V******t
发帖数: 444 | 1 不小心放在室温3个小时。没事吧
理论上所有蛋白都变性了吧？ |
d****i
发帖数: 2346 | 2 不会，煮过之后理论上蛋白酶都变性了。我经常在室温一放就是一天。 |
s******y
发帖数: 28562 | 3 会！
不会酶降解但是会出现化学降解，因为laemmli buffer是一个碱性溶液，会自发水解蛋
白。
不过3个小时应该还有救。如果是过夜，直接扔了算了。
【在 V******t 的大作中提到】
: 不小心放在室温3个小时。没事吧
: 理论上所有蛋白都变性了吧？
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s******y
发帖数: 28562 | 4 这样是不对的。正确保存方法是用液氮速冻后放-20度保存。
【在 d****i 的大作中提到】
: 不会，煮过之后理论上蛋白酶都变性了。我经常在室温一放就是一天。
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v**********m
发帖数: 5516 | 5 会smear的。LS胖老师的话要听。
【在 d****i 的大作中提到】
: 不会，煮过之后理论上蛋白酶都变性了。我经常在室温一放就是一天。
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a******g
发帖数: 71 | 6 peptide bond是amide bond，理论上是非常稳定的，只有强酸或者强碱催化下加热才能
水解，某些特定的序列，比如Asp-Pro这种，可以由于侧链之间的反应导致peptide
bond cleavage，但是即使是这样的反应在室温和偏中性pH下也是很缓慢的。如果SDS样
品煮完之后在一天之内有显著降解那要怀疑一下是不是有什么残存的蛋白酶活性。 |
d****i
发帖数: 2346 | 7 学习了，非常感谢！以后还是小心点好。
生物版我喜欢这种帖子，讨厌各种黑啊什么的。
【在 a******g 的大作中提到】
: peptide bond是amide bond，理论上是非常稳定的，只有强酸或者强碱催化下加热才能
: 水解，某些特定的序列，比如Asp-Pro这种，可以由于侧链之间的反应导致peptide
: bond cleavage，但是即使是这样的反应在室温和偏中性pH下也是很缓慢的。如果SDS样
: 品煮完之后在一天之内有显著降解那要怀疑一下是不是有什么残存的蛋白酶活性。
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v**********m
发帖数: 5516 | 8 稳定是相对的，降解不全是肽键水解。氧化，交联，异构化，光降解等蛋白降解途径无
处不在。西方杂交特别敏感，很容易产生misleading的数据。
同意胖头鱼的做法，处理完就立即跑胶，否则液氮加低温冰箱保存。
【在 a******g 的大作中提到】
: peptide bond是amide bond，理论上是非常稳定的，只有强酸或者强碱催化下加热才能
: 水解，某些特定的序列，比如Asp-Pro这种，可以由于侧链之间的反应导致peptide
: bond cleavage，但是即使是这样的反应在室温和偏中性pH下也是很缓慢的。如果SDS样
: 品煮完之后在一天之内有显著降解那要怀疑一下是不是有什么残存的蛋白酶活性。
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v**********m
发帖数: 5516 | 9 除跑胶这种体力活外，你要多读nih的公开政策，免得被学校老师卖了还不知道。
这里被nih和老板黑过的人多，不免有些怒气。
你老板的经费可以上RO1 report查，可以查到该领域谁的经费最多，谁做得最前沿，或
最实用。
【在 d****i 的大作中提到】
: 学习了，非常感谢！以后还是小心点好。
: 生物版我喜欢这种帖子，讨厌各种黑啊什么的。
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d****i
发帖数: 2346 | 10
谢谢！这个有link吗？
【在 v**********m 的大作中提到】
: 除跑胶这种体力活外，你要多读nih的公开政策，免得被学校老师卖了还不知道。
: 这里被nih和老板黑过的人多，不免有些怒气。
: 你老板的经费可以上RO1 report查，可以查到该领域谁的经费最多，谁做得最前沿，或
: 最实用。
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v**********m
发帖数: 5516 | 11 http://report.nih.gov/
【在 d****i 的大作中提到】
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: 谢谢！这个有link吗？
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d****i
发帖数: 2346 | 12
非常感谢！我去搜搜看。有问题再来问。
【在 v**********m 的大作中提到】
: http://report.nih.gov/
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r******k
发帖数: 446 | 13 sunny老师 一定要液氮速冻吗？ 直接放-20 或者-80不行吗？
有的时候有事儿 把lysis 直接放-80 或者-20 第二天再家sds buffer boil 好像也没
啥问题。
【在 s******y 的大作中提到】
: 这样是不对的。正确保存方法是用液氮速冻后放-20度保存。
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s******y
发帖数: 28562 | 14 用液氮速冻是为了防止慢慢冷冻的过程中产生盐过浓的现象，这样会促进蛋白水解。
【在 r******k 的大作中提到】
: sunny老师 一定要液氮速冻吗？ 直接放-20 或者-80不行吗？
: 有的时候有事儿 把lysis 直接放-80 或者-20 第二天再家sds buffer boil 好像也没
: 啥问题。
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r*******y
发帖数: 48 | 15 Just freeze it at -20 is fine. |
