b*****n
发帖数: 1841 | 1 看别人的文章，同组肿瘤大小非常一致，但是在自己手里总是大小不一。
我们在肿瘤细胞注射的时候已经尽量保持一致了，比如位置，下针深浅等等，但是还是
大小不一，有的同组会差别几倍的重量。
不知道熟悉这个实验的朋友有什么经验传授一下。
谢谢！ |
s******y
发帖数: 28562 | 2 能一致就奇怪了。这个东西就是差异很大的，主要在于你打针的时候不是每次都能打进
同样多的细胞的。
不过，注意一下以下几个东西会有帮助：
1。抽细胞之前一定要重新晃一晃悬浮一下。
2。抽完细胞之后立刻注射，千万不要等，不然细胞就又沉下来了。注射的时候最好把
老鼠尽量接近和地面垂直角度（只能说尽量，不要让老鼠感到不舒服而挣扎的程度为止
），让你的针头走向也尽量接近和地面垂直的角度，这样大部分细胞才能打进去。
【在 b*****n 的大作中提到】
: 看别人的文章，同组肿瘤大小非常一致，但是在自己手里总是大小不一。
: 我们在肿瘤细胞注射的时候已经尽量保持一致了，比如位置，下针深浅等等，但是还是
: 大小不一，有的同组会差别几倍的重量。
: 不知道熟悉这个实验的朋友有什么经验传授一下。
: 谢谢！
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D***a
发帖数: 516 | 3 另外一点经验：如果你的细胞一百万个就能成瘤，注射一千万。 |
a*******a
发帖数: 4233 | 4 细胞消化彻底一点
注射的时候找到体侧的皮褶进针，扎深点，慢慢拔针。这样不容易被挤出来，然后多打
一点
有些肿瘤细胞可以打的相当一致。
【在 b*****n 的大作中提到】
: 看别人的文章，同组肿瘤大小非常一致，但是在自己手里总是大小不一。
: 我们在肿瘤细胞注射的时候已经尽量保持一致了，比如位置，下针深浅等等，但是还是
: 大小不一，有的同组会差别几倍的重量。
: 不知道熟悉这个实验的朋友有什么经验传授一下。
: 谢谢！
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l***y
发帖数: 638 | 5 多打几个，挑差不多的做实验
【在 b*****n 的大作中提到】
: 看别人的文章，同组肿瘤大小非常一致，但是在自己手里总是大小不一。
: 我们在肿瘤细胞注射的时候已经尽量保持一致了，比如位置，下针深浅等等，但是还是
: 大小不一，有的同组会差别几倍的重量。
: 不知道熟悉这个实验的朋友有什么经验传授一下。
: 谢谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 6 能不能多解释一下这个？
如果注射一千万，会不会导致瘤子长得太快而看不出实验组和对照组的差别？
【在 D***a 的大作中提到】
: 另外一点经验：如果你的细胞一百万个就能成瘤，注射一千万。
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D***a
发帖数: 516 | 7 没什么科学依据，就是个人经验。如果细胞注射的少，肿瘤要一个月才长大，大小肯定
不均匀。长得越快的大小越均匀。
【在 s******y 的大作中提到】
: 能不能多解释一下这个？
: 如果注射一千万，会不会导致瘤子长得太快而看不出实验组和对照组的差别？
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A******y
发帖数: 2041 | 8 This is how I do it. You inject cells with or without matrix gel. You want
to make sure the xenograft establishes itself and start treatment at around
100mm3 (entering log growth phase). That's how you establish the baseline
value and day 0 for each mouse. The experiment can be staggered for mice
