s******y
发帖数: 28562 | 1 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细
胞作为阳性对照还是看不到，也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。
如果有用过而且好用的麻烦推荐一下，谢谢！ |
g*********5
发帖数: 2533 | |
s******y
发帖数: 28562 | 3
谢谢！ 是单抗么？
【在 g*********5 的大作中提到】
: 我用过epitomics 的，效果不错。
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g*********5
发帖数: 2533 | 4 是兔子的单抗。
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 谢谢！ 是单抗么？
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g*********5
发帖数: 2533 | |
s******y
发帖数: 28562 | 6
哦，这挺少见的。明天我去查一查。谢谢推荐！
【在 g*********5 的大作中提到】
: 是兔子的单抗。
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g*********5
发帖数: 2533 | |
g*********5
发帖数: 2533 | 8 epitomics的抗体主要就是兔子单抗，有专利的，一个中国人开创的，前年被abcam买了。
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 哦，这挺少见的。明天我去查一查。谢谢推荐！
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z********8
发帖数: 818 | 9
http://www.novusbio.com/productsearch?keys=HIF-1+alpha
这个公司的这类抗体很好。
你查文献就知道， 大部分人用这个公司的。
【在 s******y 的大作中提到】
: 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细
: 胞作为阳性对照还是看不到，也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。
: 如果有用过而且好用的麻烦推荐一下，谢谢！
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z********8
发帖数: 818 | 10
一般的肿瘤细胞都有表达，但是normoxia表达很低，hypoxia表达很容易检测。
如果是nomoxia，用piece的最强ECL显色。
【在 s******y 的大作中提到】
: 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细
: 胞作为阳性对照还是看不到，也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。
: 如果有用过而且好用的麻烦推荐一下，谢谢！
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s******y
发帖数: 28562 | 11
非常感谢，我们的实验条件要求normoxia. 如果用hypoxia, 需要处理多久才能出来比
较明显的带？
【在 z********8 的大作中提到】
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: 一般的肿瘤细胞都有表达，但是normoxia表达很低，hypoxia表达很容易检测。
: 如果是nomoxia，用piece的最强ECL显色。
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s******y
发帖数: 28562 | 12
非常感谢你对我一向的支持。
【在 g*********5 的大作中提到】
: 可惜我不在实验室了，不然就给你寄一点了。
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z********8
发帖数: 818 | 13
我没有做过24小时内的time course，但是hypoxia24小时足够。建议用0.5％ o2.
【在 s******y 的大作中提到】
:
: 非常感谢你对我一向的支持。
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a*****r
发帖数: 54 | 14 胖老师，HIF field用的最多的HIF1A的抗体是BD的#610958（鼠单抗）,WB的band在～
120kD
在normoxia培养条件的cell lysate信号几乎没有或者很低
需要进行一定的处理才能看见robust的信号，例如
(1)MG132 ~2hr
(2)CoCl2/iron chelator（比如DFO）
(3)PHD inhibitor（比如DMOG）
(4）如果你有Hypoxic incubator,用低于2% O2
(5)或是直接使用某些Mutant细胞，例如RCC4 (VHL inactivated)
【在 s******y 的大作中提到】
: 需要western blot 用的。我们试了两个公司的都没有信号。用了乳腺癌和前列腺癌细
: 胞作为阳性对照还是看不到，也不知道到底是公司的问题还是我们自己的问题。
: 如果有用过而且好用的麻烦推荐一下，谢谢！
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Z******5
发帖数: 435 | 15 HIFa主要是蛋白降解非常快，从hypoxic下拿出来最好不要超过一个小时，最好是消化
或刮下来直接加loading buffer煮。 |
d******u
发帖数: 178 | 16 妤间富-澶ч儴鍒嗛鐢ㄦ姉浣撴槸Novus鐨勶紝浠婂ぉ鍒氬悜鏃佽竟瀹為獙瀹ゆ眰璇佷
簡锛屼汉缁嗚優WB鏈ソ鐨勬槸NB100-449锛屼絾瑕佷綆姘 |
s******y
发帖数: 28562 | 17 谢谢！我已经订了Epitomics 的了。如果不好使的话我再用你说的这个。
【在 a*****r 的大作中提到】
: 胖老师，HIF field用的最多的HIF1A的抗体是BD的#610958（鼠单抗）,WB的band在～
: 120kD
: 在normoxia培养条件的cell lysate信号几乎没有或者很低
: 需要进行一定的处理才能看见robust的信号，例如
: (1)MG132 ~2hr
: (2)CoCl2/iron chelator（比如DFO）
: (3)PHD inhibitor（比如DMOG）
: (4）如果你有Hypoxic incubator,用低于2% O2
: (5)或是直接使用某些Mutant细胞，例如RCC4 (VHL inactivated)
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