c********e
发帖数: 215 | 1 很多paper说用了各种autophagy inducer，然后看到了p62 upregulation, LC3-II
upregulation, induced autophagy, 也有很多paper说抑制了autophagy看到p62的
accumulation。这个p62上调到底是说induced还是suppressed autophagy。越看越糊涂
。 |
c********e
发帖数: 215 | 2 我自己做发现用某一种东西induce了autophagy以后，increased LC3-II for sure, 但
也有很明显的p62 upregulation. |
c******g
发帖数: 49 | 3
p62可以结合ubiquitinated cargo,同时又结合LC3，所以autophagy inducation 可能
看到p62 upregulation。如果autophagosome-lysosome 被抑制，可以看到p62
accumulation.
【在 c********e 的大作中提到】
: 很多paper说用了各种autophagy inducer，然后看到了p62 upregulation, LC3-II
: upregulation, induced autophagy, 也有很多paper说抑制了autophagy看到p62的
: accumulation。这个p62上调到底是说induced还是suppressed autophagy。越看越糊涂
: 。
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c********e
发帖数: 215 | 4 如果我in vitro看到加了药A，有LC3-II conversion, p62 upregulation, 在in vivo
的实验中做了p62的IHC，也看到了处理后的upregulation，我可以说in vivo也证明药A
induce autophagy吗？ |
x*****e
发帖数: 309 | 5 你这情况好像是autophagy flux blockage. chloroquine CQ是溶酶体抑制剂，你可以
处理的时候加CQ, 如果cq能够增强你的处理引起的LC3II 增加，那就是诱导autophagy,
如果没什么变化，那就可能是LC3II的降解受抑制导致LC3II增加，就可能是autophagy
flux blockage：fusion of autophagosome and lysosome is inhibited。p62是
autophagy的特异性受体，自噬增加会导致p62降解增加，减少p62蛋白量；flux受抑制
则会降低p62的降解，增加p62的蛋白量，所以你的情况看着像是flux blockage。 另外
，检测的时间点很关键的，没有记错的话饥饿2小时的时候ＬC3II 上升，4小时之后则
降低。 推荐：Guidelines for the use and interpretation of assays for
monitoring autophagy |
c********e
发帖数: 215 | 6 这也是我confuse的地方，in vitro的data很clear, in vivo p62 IHC upregulation是
处理了好多次，一个月以后收的sample。有这个paper说，很多人只用p62做autophagy
flux的底物，实际上，多等一段时间，p62表达又自己恢复了
https://www.landesbioscience.com/journals/autophagy/2012AUTO0626R1.pdf
【在 x*****e 的大作中提到】
: 你这情况好像是autophagy flux blockage. chloroquine CQ是溶酶体抑制剂，你可以
: 处理的时候加CQ, 如果cq能够增强你的处理引起的LC3II 增加，那就是诱导autophagy,
: 如果没什么变化，那就可能是LC3II的降解受抑制导致LC3II增加，就可能是autophagy
: flux blockage：fusion of autophagosome and lysosome is inhibited。p62是
: autophagy的特异性受体，自噬增加会导致p62降解增加，减少p62蛋白量；flux受抑制
: 则会降低p62的降解，增加p62的蛋白量，所以你的情况看着像是flux blockage。 另外
: ，检测的时间点很关键的，没有记错的话饥饿2小时的时候ＬC3II 上升，4小时之后则
: 降低。 推荐：Guidelines for the use and interpretation of assays for
: monitoring autophagy
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d*2
发帖数: 35 | 7 根据多年的经验，p62不consistent，很多时候跟lc3-ii共进退。用lc3的wb和gfp-lc3
就行了。 |
s****l
发帖数: 395 | 8 测一下p62转录水平有没有变化
【在 c********e 的大作中提到】
: 很多paper说用了各种autophagy inducer，然后看到了p62 upregulation, LC3-II
: upregulation, induced autophagy, 也有很多paper说抑制了autophagy看到p62的
: accumulation。这个p62上调到底是说induced还是suppressed autophagy。越看越糊涂
: 。
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c********e
发帖数: 215 | 9 谢谢，我也发现是这样，GFP-LC3, LC3-II，p62 in vitro都有上调，但我需要（老板
非要）看下in
vivo的IHC，很明显处理后p62的IHC表达增强。我可以说in vivo的finding也支持这个
要induce autophagy吗？
lc3
【在 d*2 的大作中提到】
: 根据多年的经验，p62不consistent，很多时候跟lc3-ii共进退。用lc3的wb和gfp-lc3
: 就行了。
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d*2
发帖数: 35 | 10 1. 首先看GFP－LC3， LC3-II，这个你做过了
2. In vitro 处理Bafilomycin或者Chloroquine，然后再看GFP－LC3， LC－II，这个
可以知道Flux
3. 或者用RFP－GFP－LC3看Flux
4. In vivo，染色看LC－3，如果可以的话，注射Bafilomycin，再看LC－3II的WB。或
者找reporter小鼠。P62可看可不看，毕竟能提供的信息量不多。
【在 c********e 的大作中提到】
: 谢谢，我也发现是这样，GFP-LC3, LC3-II，p62 in vitro都有上调，但我需要（老板
: 非要）看下in
: vivo的IHC，很明显处理后p62的IHC表达增强。我可以说in vivo的finding也支持这个
: 要induce autophagy吗？
:
: lc3
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