within the same group. I just love when people tell me that they started
treatment right after cell injection without establishing the tumor baseline
because I can just reject the paper based on bad procedures. |
x**********h
发帖数: 36 | 9 我也想搭车问一下，做过裸鼠肿瘤实验的，都是怎么测肿瘤大小的，我们公司很小，没
有很ｆａｎｃｙ的荧光检测或者ｌａｓｅｒ检测仪器，都是最原始的测长和宽，但是目
前我们做的这一批，给药的不仅没有变小，而且最近的一次测量显示，ｃｏｎｔｒｏｌ
的反而缩小？这是什么原因？Ｃｏｎｔｒｏｌ组我们给的是１００ｕｌＤＭＳＯ／ｄａ
ｙ．
同事怀疑我的测量技术不稳定，我测得时候就是尽量抓老鼠的位置和力度保持一致，每
周两次，每一次重复两遍，关键是我们会用量尺挤一下肿瘤。为什么要挤着测呢？因为
我们打的时候是100ul cell+100ul matrigel，这样子，如果不挤，直接测边缘，从第2
天到第7天，肿瘤大小一直是超过100mm3的，可能是在这段期间，tumor正在长，
matrigel又没有完全消失，不知道怎么做才是最好的办法，请各位有经验的前辈指点一
下！ |
s******y
发帖数: 28562 | 10 你们给的时间太短了吧？
我们一般都要等三个星期之后肿瘤才长得比较明显，然后三到五星期之内才给药处理。
第2
【在 x**********h 的大作中提到】
: 我也想搭车问一下，做过裸鼠肿瘤实验的，都是怎么测肿瘤大小的，我们公司很小，没
: 有很ｆａｎｃｙ的荧光检测或者ｌａｓｅｒ检测仪器，都是最原始的测长和宽，但是目
: 前我们做的这一批，给药的不仅没有变小，而且最近的一次测量显示，ｃｏｎｔｒｏｌ
: 的反而缩小？这是什么原因？Ｃｏｎｔｒｏｌ组我们给的是１００ｕｌＤＭＳＯ／ｄａ
: ｙ．
: 同事怀疑我的测量技术不稳定，我测得时候就是尽量抓老鼠的位置和力度保持一致，每
: 周两次，每一次重复两遍，关键是我们会用量尺挤一下肿瘤。为什么要挤着测呢？因为
: 我们打的时候是100ul cell+100ul matrigel，这样子，如果不挤，直接测边缘，从第2
: 天到第7天，肿瘤大小一直是超过100mm3的，可能是在这段期间，tumor正在长，
: matrigel又没有完全消失，不知道怎么做才是最好的办法，请各位有经验的前辈指点一
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a*******a
发帖数: 4233 | 11 一般两周内不量。
三四周以后的肿瘤才是真的活肿瘤。
到30-50mm3以后再给药
第2
【在 x**********h 的大作中提到】
: 我也想搭车问一下，做过裸鼠肿瘤实验的，都是怎么测肿瘤大小的，我们公司很小，没
: 有很ｆａｎｃｙ的荧光检测或者ｌａｓｅｒ检测仪器，都是最原始的测长和宽，但是目
: 前我们做的这一批，给药的不仅没有变小，而且最近的一次测量显示，ｃｏｎｔｒｏｌ
: 的反而缩小？这是什么原因？Ｃｏｎｔｒｏｌ组我们给的是１００ｕｌＤＭＳＯ／ｄａ
: ｙ．
: 同事怀疑我的测量技术不稳定，我测得时候就是尽量抓老鼠的位置和力度保持一致，每
: 周两次，每一次重复两遍，关键是我们会用量尺挤一下肿瘤。为什么要挤着测呢？因为
: 我们打的时候是100ul cell+100ul matrigel，这样子，如果不挤，直接测边缘，从第2
: 天到第7天，肿瘤大小一直是超过100mm3的，可能是在这段期间，tumor正在长，
: matrigel又没有完全消失，不知道怎么做才是最好的办法，请各位有经验的前辈指点一
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b*****n
发帖数: 1841 | 12 谢谢以上各位回复，讨论了一下心里比较有底了。
再确定几个参数：
用的裸鼠你们一般用雄鼠还是雌鼠？ （Female, male?）
开始注射时周龄多少？(4-6 weeks, 6-8 weeks?)
细胞消化后重悬于什么溶液？(DMEM without serum, PBS?)
