w********a 发帖数: 324 | 1 请教大家一个问题:
做长段的colony PCR 用于检测阳性克隆,不要求高保真。PCR size 大于3 kb (在3-
6kb)。大家都用什么PCR酶检测啊?之前一直用NEB的 longAmp。效果不错,但是价格
太贵了。不知道有什么便宜点的替代产品。 谢谢! |
l***y 发帖数: 638 | 2 我们做4-5kb的pcr都是用的最便宜的taq酶
【在 w********a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 请教大家一个问题: : 做长段的colony PCR 用于检测阳性克隆,不要求高保真。PCR size 大于3 kb (在3- : 6kb)。大家都用什么PCR酶检测啊?之前一直用NEB的 longAmp。效果不错,但是价格 : 太贵了。不知道有什么便宜点的替代产品。 谢谢!
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g*****n 发帖数: 250 | 3 做colony PCR用 Taq就行了。好奇问一下,为什么非要PCR 3-6kb? 设计引物PCR短点的
不行吗? |
w********a 发帖数: 324 | 4 我们做梭菌的,用Promega的Tag green,超过1kb就不行了。你们是在E。coli里面做吗
? 你们用的是哪个公司的Taq呀?用PromegTaq green的话,在E. coli超过3kb的话我
们也经常做不出来
谢谢!
【在 l***y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我们做4-5kb的pcr都是用的最便宜的taq酶
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w********a 发帖数: 324 | 5 我们做梭菌的,用Promega的Tag green,超过1kb就不行了。你们是在E。coli里面做吗
? 你们用的是哪个公司的Taq呀?用PromegTaq green的话,在E. coli超过3kb的话我
们也经常做不出来。。
有时候需要检测插入的片段,并且引物要保证在同源重组臂的外端。所以一般都长于
3kb
【在 g*****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 做colony PCR用 Taq就行了。好奇问一下,为什么非要PCR 3-6kb? 设计引物PCR短点的 : 不行吗?
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g*****n 发帖数: 250 | 6 插入片段内设计引物不就行了嘛。合成引物很快。何必在3kb上折腾。 |
w********a 发帖数: 324 | 7 是这么个理。但是3kb以上的PCR很多时候还是需要的。
请问你们的Taq是那个公司买的?你们在什么菌里面做colony PCR?谢谢!
【在 g*****n 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 插入片段内设计引物不就行了嘛。合成引物很快。何必在3kb上折腾。
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v********e 发帖数: 1597 | 8 life tech accuprime Taq
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12346086?gclid=
CMKFssnFk9ICFUlLDQodFIkJAg&ef_id=WJKjlgAABDxNDiag:20170216021351:s
6kb 无压力 |
w********a 发帖数: 324 | 9 你说的是colony PCR做6kb吧? genomic DNA一般都没问题。但是colony PCR有时候就
比较难做。尤其是我们做格兰仕阳性菌的。。谢谢!
【在 v********e 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : life tech accuprime Taq : https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/12346086?gclid= : CMKFssnFk9ICFUlLDQodFIkJAg&ef_id=WJKjlgAABDxNDiag:20170216021351:s : 6kb 无压力
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l**l 发帖数: 338 | 10 Taq 里掺点pfu有奇效
【在 w********a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你说的是colony PCR做6kb吧? genomic DNA一般都没问题。但是colony PCR有时候就 : 比较难做。尤其是我们做格兰仕阳性菌的。。谢谢!
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a*********n 发帖数: 390 | 11 真的?
【在 l**l 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : Taq 里掺点pfu有奇效
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