s*********y
发帖数: 579 | 1 在做一个皮肤病模型，腹腔注射Tamoxifen诱导K14-ERT2-cre表达。连续注射5天，每次
0.3mg。停止注射两周后开始实验，持续2周。
1. Tamoxifen半衰期只有48小时，和玉米油混合后不知道能延长多少。4周后是不是已
经完全代谢没了？
2. 皮肤的turnover比较快，是不是很快就修复了。
谢谢！ |
S**********e
发帖数: 620 | 2 tam只要和ert2结合就可以马上带领cre去咬loxp，其实都是一次搞定，不要太久不要太
多，否则副作用大，5天其实偏多。
还有tam必须通过肝脏变成4oh-tam才有效果，所以通过皮肤必须用4oh-tam
【在 s*********y 的大作中提到】
: 在做一个皮肤病模型，腹腔注射Tamoxifen诱导K14-ERT2-cre表达。连续注射5天，每次
: 0.3mg。停止注射两周后开始实验，持续2周。
: 1. Tamoxifen半衰期只有48小时，和玉米油混合后不知道能延长多少。4周后是不是已
: 经完全代谢没了？
: 2. 皮肤的turnover比较快，是不是很快就修复了。
: 谢谢！
|
S**********e
发帖数: 620 | 3 turnover有一个周期，修复的问题取决于KO在哪里发生，这方面的干细胞很多研究，有
得follow
【在 s*********y 的大作中提到】
: 在做一个皮肤病模型，腹腔注射Tamoxifen诱导K14-ERT2-cre表达。连续注射5天，每次
: 0.3mg。停止注射两周后开始实验，持续2周。
: 1. Tamoxifen半衰期只有48小时，和玉米油混合后不知道能延长多少。4周后是不是已
: 经完全代谢没了？
: 2. 皮肤的turnover比较快，是不是很快就修复了。
: 谢谢！
|
s*********y
发帖数: 579 | 4 诱导后多久又成为wt野生型了？实验要在几天内完成？
有的模型周期长，难道中间还要再注射几次？ |
s*********y
发帖数: 579 | 5 找到一篇
(1) administration of high Tm doses leads to extended CreER nuclear
localization; (2) Tm administration induces reporter gene recombination for
several days or weeks after Tm treatment is completed, depending on the
original dose administered; and (3) Tm treatment induces side effects that
may have physiologic consequences in Tm-inducible models.
: 诱导后多久又成为wt野生型了？实验要在几天内完成？
: 有的模型周期长，难道中间还要再注射几次？
【在 s*********y 的大作中提到】
: 诱导后多久又成为wt野生型了？实验要在几天内完成？
: 有的模型周期长，难道中间还要再注射几次？
|
t****p
发帖数: 1504 | 6 K14是表达在基底细胞，也即通常说的皮肤干细胞，一旦发生敲除就永久敲除，皮肤干
细胞理论上不会丢失，所以不存在4周以后就没有了的问题。
K14-CreERT2的效率不是很高，假设你诱导敲除一半的细胞，那么另一半的细胞足以掩
盖敲除细胞的缺陷。除非你的基因特别强大。我觉的K14-CreERT2作为tracing的工具鼠
就好，要用它研究基因在成体小鼠中的功能并不是很好用，主要就是诱导效率还不够高。
【在 s*********y 的大作中提到】
: 在做一个皮肤病模型，腹腔注射Tamoxifen诱导K14-ERT2-cre表达。连续注射5天，每次
: 0.3mg。停止注射两周后开始实验，持续2周。
: 1. Tamoxifen半衰期只有48小时，和玉米油混合后不知道能延长多少。4周后是不是已
: 经完全代谢没了？
: 2. 皮肤的turnover比较快，是不是很快就修复了。
: 谢谢！
|
s*********y
发帖数: 579 | 7 K14是表达在基底细胞，也即通常说的皮肤干细胞，一旦发生敲除就永久敲除，皮肤干
细胞理论上不会丢失，所以不存在4周以后就没有了的问题。
请问 toptip 这个有文献支持吗？ |
S**********e
发帖数: 620 | 8
看fuchs的文章，她做的非常全面，当然也有听说造假的传闻。
你的KO如果不是致死，应该不会消失
如果致死，那表型可能会很明显
【在 s*********y 的大作中提到】
: K14是表达在基底细胞，也即通常说的皮肤干细胞，一旦发生敲除就永久敲除，皮肤干
: 细胞理论上不会丢失，所以不存在4周以后就没有了的问题。
: 请问 toptip 这个有文献支持吗？
|
s*********y
发帖数: 579 | 9 我用的就是fuchs的小鼠。在她1999年的PNAS里写道
This promoter is strongly active in dividing cells of epidermis and some
other stratified squamous epithelia。
Finally, we show that epidermal cells harboring a Cre-dependent rearranged
genome persist for many months after tamoxifen application, indicating that
the epidermal stem cell population has been targeted efficiently.
但是法国的Chambon Lab认为只能维持几天的时间
Curr Protoc Mouse Biol. 2011 Mar 1;1(1):55-70. doi: 10.1002/9780470942390.
mo100128.
Generation of Spatio-Temporally Controlled Targeted Somatic Mutations in the
Mouse.
Metzger D1, Chambon P1. |
S**********e
发帖数: 620 | 10
that
the
fuchs是美国的一座大山，想在这行混的美国实验室基本上不甘指出来她的漏洞，我倾
向于法国实验室的结论。不过你还是多看看这方面的文章，或者自己做看看。这个不在
于你ko什么基因，基本上是干细胞marker是不是k15的争议。好像另外一个ru486诱导的
也很多人用。
【在 s*********y 的大作中提到】
: 我用的就是fuchs的小鼠。在她1999年的PNAS里写道
: This promoter is strongly active in dividing cells of epidermis and some
: other stratified squamous epithelia。
: Finally, we show that epidermal cells harboring a Cre-dependent rearranged
: genome persist for many months after tamoxifen application, indicating that
: the epidermal stem cell population has been targeted efficiently.
: 但是法国的Chambon Lab认为只能维持几天的时间
: Curr Protoc Mouse Biol. 2011 Mar 1;1(1):55-70. doi: 10.1002/9780470942390.
: mo100128.
: Generation of Spatio-Temporally Controlled Targeted Somatic Mutations in the
|
D*a
发帖数: 6830 | 11 多不多要看一次剂量，其实单次剂量小点，还是五天效果好于短点大剂量
tam注射进去就进肝脏代谢了，皮肤敲除还是通过血管到皮肤的，并不是抹在皮肤的，
不需要用4oh-tam
【在 S**********e 的大作中提到】
: tam只要和ert2结合就可以马上带领cre去咬loxp，其实都是一次搞定，不要太久不要太
: 多，否则副作用大，5天其实偏多。
: 还有tam必须通过肝脏变成4oh-tam才有效果，所以通过皮肤必须用4oh-tam
|
h*****9
发帖数: 7 | 12 本人在做骨骼肌基因诱导敲出。Tam 灌胃和腹腔注射哪种方式更有效？似乎灌胃剂量可
以给更大一些（4mg per time) |
