r******y
发帖数: 21907 | 1 我的ligation死活不出东西，原来一做就出，现在折腾多次未果，昨天colony PCR除了
带结果质粒酶切后nothing，一定要在节前做出来，生物同修们，有啥建议？我订了新的
ligase，估计是buffer冻容多次就不好了？ |
c*********t
发帖数: 30088 | 2 patpat
我不懂，纯友情帮顶
新的
【在 r******y 的大作中提到】
: 我的ligation死活不出东西，原来一做就出，现在折腾多次未果，昨天colony PCR除了
: 带结果质粒酶切后nothing，一定要在节前做出来，生物同修们，有啥建议？我订了新的
: ligase，估计是buffer冻容多次就不好了？
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c*********t
发帖数: 30088 | 3 这个包子吃得很香啊
【在 c*********t 的大作中提到】
: patpat
: 我不懂，纯友情帮顶
:
: 新的
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Y*******i
发帖数: 2299 | 4 顶包子
【在 c*********t 的大作中提到】
: 这个包子吃得很香啊
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K****N
发帖数: 10783 | |
L*****k
发帖数: 13042 | 6 吃
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: patpat
: 我不懂，纯友情帮顶
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x*r
发帖数: 11073 | 7 我今天比较忙，刚才抽空打电话问了问LD,他大概说了几点，如果你还需要讨论的话，
晚上可以电话:))
1，Colony PCR 不是很可靠，cycle 数目不可多，要少，最好是控制在25个cycle以下。
2，单酶切连接最好用CIP.
3,制备片段的时候，做酶切的酶是不是同尾酶？
4，Promega的连接酶比invitrogen的要好用。
5，连接片断是通过PCR还是通过酶切拿到的？PCR产物的话，确定有粘性末端吗？
新的
【在 r******y 的大作中提到】
: 我的ligation死活不出东西，原来一做就出，现在折腾多次未果，昨天colony PCR除了
: 带结果质粒酶切后nothing，一定要在节前做出来，生物同修们，有啥建议？我订了新的
: ligase，估计是buffer冻容多次就不好了？
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l****i
发帖数: 20439 | 8 学术气氛很浓厚...
下。
【在 x*r 的大作中提到】
: 我今天比较忙，刚才抽空打电话问了问LD,他大概说了几点，如果你还需要讨论的话，
: 晚上可以电话:))
: 1，Colony PCR 不是很可靠，cycle 数目不可多，要少，最好是控制在25个cycle以下。
: 2，单酶切连接最好用CIP.
: 3,制备片段的时候，做酶切的酶是不是同尾酶？
: 4，Promega的连接酶比invitrogen的要好用。
: 5，连接片断是通过PCR还是通过酶切拿到的？PCR产物的话，确定有粘性末端吗？
:
: 新的
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O*****a
发帖数: 11621 | 9 ```
【在 l****i 的大作中提到】
: 学术气氛很浓厚...
:
: 下。
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l****i
发帖数: 20439 | 10 把圣诞节改成端午节 应该可以搞定！
新的
【在 r******y 的大作中提到】
: 我的ligation死活不出东西，原来一做就出，现在折腾多次未果，昨天colony PCR除了
: 带结果质粒酶切后nothing，一定要在节前做出来，生物同修们，有啥建议？我订了新的
: ligase，估计是buffer冻容多次就不好了？
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x*r
发帖数: 11073 | 11 你不会没做过连接吧？@_@
【在 l****i 的大作中提到】
: 学术气氛很浓厚...
:
: 下。
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s******r
发帖数: 4749 | 12 牛， 你也是个专家啊
下。
【在 x*r 的大作中提到】
: 我今天比较忙，刚才抽空打电话问了问LD,他大概说了几点，如果你还需要讨论的话，
: 晚上可以电话:))
: 1，Colony PCR 不是很可靠，cycle 数目不可多，要少，最好是控制在25个cycle以下。
: 2，单酶切连接最好用CIP.
: 3,制备片段的时候，做酶切的酶是不是同尾酶？
: 4，Promega的连接酶比invitrogen的要好用。
: 5，连接片断是通过PCR还是通过酶切拿到的？PCR产物的话，确定有粘性末端吗？
:
: 新的
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j****1
发帖数: 15497 | 13 Can't help, I am a in vivo person
新的
【在 r******y 的大作中提到】
: 我的ligation死活不出东西，原来一做就出，现在折腾多次未果，昨天colony PCR除了
: 带结果质粒酶切后nothing，一定要在节前做出来，生物同修们，有啥建议？我订了新的
: ligase，估计是buffer冻容多次就不好了？
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x*r
发帖数: 11073 | 14 那些都是LD的话,我只是进实验室做过一年实验,现在基本上都忘的差不多了......
【在 s******r 的大作中提到】
: 牛， 你也是个专家啊
:
: 下。
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s******r
发帖数: 4749 | 15 你能一字不错的传过来， 就是内行
【在 x*r 的大作中提到】
: 那些都是LD的话,我只是进实验室做过一年实验,现在基本上都忘的差不多了......
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g***j
发帖数: 40861 | |
D4
发帖数: 733 | |
