a********u
发帖数: 325 | 1 要用4－15％gradient胶跑样品，同时要native的。我做好的胶当蓝色的考马斯亮兰的
前沿跑到接近下端三分之一处时，就完全扭曲了，看上去就像是山峦起伏，怀疑是15％
的胶先凝了，而且没有横向分布好，于是降低15％胶里的TEMED和APS用量，但是改善不
大。做了很多次，改变倒胶的速度，而且倒胶时横向移动杯子，让胶流下时更均匀点儿
，但是都没用。
各位高手有没有好办法解决这个问题？ |
v**********m
发帖数: 5516 | 2 花钱去biorad买，这种破事不应该去操心。
【在 a********u 的大作中提到】
: 要用4－15％gradient胶跑样品，同时要native的。我做好的胶当蓝色的考马斯亮兰的
: 前沿跑到接近下端三分之一处时，就完全扭曲了，看上去就像是山峦起伏，怀疑是15％
: 的胶先凝了，而且没有横向分布好，于是降低15％胶里的TEMED和APS用量，但是改善不
: 大。做了很多次，改变倒胶的速度，而且倒胶时横向移动杯子，让胶流下时更均匀点儿
: ，但是都没用。
: 各位高手有没有好办法解决这个问题？
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a********u
发帖数: 325 | 3 楼上说得轻松啊，可是老板不出钱，就让自己做啊。
有没有自己做过梯度胶的高手救救在下啊？ |
r******g
发帖数: 600 | 4 BN 的 gradient gel很难做的，自己去买啊
想办法convince老板，容易得多啊 |
s******y
发帖数: 28562 | 5 梯度胶需要仪器才能灌好。手动干是发疯的人才会做的行为。
胶虽然贵但是你的时间更贵
【在 a********u 的大作中提到】
: 楼上说得轻松啊，可是老板不出钱，就让自己做啊。
: 有没有自己做过梯度胶的高手救救在下啊？
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v**********m
发帖数: 5516 | 6 换老板。以小见大，此老板一没有生化基本知识还做生化实验，二没有金钱大局观。
即使你想真献身生物， 继续混下去会浪费你的科研生命。
【在 a********u 的大作中提到】
: 楼上说得轻松啊，可是老板不出钱，就让自己做啊。
: 有没有自己做过梯度胶的高手救救在下啊？
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g*********5
发帖数: 2533 | |
P**********e
发帖数: 739 | |
s******y
发帖数: 28562 | 9 最近我用的是Genscript 的precast gradient gel. 质量还不错。而且关键是只需要4
块钱一片，比大部分公司便宜了一倍。你不妨和你老板说说，让他买这个。
唯一要注意的是。他们的胶虽然直接可以放在Biorad 的tank 里，但是必须用SDS-MOPS
buffer跑 （和invitrogen 的类似）。要放在invitrogen的tank 里也行，但是要加一
个adapter.
【在 a********u 的大作中提到】
: 要用4－15％gradient胶跑样品，同时要native的。我做好的胶当蓝色的考马斯亮兰的
: 前沿跑到接近下端三分之一处时，就完全扭曲了，看上去就像是山峦起伏，怀疑是15％
: 的胶先凝了，而且没有横向分布好，于是降低15％胶里的TEMED和APS用量，但是改善不
: 大。做了很多次，改变倒胶的速度，而且倒胶时横向移动杯子，让胶流下时更均匀点儿
: ，但是都没用。
: 各位高手有没有好办法解决这个问题？
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a********u
发帖数: 325 | 10 谢谢楼上各位大侠，尤其谢谢胖头鱼的详细信息。那个胶我倒腾到今天，后来也借了别
人的专门做蔗糖梯度离心的那种chamber，用来做梯度胶，参考了youtube和一些视频文
献的方法，但是悲摧的没有任何进展，还是一到下三分之一的地方就山峦了
。决定放弃了，明天找老板摊牌，不买我也没办法了。 |
T****i
发帖数: 15191 | 11 胖老大总有好料。
4
MOPS
【在 s******y 的大作中提到】
: 最近我用的是Genscript 的precast gradient gel. 质量还不错。而且关键是只需要4
: 块钱一片，比大部分公司便宜了一倍。你不妨和你老板说说，让他买这个。
: 唯一要注意的是。他们的胶虽然直接可以放在Biorad 的tank 里，但是必须用SDS-MOPS
: buffer跑 （和invitrogen 的类似）。要放在invitrogen的tank 里也行，但是要加一
: 个adapter.
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