有人直接用SDS loading buffer煮了样品再IP吗？ - Biology版

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Biology版 - 有人直接用SDS loading buffer煮了样品再IP吗？

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相关话题的讨论汇总
话题: ip话题: sds话题: loading话题: buffer话题: 样品

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r******k
发帖数: 446

小弟最近做一个蛋白的磷酸化以为没有特异性的抗体。只能IP total的protein 然后
用Pan-Tyr。但是这个磷酸化总是出不来。班上有大牛说用预热的（90度以上？）SDS
loading buffer 挂下来以后直接boil再稀释10-20倍做IP。但是有一个问题，10cm的
dish怎么也要用500ul的loading buffer scrape下来吧？那也无法稀释了呀？
难道先用pbs刮下来？？而且这个PBS是冰的把？而且还有protease inhibitor 还有
phospho-stop？

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