y*******9 发帖数: 360 | 1 我的荧光谱图有很强的散射背景,荧光被散射峰遮盖得不明显了,有什么软件可以
normalize掉这些散射背景。谢谢。 |
s*****g 发帖数: 2666 | 2 你的荧光是不是太弱了
【在 y*******9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我的荧光谱图有很强的散射背景,荧光被散射峰遮盖得不明显了,有什么软件可以 : normalize掉这些散射背景。谢谢。
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y*******9 发帖数: 360 | 3 是比较弱。
【在 s*****g 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 你的荧光是不是太弱了
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s*****g 发帖数: 2666 | 4 这个好像比较难办,我不知道有没有什么软件,
不过我一般用相同的溶剂再搞一边空白,然后用把空白减掉,这样能减弱点你的散射。
【在 y*******9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 是比较弱。
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a*********9 发帖数: 774 | |
y****i 发帖数: 1504 | 6 shift your excitation wavelength to blue and/or
decrease excitation light intensity. |
P*V 发帖数: 1145 | 7 这是个好方法。
另外还可以这样考虑。
散射峰的来源在于有激发光进入探测器,探测器误以为是信号光,散射峰的位置在2倍波长处。这样的话,在做荧光光谱时,可以在仪器的软件上选择在探测器前加滤光片,
把入射激发光滤掉,现在的光谱仪很多都有这种功能。这样就不会有激发光干扰了。
【在 y****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : shift your excitation wavelength to blue and/or : decrease excitation light intensity.
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l*****m 发帖数: 772 | |
F******k 发帖数: 55 | 9 用long pass filter在接收端滤去散射光,或者用polarizor拦住散射光,必要的话两
种手法一起用。
【在 y*******9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我的荧光谱图有很强的散射背景,荧光被散射峰遮盖得不明显了,有什么软件可以 : normalize掉这些散射背景。谢谢。
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y*******9 发帖数: 360 | 10 polarizor 怎么设? 入射水平,出射水平,还是垂直?谢谢
【在 F******k 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 用long pass filter在接收端滤去散射光,或者用polarizor拦住散射光,必要的话两 : 种手法一起用。
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v*****s 发帖数: 20290 | 11 散射光和荧光都不是polarized的吧。
【在 F******k 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 用long pass filter在接收端滤去散射光,或者用polarizor拦住散射光,必要的话两 : 种手法一起用。
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w******a 发帖数: 782 | |
P*V 发帖数: 1145 | 13 严格来说,散射光是有偏振的,不过应该是两种互相垂直的偏振的组合。
用偏振的方法是这样的:
先对入射激发光加一个偏振片,这样入射光进入样品时只有一个偏振方向。然后在探测
器前再加一个和第一偏振片垂直的偏振片,这样,认为散射光仍然保持和入射光一样的
偏振,于是不能通过第二个偏振片。荧光可以认为没有单一的偏振态,这样就可以通过
偏振片了。
【在 v*****s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 散射光和荧光都不是polarized的吧。
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v*****s 发帖数: 20290 | 14 我很怀疑你的这个“认为散射光仍然保持和入射光一样的偏振,”。这里的散射应该是
瑞利散射吧,我去查查书看。
另外,你这个方法,荧光信号也会损失一半的。我看还是long pass filter就行了,别
折腾偏振。
【在 P*V 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 严格来说,散射光是有偏振的,不过应该是两种互相垂直的偏振的组合。 : 用偏振的方法是这样的: : 先对入射激发光加一个偏振片,这样入射光进入样品时只有一个偏振方向。然后在探测 : 器前再加一个和第一偏振片垂直的偏振片,这样,认为散射光仍然保持和入射光一样的 : 偏振,于是不能通过第二个偏振片。荧光可以认为没有单一的偏振态,这样就可以通过 : 偏振片了。
