s******y 发帖数: 28562 | 1 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细
胞作为阳性对照还是看不到,也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。
如果有用过而且好用的麻烦推荐一下,谢谢! |
g*********5 发帖数: 2533 | |
s******y 发帖数: 28562 | 3
谢谢! 是单抗么?
【在 g*********5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我用过epitomics 的,效果不错。
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g*********5 发帖数: 2533 | 4 是兔子的单抗。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : : 谢谢! 是单抗么?
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g*********5 发帖数: 2533 | |
s******y 发帖数: 28562 | 6
哦,这挺少见的。明天我去查一查。谢谢推荐!
【在 g*********5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是兔子的单抗。
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g*********5 发帖数: 2533 | |
g*********5 发帖数: 2533 | 8 epitomics的抗体主要就是兔子单抗,有专利的,一个中国人开创的,前年被abcam买了。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : : 哦,这挺少见的。明天我去查一查。谢谢推荐!
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z********8 发帖数: 818 | 9
http://www.novusbio.com/productsearch?keys=HIF-1+alpha
这个公司的这类抗体很好。
你查文献就知道, 大部分人用这个公司的。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细 : 胞作为阳性对照还是看不到,也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。 : 如果有用过而且好用的麻烦推荐一下,谢谢!
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z********8 发帖数: 818 | 10
一般的肿瘤细胞都有表达,但是normoxia表达很低,hypoxia表达很容易检测。
如果是nomoxia,用piece的最强ECL显色。
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细 : 胞作为阳性对照还是看不到,也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。 : 如果有用过而且好用的麻烦推荐一下,谢谢!
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s******y 发帖数: 28562 | 11
非常感谢,我们的实验条件要求normoxia. 如果用hypoxia, 需要处理多久才能出来比
较明显的带?
【在 z********8 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : : 一般的肿瘤细胞都有表达,但是normoxia表达很低,hypoxia表达很容易检测。 : 如果是nomoxia,用piece的最强ECL显色。
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s******y 发帖数: 28562 | 12
非常感谢你对我一向的支持。
【在 g*********5 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 可惜我不在实验室了,不然就给你寄一点了。
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z********8 发帖数: 818 | 13
我没有做过24小时内的time course,但是hypoxia24小时足够。建议用0.5% o2.
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : : 非常感谢你对我一向的支持。
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a*****r 发帖数: 54 | 14 胖老师,HIF field用的最多的HIF1A的抗体是BD的#610958(鼠单抗),WB的band在~
120kD
在normoxia培养条件的cell lysate信号几乎没有或者很低
需要进行一定的处理才能看见robust的信号,例如
(1)MG132 ~2hr
(2)CoCl2/iron chelator(比如DFO)
(3)PHD inhibitor(比如DMOG)
(4)如果你有Hypoxic incubator,用低于2% O2
(5)或是直接使用某些Mutant细胞,例如RCC4 (VHL inactivated)
【在 s******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细 : 胞作为阳性对照还是看不到,也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。 : 如果有用过而且好用的麻烦推荐一下,谢谢!
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Z******5 发帖数: 435 | 15 HIFa主要是蛋白降解非常快,从hypoxic下拿出来最好不要超过一个小时,最好是消化
或刮下来直接加loading buffer煮。 |
d******u 发帖数: 178 | 16 妤间富-澶ч儴鍒嗛鐢ㄦ姉浣撴槸Novus鐨勶紝浠婂ぉ鍒氬悜鏃佽竟瀹為獙瀹ゆ眰璇佷
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s******y 发帖数: 28562 | 17 谢谢!我已经订了Epitomics 的了。如果不好使的话我再用你说的这个。
【在 a*****r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 胖老师,HIF field用的最多的HIF1A的抗体是BD的#610958(鼠单抗),WB的band在~ : 120kD : 在normoxia培养条件的cell lysate信号几乎没有或者很低 : 需要进行一定的处理才能看见robust的信号,例如 : (1)MG132 ~2hr : (2)CoCl2/iron chelator(比如DFO) : (3)PHD inhibitor(比如DMOG) : (4)如果你有Hypoxic incubator,用低于2% O2 : (5)或是直接使用某些Mutant细胞,例如RCC4 (VHL inactivated)
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