c********e 发帖数: 215 | 1 很多paper说用了各种autophagy inducer,然后看到了p62 upregulation, LC3-II
upregulation, induced autophagy, 也有很多paper说抑制了autophagy看到p62的
accumulation。这个p62上调到底是说induced还是suppressed autophagy。越看越糊涂
。 |
c********e 发帖数: 215 | 2 我自己做发现用某一种东西induce了autophagy以后,increased LC3-II for sure, 但
也有很明显的p62 upregulation. |
c******g 发帖数: 49 | 3
p62可以结合ubiquitinated cargo,同时又结合LC3,所以autophagy inducation 可能
看到p62 upregulation。如果autophagosome-lysosome 被抑制,可以看到p62
accumulation.
【在 c********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 很多paper说用了各种autophagy inducer,然后看到了p62 upregulation, LC3-II : upregulation, induced autophagy, 也有很多paper说抑制了autophagy看到p62的 : accumulation。这个p62上调到底是说induced还是suppressed autophagy。越看越糊涂 : 。
|
c********e 发帖数: 215 | 4 如果我in vitro看到加了药A,有LC3-II conversion, p62 upregulation, 在in vivo
的实验中做了p62的IHC,也看到了处理后的upregulation,我可以说in vivo也证明药A
induce autophagy吗? |
x*****e 发帖数: 309 | 5 你这情况好像是autophagy flux blockage. chloroquine CQ是溶酶体抑制剂,你可以
处理的时候加CQ, 如果cq能够增强你的处理引起的LC3II 增加,那就是诱导autophagy,
如果没什么变化,那就可能是LC3II的降解受抑制导致LC3II增加,就可能是autophagy
flux blockage:fusion of autophagosome and lysosome is inhibited。p62是
autophagy的特异性受体,自噬增加会导致p62降解增加,减少p62蛋白量;flux受抑制
则会降低p62的降解,增加p62的蛋白量,所以你的情况看着像是flux blockage。 另外
,检测的时间点很关键的,没有记错的话饥饿2小时的时候LC3II 上升,4小时之后则
降低。 推荐:Guidelines for the use and interpretation of assays for
monitoring autophagy |
c********e 发帖数: 215 | 6 这也是我confuse的地方,in vitro的data很clear, in vivo p62 IHC upregulation是
处理了好多次,一个月以后收的sample。有这个paper说,很多人只用p62做autophagy
flux的底物,实际上,多等一段时间,p62表达又自己恢复了
https://www.landesbioscience.com/journals/autophagy/2012AUTO0626R1.pdf
【在 x*****e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你这情况好像是autophagy flux blockage. chloroquine CQ是溶酶体抑制剂,你可以 : 处理的时候加CQ, 如果cq能够增强你的处理引起的LC3II 增加,那就是诱导autophagy, : 如果没什么变化,那就可能是LC3II的降解受抑制导致LC3II增加,就可能是autophagy : flux blockage:fusion of autophagosome and lysosome is inhibited。p62是 : autophagy的特异性受体,自噬增加会导致p62降解增加,减少p62蛋白量;flux受抑制 : 则会降低p62的降解,增加p62的蛋白量,所以你的情况看着像是flux blockage。 另外 : ,检测的时间点很关键的,没有记错的话饥饿2小时的时候LC3II 上升,4小时之后则 : 降低。 推荐:Guidelines for the use and interpretation of assays for : monitoring autophagy
|
d*2 发帖数: 35 | 7 根据多年的经验,p62不consistent,很多时候跟lc3-ii共进退。用lc3的wb和gfp-lc3
就行了。 |
s****l 发帖数: 395 | 8 测一下p62转录水平有没有变化
【在 c********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 很多paper说用了各种autophagy inducer,然后看到了p62 upregulation, LC3-II : upregulation, induced autophagy, 也有很多paper说抑制了autophagy看到p62的 : accumulation。这个p62上调到底是说induced还是suppressed autophagy。越看越糊涂 : 。
|
c********e 发帖数: 215 | 9 谢谢,我也发现是这样,GFP-LC3, LC3-II,p62 in vitro都有上调,但我需要(老板
非要)看下in
vivo的IHC,很明显处理后p62的IHC表达增强。我可以说in vivo的finding也支持这个
要induce autophagy吗?
lc3
【在 d*2 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 根据多年的经验,p62不consistent,很多时候跟lc3-ii共进退。用lc3的wb和gfp-lc3 : 就行了。
|
d*2 发帖数: 35 | 10 1. 首先看GFP-LC3, LC3-II,这个你做过了
2. In vitro 处理Bafilomycin或者Chloroquine,然后再看GFP-LC3, LC-II,这个
可以知道Flux
3. 或者用RFP-GFP-LC3看Flux
4. In vivo,染色看LC-3,如果可以的话,注射Bafilomycin,再看LC-3II的WB。或
者找reporter小鼠。P62可看可不看,毕竟能提供的信息量不多。
【在 c********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 谢谢,我也发现是这样,GFP-LC3, LC3-II,p62 in vitro都有上调,但我需要(老板 : 非要)看下in : vivo的IHC,很明显处理后p62的IHC表达增强。我可以说in vivo的finding也支持这个 : 要induce autophagy吗? : : lc3
|