注射位置 （腿和腹部的窝， 背部？）
将皮拉起来注射，还是直接进针？
非常感谢！ |
d***w
发帖数: 1209 | 13 用ＤＭＳＯ做对照？不会吧？
第2
【在 x**********h 的大作中提到】
: 我也想搭车问一下，做过裸鼠肿瘤实验的，都是怎么测肿瘤大小的，我们公司很小，没
: 有很ｆａｎｃｙ的荧光检测或者ｌａｓｅｒ检测仪器，都是最原始的测长和宽，但是目
: 前我们做的这一批，给药的不仅没有变小，而且最近的一次测量显示，ｃｏｎｔｒｏｌ
: 的反而缩小？这是什么原因？Ｃｏｎｔｒｏｌ组我们给的是１００ｕｌＤＭＳＯ／ｄａ
: ｙ．
: 同事怀疑我的测量技术不稳定，我测得时候就是尽量抓老鼠的位置和力度保持一致，每
: 周两次，每一次重复两遍，关键是我们会用量尺挤一下肿瘤。为什么要挤着测呢？因为
: 我们打的时候是100ul cell+100ul matrigel，这样子，如果不挤，直接测边缘，从第2
: 天到第7天，肿瘤大小一直是超过100mm3的，可能是在这段期间，tumor正在长，
: matrigel又没有完全消失，不知道怎么做才是最好的办法，请各位有经验的前辈指点一
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b*****n
发帖数: 1841 | 14 期望达人继续解惑。此问题已经困扰我很久了，损失很多时间和金钱。
谢谢！
【在 b*****n 的大作中提到】
: 谢谢以上各位回复，讨论了一下心里比较有底了。
: 再确定几个参数：
: 用的裸鼠你们一般用雄鼠还是雌鼠？ （Female, male?）
: 开始注射时周龄多少？(4-6 weeks, 6-8 weeks?)
: 细胞消化后重悬于什么溶液？(DMEM without serum, PBS?)
: 注射位置 （腿和腹部的窝， 背部？）
: 将皮拉起来注射，还是直接进针？
: 非常感谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 15
我们一般用雄鼠。但是其实无所谓，除非你们要做和性别有关的癌症。
这个差别无所谓，只要你consistent 的选用一个即可。注意老鼠买回来之后要等一个
星期让他们熟悉环境才能做试验。
我们一般用dPBS （不是PBS)
一般是后背部。除非你有什么特别要求，
将皮拉起来。直接进针容易扎到肉。
【在 b*****n 的大作中提到】
: 谢谢以上各位回复，讨论了一下心里比较有底了。
: 再确定几个参数：
: 用的裸鼠你们一般用雄鼠还是雌鼠？ （Female, male?）
: 开始注射时周龄多少？(4-6 weeks, 6-8 weeks?)
: 细胞消化后重悬于什么溶液？(DMEM without serum, PBS?)
: 注射位置 （腿和腹部的窝， 背部？）
: 将皮拉起来注射，还是直接进针？
: 非常感谢！
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a*******a
发帖数: 4233 | 16 右侧，把老鼠抓住向大拇指方向稍微弯一下，体侧就会出现一条皮褶
针头顺着戳进去稍微向上挑一下就行了。
这个地方的好处是皮肤比较松弛不会被挤出来，缺点是如果打的太靠下肿瘤长大后可能
会影响爬行。
【在 b*****n 的大作中提到】
: 谢谢以上各位回复，讨论了一下心里比较有底了。
: 再确定几个参数：
: 用的裸鼠你们一般用雄鼠还是雌鼠？ （Female, male?）
: 开始注射时周龄多少？(4-6 weeks, 6-8 weeks?)
: 细胞消化后重悬于什么溶液？(DMEM without serum, PBS?)
: 注射位置 （腿和腹部的窝， 背部？）
: 将皮拉起来注射，还是直接进针？
: 非常感谢！
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f******g
发帖数: 1003 | |
b*****n
发帖数: 1841 | |
