r******y 发帖数: 21907 | 1 我的ligation死活不出东西,原来一做就出,现在折腾多次未果,昨天colony PCR除了
带结果质粒酶切后nothing,一定要在节前做出来,生物同修们,有啥建议?我订了新的
ligase,估计是buffer冻容多次就不好了? |
c*********t 发帖数: 30088 | 2 patpat
我不懂,纯友情帮顶
新的
【在 r******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我的ligation死活不出东西,原来一做就出,现在折腾多次未果,昨天colony PCR除了 : 带结果质粒酶切后nothing,一定要在节前做出来,生物同修们,有啥建议?我订了新的 : ligase,估计是buffer冻容多次就不好了?
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c*********t 发帖数: 30088 | 3 这个包子吃得很香啊
【在 c*********t 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : patpat : 我不懂,纯友情帮顶 : : 新的
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Y*******i 发帖数: 2299 | 4 顶包子
【在 c*********t 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 这个包子吃得很香啊
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K****N 发帖数: 10783 | |
L*****k 发帖数: 13042 | 6 吃
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x*r 发帖数: 11073 | 7 我今天比较忙,刚才抽空打电话问了问LD,他大概说了几点,如果你还需要讨论的话,
晚上可以电话:))
1,Colony PCR 不是很可靠,cycle 数目不可多,要少,最好是控制在25个cycle以下。
2,单酶切连接最好用CIP.
3,制备片段的时候,做酶切的酶是不是同尾酶?
4,Promega的连接酶比invitrogen的要好用。
5,连接片断是通过PCR还是通过酶切拿到的?PCR产物的话,确定有粘性末端吗?
新的
【在 r******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我的ligation死活不出东西,原来一做就出,现在折腾多次未果,昨天colony PCR除了 : 带结果质粒酶切后nothing,一定要在节前做出来,生物同修们,有啥建议?我订了新的 : ligase,估计是buffer冻容多次就不好了?
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l****i 发帖数: 20439 | 8 学术气氛很浓厚...
下。
【在 x*r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我今天比较忙,刚才抽空打电话问了问LD,他大概说了几点,如果你还需要讨论的话, : 晚上可以电话:)) : 1,Colony PCR 不是很可靠,cycle 数目不可多,要少,最好是控制在25个cycle以下。 : 2,单酶切连接最好用CIP. : 3,制备片段的时候,做酶切的酶是不是同尾酶? : 4,Promega的连接酶比invitrogen的要好用。 : 5,连接片断是通过PCR还是通过酶切拿到的?PCR产物的话,确定有粘性末端吗? : : 新的
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O*****a 发帖数: 11621 | 9 ```
【在 l****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 学术气氛很浓厚... : : 下。
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l****i 发帖数: 20439 | 10 把圣诞节改成端午节 应该可以搞定!
新的
【在 r******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我的ligation死活不出东西,原来一做就出,现在折腾多次未果,昨天colony PCR除了 : 带结果质粒酶切后nothing,一定要在节前做出来,生物同修们,有啥建议?我订了新的 : ligase,估计是buffer冻容多次就不好了?
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x*r 发帖数: 11073 | 11 你不会没做过连接吧?@_@
【在 l****i 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 学术气氛很浓厚... : : 下。
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s******r 发帖数: 4749 | 12 牛, 你也是个专家啊
下。
【在 x*r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我今天比较忙,刚才抽空打电话问了问LD,他大概说了几点,如果你还需要讨论的话, : 晚上可以电话:)) : 1,Colony PCR 不是很可靠,cycle 数目不可多,要少,最好是控制在25个cycle以下。 : 2,单酶切连接最好用CIP. : 3,制备片段的时候,做酶切的酶是不是同尾酶? : 4,Promega的连接酶比invitrogen的要好用。 : 5,连接片断是通过PCR还是通过酶切拿到的?PCR产物的话,确定有粘性末端吗? : : 新的
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j****1 发帖数: 15497 | 13 Can't help, I am a in vivo person
新的
【在 r******y 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 我的ligation死活不出东西,原来一做就出,现在折腾多次未果,昨天colony PCR除了 : 带结果质粒酶切后nothing,一定要在节前做出来,生物同修们,有啥建议?我订了新的 : ligase,估计是buffer冻容多次就不好了?
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x*r 发帖数: 11073 | 14 那些都是LD的话,我只是进实验室做过一年实验,现在基本上都忘的差不多了......
【在 s******r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 牛, 你也是个专家啊 : : 下。
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s******r 发帖数: 4749 | 15 你能一字不错的传过来, 就是内行
【在 x*r 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png) : 那些都是LD的话,我只是进实验室做过一年实验,现在基本上都忘的差不多了......
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g***j 发帖数: 40861 | |
D4 发帖数: 733 | |