktail)? |
m***g 发帖数: 22 | |
t**l 发帖数: 109 | 8 感觉没问题啊。做CHIP, IP的时候 protein都是incubation overnight |
d****i 发帖数: 2346 | 9 非常感谢大家!还是没敢。。。。。打算找一个不重要的lysate对比一下。 |