大家现在构建质粒，都用什么办法？ - Biology版 - 未名存档

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Biology版 - 大家现在构建质粒，都用什么办法？

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相关话题的讨论汇总
话题: 双酶切话题: 构建话题: 质粒话题: 连接话题: 办法

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F*****8 发帖数: 243	1 双酶切连接载体不是很简单吗？难道传统的双酶切连接策略已经过时了吗？现在有什么更先进的方法？
H*******i 发帖数: 196	2 双酶切连接，CPEC，golden gate，Gibson assembly（SLIC SLiCE）没有过时的方法，只有合适的方法
s******s 发帖数: 13035	3 双酶切能用，但是比较大的问题是 1. 要PCR，引入突变，需要反复测序 2. PCR片段，酶切片段，载体片段需要回收，增加许多step 3. 需要考虑读框，片段越多越复杂。 4. 大规模clone （多种片段进入同一载体，或者同一片段进入多种载体）效率低下。我三五年前经常做克隆。当时常见的方法就是，凡事能拿到gateway的，统统gateway；需要改造的，改造部分合成，用gibson assembly，然后gateway；改造比较多的，全部合成。其实生物破刀说工资少，其实每天人工加overhead也要$200。很想不通有些老板就是愿意让手下多费一个礼拜反复做酶切测序，也不愿意花钱买，或者用gateway。【在 F*****8 的大作中提到】 : 双酶切连接载体不是很简单吗？难道传统的双酶切连接策略已经过时了吗？ : 现在有什么更先进的方法？
H*******i 发帖数: 196	4 LS不是那么说，看你构建目的。如果你的plasmid模块化很好，而且需要做大量组合性的尝试，双酶切连接很方便，而且后续构建是不需要PCR的。

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