D***H
发帖数: 30 | 1 http://www.moley.com/
这机器人，只要把橱柜换成hood那就可以做大多数的分子实验了吧？ |
b******e
发帖数: 244 | 2 完全有希望，而且也是趋势，现在靠培养低层次的从业人员的模式已经破产，以后只需
要设计课题的就可以了，还有的工作是软件设计 |
j****n
发帖数: 3370 | 3 千老也不要太悲观
很多看似简单的步骤 机器人反而搞不定
如切胶回收 是目前做克隆自动化的瓶颈之一 |
s*******e
发帖数: 1389 | 4 杀老鼠如果有可能的话，解剖苍蝇的机器得多贵
这么一想
有个hhmi实验室花5万一年雇一个解剖果蝇成虫盘的Tec真是很便宜
【在 j****n 的大作中提到】
: 千老也不要太悲观
: 很多看似简单的步骤 机器人反而搞不定
: 如切胶回收 是目前做克隆自动化的瓶颈之一
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i**********a
发帖数: 1402 | 5 现在还有切胶的吗
【在 j****n 的大作中提到】
: 千老也不要太悲观
: 很多看似简单的步骤 机器人反而搞不定
: 如切胶回收 是目前做克隆自动化的瓶颈之一
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j****n
发帖数: 3370 | 6 不切胶怎么做克隆？
真心请教 可以解决困恼我们实验室好几年的难题
直接做基因全合成的不算。。。
【在 i**********a 的大作中提到】
: 现在还有切胶的吗
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D***H
发帖数: 30 | 7 这个是成本问题
【在 j****n 的大作中提到】
: 千老也不要太悲观
: 很多看似简单的步骤 机器人反而搞不定
: 如切胶回收 是目前做克隆自动化的瓶颈之一
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n*******d
发帖数: 41 | 8 大肠菌神教克隆大法:
参照in-fusion克隆的原理设计引物，不用买in-fusion试剂盒。
将vector和insert分别pcr出来，混合，用dpnI消化一下去掉原载体，接着无需其他操
作。然后trans的dh5a转化，
转化时请祈祷大肠杆菌神能顺利将这两个片段重组！
然后，colony pcr，菌神将保佑你得到正确的阳性克隆。
：不切胶怎么做克隆？
：真心请教 可以解决困恼我们实验室好几年的难题 |
S*********5
发帖数: 237 | 9 I NEED TO TAKE A SHOWER AND BE FRESH.. |
s*********n
发帖数: 34 | 10 这方法成功率怎么样？
【在 n*******d 的大作中提到】
: 大肠菌神教克隆大法:
: 参照in-fusion克隆的原理设计引物，不用买in-fusion试剂盒。
: 将vector和insert分别pcr出来，混合，用dpnI消化一下去掉原载体，接着无需其他操
: 作。然后trans的dh5a转化，
: 转化时请祈祷大肠杆菌神能顺利将这两个片段重组！
: 然后，colony pcr，菌神将保佑你得到正确的阳性克隆。
:
: ：不切胶怎么做克隆？
: ：真心请教 可以解决困恼我们实验室好几年的难题
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s*********n
发帖数: 34 | 11 兄弟用哪种高保真酶来保证vector扩增中不引入突变？
【在 n*******d 的大作中提到】
: 大肠菌神教克隆大法:
: 参照in-fusion克隆的原理设计引物，不用买in-fusion试剂盒。
: 将vector和insert分别pcr出来，混合，用dpnI消化一下去掉原载体，接着无需其他操
: 作。然后trans的dh5a转化，
: 转化时请祈祷大肠杆菌神能顺利将这两个片段重组！
: 然后，colony pcr，菌神将保佑你得到正确的阳性克隆。
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: ：不切胶怎么做克隆？
: ：真心请教 可以解决困恼我们实验室好几年的难题
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s******s
发帖数: 13035 | 12 可以条带前面插膜，跑上去洗脱就行了，比切胶方便点
【在 j****n 的大作中提到】
: 不切胶怎么做克隆？
: 真心请教 可以解决困恼我们实验室好几年的难题
: 直接做基因全合成的不算。。。
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d******n
发帖数: 3836 | 13 身材不错
【在 D***H 的大作中提到】
: http://www.moley.com/
: 这机器人，只要把橱柜换成hood那就可以做大多数的分子实验了吧？
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j****n
发帖数: 3370 | 14 隔壁实验室也有人这么操作 以前一直觉得大部分cloning host都是recA敲除，重组的
效率会很低
这个最多可以搞几个片段？我们实验室的一般都会有3个及以上片段
另外就是PCR，如果不是单一条带，克隆的准确性有多高？尤其是有好几个片段的情况下
【在 n*******d 的大作中提到】
: 大肠菌神教克隆大法:
: 参照in-fusion克隆的原理设计引物，不用买in-fusion试剂盒。
: 将vector和insert分别pcr出来，混合，用dpnI消化一下去掉原载体，接着无需其他操
: 作。然后trans的dh5a转化，
: 转化时请祈祷大肠杆菌神能顺利将这两个片段重组！
: 然后，colony pcr，菌神将保佑你得到正确的阳性克隆。
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: ：不切胶怎么做克隆？
: ：真心请教 可以解决困恼我们实验室好几年的难题
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j****n
发帖数: 3370 | 15 能否详细介绍下？看看能否高通量的搞。。。
【在 s******s 的大作中提到】
: 可以条带前面插膜，跑上去洗脱就行了，比切胶方便点
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n*******d
发帖数: 41 | 16 能p的很亮就基本都能做出来，本教教徒最长插入八九k的片段
可以同时插入好几个片段，可能insert越多，越难？本教教徒貌似有人做过三个片段
确实不是每个牌子的菌都能出，不同公司的菌敲得基因可能有差别，目前，目前本教采
用trans5a
只有是高保真的酶应该都可以吧，载体一般也没多大，30来个循环突变还可以吧？p载
体时模板浓度我一般只加200pg，这样dpnI能切干净
要么你还酶切胶回收，主要是保证你转化的片段是线性的就可以
欢迎入我教自娱自乐
：这方法成功率怎么样？
：【 在 nodvodnod (大肠菌神教) 的大作中提到: 】 |
N*********6
发帖数: 2302 | 17 8，9k片段？？
怎么跟神话一样。。。我是totally out of touch 了。。
【在 n*******d 的大作中提到】
: 能p的很亮就基本都能做出来，本教教徒最长插入八九k的片段
: 可以同时插入好几个片段，可能insert越多，越难？本教教徒貌似有人做过三个片段
: 确实不是每个牌子的菌都能出，不同公司的菌敲得基因可能有差别，目前，目前本教采
: 用trans5a
: 只有是高保真的酶应该都可以吧，载体一般也没多大，30来个循环突变还可以吧？p载
: 体时模板浓度我一般只加200pg，这样dpnI能切干净
: 要么你还酶切胶回收，主要是保证你转化的片段是线性的就可以
: 欢迎入我教自娱自乐
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: ：这方法成功率怎么样？
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n******7
发帖数: 12463 | 18 也不错，蛋糕做大了的话，钱老以后就是现在的PI了
设计解释实验就好 |
