g*********3
发帖数: 177 | 1 不知道版上有没有人做过C26 conditioned medium 或者一般的conditioned medium，
主要是为了研究medium的细胞因子，生长因子。 比较了几个不同的protocol，有几个
不同点
1. RPMI Vs. DMEM, 有的protocol不推荐加抗生素，有的在收集CM前12小时换成no-
serum medium,有的一直在用regular full medium. 不知道血清里的生长因子细胞因子
会不会背景太强（用之前是heat inactivated过的）。
2. 如果为了鉴定一些特定因子x，我看有一些protocol用抗体在收集的培养基里加入x
的抗体。 和lab的人讨论过，他们说这种免疫中和的实验不是很好做。。。（也没说出
个所以然，只是说抗体的affinity可能很低balabala）。 然后有建议说用shRNA KO,
我试过c26 gfp 转染，感觉效率很低，当然lentiviral可能好很多。
第一回做这个protocol，希望有经验的大牛能够指点下。谢谢。 | m*********D
发帖数: 1727 | 2 每个试验都有它的目的，所以，考虑的因素也就完全不一样了。象我作CM,需要的是在
细胞很稀少的情况下，CM能帮助一个细胞变成一个colony,需要的就是细胞分泌的生长
因子。我不必搞清楚那些因子。所以，我就简单的用我需要的medium，在细胞数量比较
多的情况下收集。你要是想分析细胞分泌的生长因子等，你要考虑的是serum里带来的
因子会不会会干扰你的分析，serum里高浓度的BSA会不会让你的后续分析变得困难（我
现在也面临这个问题，正在试无serum的medium）。
如果你的目的是分析细胞分泌的生长因子等，我的建议就是细胞平时用的base medium
。要细胞adopt到新的base medium往往很不容易的，有时候需要几个pass。我会在收集
的那一步，不加serum，减少BSA和serum里带来的因子。所以，我会normally split细
胞，等细胞长到50-70%的confluence,先用1X PBS把细胞洗两篇，就加base medium,在
12小时内收集medium。 | g*********3
发帖数: 177 | 3 谢谢midwestpstd。 嗯，我们讨论过后也比较倾向于用base medium。
尝试查了serum里的各种因子成分，不过没有找到table。
谢谢。
medium
【在 m*********D 的大作中提到】
: 每个试验都有它的目的，所以，考虑的因素也就完全不一样了。象我作CM,需要的是在
: 细胞很稀少的情况下，CM能帮助一个细胞变成一个colony,需要的就是细胞分泌的生长
: 因子。我不必搞清楚那些因子。所以，我就简单的用我需要的medium，在细胞数量比较
: 多的情况下收集。你要是想分析细胞分泌的生长因子等，你要考虑的是serum里带来的
: 因子会不会会干扰你的分析，serum里高浓度的BSA会不会让你的后续分析变得困难（我
: 现在也面临这个问题，正在试无serum的medium）。
: 如果你的目的是分析细胞分泌的生长因子等，我的建议就是细胞平时用的base medium
: 。要细胞adopt到新的base medium往往很不容易的，有时候需要几个pass。我会在收集
: 的那一步，不加serum，减少BSA和serum里带来的因子。所以，我会normally split细
: 胞，等细胞长到50-70%的confluence,先用1X PBS把细胞洗两篇，就加base medium,在
|
|
