n*********y
发帖数: 54 | 1 我最近用fmoc化学固相合成一个11肽，c端含flag tag 序列（8肽），n端是三个疏水氨
基酸。合成产率正常，纯度也不错，可是质镨分析显示分子量多出50。我试过了延长脱
保护时间到16小时，仍然去不掉多出的分子量。MS／MS分析也找不出到底是哪一个氨基
酸出了问题。
我用的试剂都是常见的：DMF，piperidine，HBTU，MMP，OBut－Asp，OBut－Tyr，Boc
－Lys。
恳请大虾指点问题出在哪。 |
fe
发帖数: 286 | |
o****e
发帖数: 1011 | 3 怎么会需要这么长时间（16小时）脱保护？2.5小时不够吗？我觉得“时间短些”好些。
具体用的是什么resin？（这里的“MMP”是说什么？NMP？）
Boc
【在 n*********y 的大作中提到】
: 我最近用fmoc化学固相合成一个11肽，c端含flag tag 序列（8肽），n端是三个疏水氨
: 基酸。合成产率正常，纯度也不错，可是质镨分析显示分子量多出50。我试过了延长脱
: 保护时间到16小时，仍然去不掉多出的分子量。MS／MS分析也找不出到底是哪一个氨基
: 酸出了问题。
: 我用的试剂都是常见的：DMF，piperidine，HBTU，MMP，OBut－Asp，OBut－Tyr，Boc
: －Lys。
: 恳请大虾指点问题出在哪。
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n*********y
发帖数: 54 | 4 多谢大家的回复。MMP是N-methylmorpholine。我试过了3小时和16小时脱保护，结果没
有太大区别。经过重新分析质谱结果，我相信多出的分子量49（之前以为是50）是由于
有一个piperidine adduct（＋67）和一个aspartimide（－18）的结果。只是仍不清楚
到底是哪两个Asp的side chain发生了副反应。我查到两篇报导化学合成flag peptide
的文献，都是用fmoc化学固相合成的。一篇用的试剂和我用的大同小异，不过是手工合
成的。难道手工合成可以避免aspartimide的生成？我已经用很短的时间脱fmoc了。（
2X2min）
最后一招就是用Boc化学合成了，如果实在没有别的办法的话。
有人用fmoc化学作成过flag peptide吗？ |
o****e
发帖数: 1011 | 5 常温下做（如果不是比如microwave加温什么的）也那么容易生成aspartimide啊。。。
脱fmoc所用的溶液里可以增加“0.1M HOBt这一组分”，看到有说这样可以避免生成
aspartimide。（不过我自己没试过。）
2X2min）
【在 n*********y 的大作中提到】
: 多谢大家的回复。MMP是N-methylmorpholine。我试过了3小时和16小时脱保护，结果没
: 有太大区别。经过重新分析质谱结果，我相信多出的分子量49（之前以为是50）是由于
: 有一个piperidine adduct（＋67）和一个aspartimide（－18）的结果。只是仍不清楚
: 到底是哪两个Asp的side chain发生了副反应。我查到两篇报导化学合成flag peptide
: 的文献，都是用fmoc化学固相合成的。一篇用的试剂和我用的大同小异，不过是手工合
: 成的。难道手工合成可以避免aspartimide的生成？我已经用很短的时间脱fmoc了。（
: 2X2min）
: 最后一招就是用Boc化学合成了，如果实在没有别的办法的话。
: 有人用fmoc化学作成过flag peptide吗？
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