r******k
发帖数: 446 | 1 各位大神 请教个问题，
小弟要要check一个蛋白的磷酸化水平，
1. block 膜的时候 能用5%的milk 吗？ 还是必须要用5%的BSA？
2. incubate 一抗的时候 还需要dilute在5%的BSA吗？ 还是直接TBST也行？
多谢！！ |
h*******o
发帖数: 4884 | 2 个人经验不是
cell signal的抗体一般product sheet上面都建议BSA
我一直都用 pierce的superblock 目前为止还没有遇到做不出来而BSA做出来的情况
in cu ba te的时候建议用block 的配 直接用tbst 杂带可能会多
一些 |
B*****l
发帖数: 1078 | 3 看你什么抗体， cell signal一般建议BSA， sigma 一般建议milk， SC都是milk， 我
一般懒都直接用milk， 个别background 比较高， 别的一般无所谓， 就incubate 在
blocking buffer 里面， milk 也好， bsa 也好， 和这些关系没有那么大， 主要磷
酸化的是sample为主， 你sample处理／冻融上面处理不当， 或者本身表达就就问题的
话， bsa界的hermes 也木有用阿 |
s*********y
发帖数: 292 | 4 至少买过30个磷酸化抗体。牛奶和BSA都用过，一般都没啥问题
碰到过一个磷酸化抗体可以和结合牛奶里面的蛋白，杂出来一张黑膜。这种情况下只能
用BSA
【在 r******k 的大作中提到】
: 各位大神 请教个问题，
: 小弟要要check一个蛋白的磷酸化水平，
: 1. block 膜的时候 能用5%的milk 吗？ 还是必须要用5%的BSA？
: 2. incubate 一抗的时候 还需要dilute在5%的BSA吗？ 还是直接TBST也行？
: 多谢！！
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s*****i
发帖数: 315 | 5 pTyr的抗体必须用bsa block 和 bsa做1抗buffer, 二抗可以用milk
其他的，特别是特异蛋白特异位点的抗体，可以用milk，milk的背景低
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
【在 r******k 的大作中提到】
: 各位大神 请教个问题，
: 小弟要要check一个蛋白的磷酸化水平，
: 1. block 膜的时候 能用5%的milk 吗？ 还是必须要用5%的BSA？
: 2. incubate 一抗的时候 还需要dilute在5%的BSA吗？ 还是直接TBST也行？
: 多谢！！
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r******k
发帖数: 446 | 6 好 谢谢
我做了 我的抗体是识别特异位点的一个tyr磷酸化抗体，用牛奶block， 然后直接
tbst incubate一抗，没啥问题。
【在 s*****i 的大作中提到】
: pTyr的抗体必须用bsa block 和 bsa做1抗buffer, 二抗可以用milk
: 其他的，特别是特异蛋白特异位点的抗体，可以用milk，milk的背景低
:
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7
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g*********5
发帖数: 2533 | 7 would you please talk about "sample处理／冻融上面处理"? thanks
在
【在 B*****l 的大作中提到】
: 看你什么抗体， cell signal一般建议BSA， sigma 一般建议milk， SC都是milk， 我
: 一般懒都直接用milk， 个别background 比较高， 别的一般无所谓， 就incubate 在
: blocking buffer 里面， milk 也好， bsa 也好， 和这些关系没有那么大， 主要磷
: 酸化的是sample为主， 你sample处理／冻融上面处理不当， 或者本身表达就就问题的
: 话， bsa界的hermes 也木有用阿
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