V******t
发帖数: 444 | 1 用BCA？得稀释多少倍啊
2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
那么多SDS BME 会干扰啊。 |
s******s
发帖数: 13035 | 2 记得先沉淀下来，再换buffer？
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
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d****i
发帖数: 2346 | 3 你的配方跟biorad的不一样？
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
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e****s
发帖数: 1125 | 4 好像可以只加SDS来裂解细胞，
SDS在0.1%以下，对检测结果的干扰就不大了。一般测总蛋白，起码稀释100-500倍，
SDS浓度就不高了。跑胶的时候再和正常的Laemmi buffer混起来。
.8.
【在 V******t 的大作中提到】
: 用BCA？得稀释多少倍啊
: 2X laemmli buffer： Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-
: mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.
: 那么多SDS BME 会干扰啊。
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V******t
发帖数: 444 | 5 照着sigma官网的配方配的啊
【在 d****i 的大作中提到】
: 你的配方跟biorad的不一样？
:
: .8.
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V******t
发帖数: 444 | 6 TCA沉淀？有必要吗
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得先沉淀下来，再换buffer？
:
: .8.
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V******t
发帖数: 444 | 7 48个样品 。。。
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得先沉淀下来，再换buffer？
:
: .8.
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m*******u
发帖数: 173 | 8 pierce 660 nm works well. |
f*******d
发帖数: 92 | 9 还没有人提到Bca assay reduced sample compatible. |
d****i
发帖数: 2346 | 10
The kit enables you to measure protein concentration in samples that contain
thiol-reductants dithiothreitol (DTT) and 2-mercaptoethanol (BME), and
comes with 20 96-well microplates.
https://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/23252
【在 f*******d 的大作中提到】
: 还没有人提到Bca assay reduced sample compatible.
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g*********r
发帖数: 59 | 11 I used this protocol many years ago. YOu may want to give it a try,
> Load 5ul standards or samples onto NC membrance, air dry for 5min
> wash membrane with 50% Methanol for 5min,
> stain with amido black for 15 min
> wash membrane with 50% Methol for about 30min, until background clear
> air dry for 20-30min ( not too dry)
> cut dot with punch and disolve inabout 200-400ul 0.1N NaOH , dark for
30min, read at 600nm
Good lucks! |