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i********a 发帖数: 789 | |
v*****s 发帖数: 20290 | 16 俺搞混了,你是对的。瑞利散射的偏振和入射光是一致的。拉曼散射才有
depolarization ratio。
【在 P*V 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 严格来说,散射光是有偏振的,不过应该是两种互相垂直的偏振的组合。 : 用偏振的方法是这样的: : 先对入射激发光加一个偏振片,这样入射光进入样品时只有一个偏振方向。然后在探测 : 器前再加一个和第一偏振片垂直的偏振片,这样,认为散射光仍然保持和入射光一样的 : 偏振,于是不能通过第二个偏振片。荧光可以认为没有单一的偏振态,这样就可以通过 : 偏振片了。
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y****i 发帖数: 1504 | 17 首先声明俺主要做磷光,很少碰荧光。
俺有两个问题,你们是否真的用过一般的LPF去掉影响荧光探测的瑞利散射。我问的原
因是我感觉如果两个在很近的区间,一般的filter挡住了散射也会cut荧光,除非是那
种notch filter 或cut 很sharp的那种,但是价格不菲。
第二个问题是如果两端用偏振片,会损失多少信号?是不是激发光必须是激光?一般的
灯让被这个偏振一下,那个偏振一下,剩不下什么了吧? |
v*****s 发帖数: 20290 | 18 1 那是自然,不过notch filter很贵,一般的LPF就算cut很sharp也没多少钱。这个也
取决于你的荧光和散射分得有多开。
2 取决于你光的偏振态,如果是一般的日光,完全非偏振光,理论上讲是50%。不过荧
光未必就是完全非偏振光了。这个我没做过,不好乱讲,应该会取决于你荧光态的寿命
和转动的快慢。
【在 y****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 首先声明俺主要做磷光,很少碰荧光。 : 俺有两个问题,你们是否真的用过一般的LPF去掉影响荧光探测的瑞利散射。我问的原 : 因是我感觉如果两个在很近的区间,一般的filter挡住了散射也会cut荧光,除非是那 : 种notch filter 或cut 很sharp的那种,但是价格不菲。 : 第二个问题是如果两端用偏振片,会损失多少信号?是不是激发光必须是激光?一般的 : 灯让被这个偏振一下,那个偏振一下,剩不下什么了吧?
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P*V 发帖数: 1145 | 19 一般的光谱仪会提供一组filter,但是这是通用的设置,所以未必能照顾的到那种入射
光和荧光很近的情况。
现在的光谱仪,我接触到的,一般是各种灯,脉冲的连续的,连续可调激光做光源的,
我还没有见过,估计这种光谱仪太贵了。如果是灯光的话,其实可以调一下狭缝宽度,
这样能让能量高些,不过会损失精度。
我感觉
【在 v*****s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 1 那是自然,不过notch filter很贵,一般的LPF就算cut很sharp也没多少钱。这个也 : 取决于你的荧光和散射分得有多开。 : 2 取决于你光的偏振态,如果是一般的日光,完全非偏振光,理论上讲是50%。不过荧 : 光未必就是完全非偏振光了。这个我没做过,不好乱讲,应该会取决于你荧光态的寿命 : 和转动的快慢。
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v*****s 发帖数: 20290 | 20 光谱仪带灯的?俺的光源和光谱仪完全是无关的。
连续可调激光这东西不存在吧,只有染料激光接近点。
【在 P*V 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 一般的光谱仪会提供一组filter,但是这是通用的设置,所以未必能照顾的到那种入射 : 光和荧光很近的情况。 : 现在的光谱仪,我接触到的,一般是各种灯,脉冲的连续的,连续可调激光做光源的, : 我还没有见过,估计这种光谱仪太贵了。如果是灯光的话,其实可以调一下狭缝宽度, : 这样能让能量高些,不过会损失精度。 : 我感觉
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P*V 发帖数: 1145 | 21 光源光源,呵呵
【在 v*****s 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 光谱仪带灯的?俺的光源和光谱仪完全是无关的。 : 连续可调激光这东西不存在吧,只有染料激光接近点。
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P*V 发帖数: 1145 | 22 忽忽,包子要多发
【在 y*******9 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我的荧光谱图有很强的散射背景,荧光被散射峰遮盖得不明显了,有什么软件可以 : normalize掉这些散射背景。谢谢。
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