n*********y 发帖数: 54 | 1 我最近用fmoc化学固相合成一个11肽,c端含flag tag 序列(8肽),n端是三个疏水氨
基酸。合成产率正常,纯度也不错,可是质镨分析显示分子量多出50。我试过了延长脱
保护时间到16小时,仍然去不掉多出的分子量。MS/MS分析也找不出到底是哪一个氨基
酸出了问题。
我用的试剂都是常见的:DMF,piperidine,HBTU,MMP,OBut-Asp,OBut-Tyr,Boc
-Lys。
恳请大虾指点问题出在哪。 |
fe 发帖数: 286 | |
o****e 发帖数: 1011 | 3 怎么会需要这么长时间(16小时)脱保护?2.5小时不够吗?我觉得“时间短些”好些。
具体用的是什么resin?(这里的“MMP”是说什么?NMP?)
Boc
【在 n*********y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我最近用fmoc化学固相合成一个11肽,c端含flag tag 序列(8肽),n端是三个疏水氨 : 基酸。合成产率正常,纯度也不错,可是质镨分析显示分子量多出50。我试过了延长脱 : 保护时间到16小时,仍然去不掉多出的分子量。MS/MS分析也找不出到底是哪一个氨基 : 酸出了问题。 : 我用的试剂都是常见的:DMF,piperidine,HBTU,MMP,OBut-Asp,OBut-Tyr,Boc : -Lys。 : 恳请大虾指点问题出在哪。
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n*********y 发帖数: 54 | 4 多谢大家的回复。MMP是N-methylmorpholine。我试过了3小时和16小时脱保护,结果没
有太大区别。经过重新分析质谱结果,我相信多出的分子量49(之前以为是50)是由于
有一个piperidine adduct(+67)和一个aspartimide(-18)的结果。只是仍不清楚
到底是哪两个Asp的side chain发生了副反应。我查到两篇报导化学合成flag peptide
的文献,都是用fmoc化学固相合成的。一篇用的试剂和我用的大同小异,不过是手工合
成的。难道手工合成可以避免aspartimide的生成?我已经用很短的时间脱fmoc了。(
2X2min)
最后一招就是用Boc化学合成了,如果实在没有别的办法的话。
有人用fmoc化学作成过flag peptide吗? |
o****e 发帖数: 1011 | 5 常温下做(如果不是比如microwave加温什么的)也那么容易生成aspartimide啊。。。
脱fmoc所用的溶液里可以增加“0.1M HOBt这一组分”,看到有说这样可以避免生成
aspartimide。(不过我自己没试过。)
2X2min)
【在 n*********y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 多谢大家的回复。MMP是N-methylmorpholine。我试过了3小时和16小时脱保护,结果没 : 有太大区别。经过重新分析质谱结果,我相信多出的分子量49(之前以为是50)是由于 : 有一个piperidine adduct(+67)和一个aspartimide(-18)的结果。只是仍不清楚 : 到底是哪两个Asp的side chain发生了副反应。我查到两篇报导化学合成flag peptide : 的文献,都是用fmoc化学固相合成的。一篇用的试剂和我用的大同小异,不过是手工合 : 成的。难道手工合成可以避免aspartimide的生成?我已经用很短的时间脱fmoc了。( : 2X2min) : 最后一招就是用Boc化学合成了,如果实在没有别的办法的话。 : 有人用fmoc化学作成过flag peptide吗?
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