c****r
发帖数: 126 | 1 我做HPLC的时候，最近出现一个问题，基线出现大的漂移。流动相为(A)0.1% TFA/
water, (B)0.1% TFA/acetonitrile, C18 column, 如果是isocratic没有什么问题，但
是走梯度的时候，比如%B从10到30， 基线就出现大的漂移，呈现为一条和水平相交30
度甚至更大的直线。我换了柱子，重新配流动相，把B的TFA去掉，用IPA洗流通池都没
有解决问题，还有什么可能？ |
c***r
发帖数: 3965 | 2 走个复杂点的梯度，比如10到30再到10，基线会往下走否？
30
【在 c****r 的大作中提到】
: 我做HPLC的时候，最近出现一个问题，基线出现大的漂移。流动相为(A)0.1% TFA/
: water, (B)0.1% TFA/acetonitrile, C18 column, 如果是isocratic没有什么问题，但
: 是走梯度的时候，比如%B从10到30， 基线就出现大的漂移，呈现为一条和水平相交30
: 度甚至更大的直线。我换了柱子，重新配流动相，把B的TFA去掉，用IPA洗流通池都没
: 有解决问题，还有什么可能？
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c******m
发帖数: 884 | 3 change the UV wavelength. ACN has absorption at low wavelength then gives
you a baseline shift.
30
【在 c****r 的大作中提到】
: 我做HPLC的时候，最近出现一个问题，基线出现大的漂移。流动相为(A)0.1% TFA/
: water, (B)0.1% TFA/acetonitrile, C18 column, 如果是isocratic没有什么问题，但
: 是走梯度的时候，比如%B从10到30， 基线就出现大的漂移，呈现为一条和水平相交30
: 度甚至更大的直线。我换了柱子，重新配流动相，把B的TFA去掉，用IPA洗流通池都没
: 有解决问题，还有什么可能？
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c****r
发帖数: 126 | 4 走过了，如果只是走10（isocratic),基线是平的；走梯度10到30，基线就漂移； 再到
10，基线又回到开始的水平，并保持平稳。所以我想问题在于走梯度的时候，也许TFA
或者acetonitrile的问题，可是去掉TFA，换acetonitrile还是如此，不知道什么原因。
【在 c***r 的大作中提到】
: 走个复杂点的梯度，比如10到30再到10，基线会往下走否？
:
: 30
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c****r
发帖数: 126 | 5 波长214nm,确实有点低，但是以前走同样的波长和梯度，没有这个漂移的问题啊。
【在 c******m 的大作中提到】
: change the UV wavelength. ACN has absorption at low wavelength then gives
: you a baseline shift.
:
: 30
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c******m
发帖数: 884 | 6 are you using the same type of ACN? or from the same vendor? some type of
organic solvent has stronger UV absorbance.
another reason is some thing is stuck on your column and can only be eluted
out by ACN.
【在 c****r 的大作中提到】
: 波长214nm,确实有点低，但是以前走同样的波长和梯度，没有这个漂移的问题啊。
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P***e
发帖数: 804 | 7 mobile phase B 10-30% gradient内 baseline linearly increase. 听起来像是
ACN的问题。Try higher wavelength such as 254 nm, if no baseline drifting,
most likely it is the ACN impuritiy problems.有没有试过不同batch或vendor 的
ACN？
题，但
30
【在 c****r 的大作中提到】
: 我做HPLC的时候，最近出现一个问题，基线出现大的漂移。流动相为(A)0.1% TFA/
: water, (B)0.1% TFA/acetonitrile, C18 column, 如果是isocratic没有什么问题，但
: 是走梯度的时候，比如%B从10到30， 基线就出现大的漂移，呈现为一条和水平相交30
: 度甚至更大的直线。我换了柱子，重新配流动相，把B的TFA去掉，用IPA洗流通池都没
: 有解决问题，还有什么可能？
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f*****r
发帖数: 5 | 8 走gradient ACN，baseline 不漂不就不正常了嘛
30
【在 c****r 的大作中提到】
: 我做HPLC的时候，最近出现一个问题，基线出现大的漂移。流动相为(A)0.1% TFA/
: water, (B)0.1% TFA/acetonitrile, C18 column, 如果是isocratic没有什么问题，但
: 是走梯度的时候，比如%B从10到30， 基线就出现大的漂移，呈现为一条和水平相交30
: 度甚至更大的直线。我换了柱子，重新配流动相，把B的TFA去掉，用IPA洗流通池都没
: 有解决问题，还有什么可能？
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s*******c
发帖数: 179 | 9 Remove TFA from both mobile A and B to see if you still have the same
baseline drift. TFA-water-ACN is known for baseline drift and mixing issue.
If removing TFA helps for the baseline, you can add 0.115% TFA in water and
0.1% TFA in ACN to match the absorbance.
TFA
因。
【在 c****r 的大作中提到】
: 走过了，如果只是走10（isocratic),基线是平的；走梯度10到30，基线就漂移； 再到
: 10，基线又回到开始的水平，并保持平稳。所以我想问题在于走梯度的时候，也许TFA
: 或者acetonitrile的问题，可是去掉TFA，换acetonitrile还是如此，不知道什么原因。
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f******k
发帖数: 5329 | 10 把流动相A和B 弄成pre-mixed
比如，把A弄成0.1% TFA, 90% water, 10% ACN,
把B弄成0.1% TFA, 10% water, 90% ACN
这样一来，你的gradient也要相应改变，但是还是可以弄成和你原来差不多的gradient
，你自己算一下就成了。 |
c****r
发帖数: 126 | 11 谢谢各位解答，是ACN的问题，用了很久这个vendor的ACN一直没有问题，所以没有往这
上面想，没想到这次买来的ACN真的有问题，换了另一个vendor的就好了。 |
