l*********2
发帖数: 247 | 1 第一次接触Hybridoma cell。细胞从液氮取出后在70%酒精里融化。培养液加热至37度
，替换冻存液，然后细胞在6孔板中培养。24小时后吸取培养液至2ml tube，10000rpm
离心后复加至细胞。24小时有很多贴壁细胞，48小时观察只有少量贴壁，大部分死掉了。
已重配过培养液，不是培养液的原因。
请问板上高手这是什么原因？谢谢！ |
f*****f
发帖数: 195 | 2 Hybridoma不是典型的贴壁细胞，大部分悬浮，不是死细胞。那些贴着的轻微吹打就下
来了。
70%酒精里融化? 直接37度水浴融化。
10000rpm 太高，1000rpm 5 min足够
10000rpm
了。
【在 l*********2 的大作中提到】
: 第一次接触Hybridoma cell。细胞从液氮取出后在70%酒精里融化。培养液加热至37度
: ，替换冻存液，然后细胞在6孔板中培养。24小时后吸取培养液至2ml tube，10000rpm
: 离心后复加至细胞。24小时有很多贴壁细胞，48小时观察只有少量贴壁，大部分死掉了。
: 已重配过培养液，不是培养液的原因。
: 请问板上高手这是什么原因？谢谢！
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l*********2
发帖数: 247 | 3 怪就在怪在一些细胞复苏后看上去很好，但过一两天就死掉。我观察到的是悬浮细胞都
是死细胞，或者细胞碎片。 |
h****6
发帖数: 229 | 4 主要看细胞在光镜下的型态。太多颗粒就不行了。
：怪就在怪在一些细胞复苏后看上去很好，但过一两天就死掉。我观察到的是悬浮细胞
都是死细胞，或者细胞碎片。 |
l*********2
发帖数: 247 | 5 谢谢答复的两位。我前天看着细胞又要全军覆没，把细胞吹起来，洗后用预热的新培养
液重悬。现在细胞目前在长了，虽然很慢。 |
q******g
发帖数: 3858 | |
l*********2
发帖数: 247 | 7 我也看过这个protocol，主要是复苏一开始要尽量高的细胞密度。
【在 q******g 的大作中提到】
: 我也准备做hybridoma复苏，准备用这个protocol, http://www.basic.northwestern.edu/sharedresources/monoclonal/Basic_protocols.pdf
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c*****i
发帖数: 1392 | 8 Hybridoma是最容易复苏的一类细胞了。 37C水浴速融，贴壁的Hybridoma直接加入培养
瓶，2小时后换液，可用20％FBS。悬浮细胞解冻后加1ml培养基，慢速离心1000rpm，
5min，去上清，加新鲜medium，培养。若细胞太少，培养一周后看
10000rpm
了。
【在 l*********2 的大作中提到】
: 第一次接触Hybridoma cell。细胞从液氮取出后在70%酒精里融化。培养液加热至37度
: ，替换冻存液，然后细胞在6孔板中培养。24小时后吸取培养液至2ml tube，10000rpm
: 离心后复加至细胞。24小时有很多贴壁细胞，48小时观察只有少量贴壁，大部分死掉了。
: 已重配过培养液，不是培养液的原因。
: 请问板上高手这是什么原因？谢谢！
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T****r
发帖数: 9 | 9 hybridoma一般很容易复苏，但是有时候如果冻存条件不好有可能遇到复苏困难的情况
。细胞往往开始看起来很好，但是根本长不起来。这种情况一般是因为真正有活性的细
胞比例太小的原因。因为hybridoma具有cluster生长的优势，很多paracrine
sufficient的信号有利于生长。如果长不好的话建议用hybridoma cloning factor 加
在culture
media 中，或者加入feeder cells.
10000rpm
了。
【在 l*********2 的大作中提到】
: 第一次接触Hybridoma cell。细胞从液氮取出后在70%酒精里融化。培养液加热至37度
: ，替换冻存液，然后细胞在6孔板中培养。24小时后吸取培养液至2ml tube，10000rpm
: 离心后复加至细胞。24小时有很多贴壁细胞，48小时观察只有少量贴壁，大部分死掉了。
: 已重配过培养液，不是培养液的原因。
: 请问板上高手这是什么原因？谢谢！
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t*x
发帖数: 1065 | 10 用feeder cell
3T3就行
10000rpm
了。
【在 l*********2 的大作中提到】
: 第一次接触Hybridoma cell。细胞从液氮取出后在70%酒精里融化。培养液加热至37度
: ，替换冻存液，然后细胞在6孔板中培养。24小时后吸取培养液至2ml tube，10000rpm
: 离心后复加至细胞。24小时有很多贴壁细胞，48小时观察只有少量贴壁，大部分死掉了。
: 已重配过培养液，不是培养液的原因。
: 请问板上高手这是什么原因？谢谢！
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