b******9
发帖数: 102 | 1 我们是终浓度600ug/ml，转染48h后加G418，压2周。 |
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k****n
发帖数: 158 | 4 现要电转一个基因带GFP到3t3细胞，实验室的电转仪比较老BTX630,只有三个参数可以
调节，我参考以前文献设定为250V（LV，还有一个是HV模式），电阻为125Ω，电容为0
.25μF，效果极其惨烈，
我想请问一下，我是应该固定电阻和电容，逐步升高电压来摸索条件吗？比如电阻电容
不变，逐步升高电压到600v？或者用HV模式？
还是固定电压，改变电阻和电容？希望有经验的给我不吝赐教， 拜谢！！！ |
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m******5
发帖数: 1383 | 5 不明白你为啥用电转3T3 Fugene work得挺好啊 |
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j****x
发帖数: 1704 | 6 我们用NIH-3T3在nude mice上做in vivo assay。in vitro自然也可以
很难说有best choice，和你蛋白的种类和来源以及下游设计都有关系
of |
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w***a
发帖数: 4361 | 7 in vitro adipogenesis有个最大的limitation就是无法区分
depot-specific differences，实际上身体各处的fat，
比如omental和subcutaneous fat 的behavior区别狠大。对于这个的研究，
不管是in vitro的3T3 cell 还是precursor stem cell都搞不定。 |
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a****l
发帖数: 125 | 8 请问诸位大侠如何immortalize MEFs? 本人试了一次3T3 protocol (3x105 cells 每3
天传一次）. 传了几代后细胞就不长了。不知怎么回事。有人试过large T antigen 吗？
多谢 |
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i*********0
发帖数: 915 | 9 用shARF可以。
或者3t3， senescence以后，3天换medium一次，等到clonal expansion以后，在传代
。 |
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s********d
发帖数: 156 | 10 我的经验，3T3 protocol trick: 细胞生长变缓以后，3 天换一次液，而不是3天传一
次。。3天传一次的话7，8代以后就不长了，细胞越来越少。。 |
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m******g
发帖数: 69 | 11 Biochem Biophys Res Commun. 2010 Aug 6;398(4):723-9. Epub 2010 Jul 17.
Adipocyte-derived microvesicles contain RNA that is transported into
macrophages and might be secreted into blood circulation.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20621060
这篇paper说脂肪细胞分泌的microvesicle里面的RNA可以转移到macrophages里面，然
后macrophage的adiponeticn和resistin会升高。 他们的方法是，建立一个adipocyte
系3T3-L1，然后培养，然后把adipocyte的culture centrifuge, 提取出supernatant，
然后把supernatant进行ultracentrifuge，沉淀出这种microvesicle
请问这种方法是否可行，因为这步的关键是分离提纯microvesicl... 阅读全帖 |
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H*****e
发帖数: 120 | 12 1. H1299 needs 2-3 weeks for seeing colonies, whereas H460 colonies can be
seen in 5-7 day. If it still does not work, change the mediumn every 4 days
or order new cells from ATCC. We routinely do it and no problem found.
2.It has nothing to do with stem cells. Most stem cell medium are serum
free. But Soft agar uses 10-20% serum (I even saw people use 30% serum for
weak oncogene transformed 3T3.).
Good luck! |
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a******7
发帖数: 7936 | 13 我养C3H10,3T3经常能看到，不清楚是什么，不过感觉好像是细胞不太健康的时候能看到 |
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e**r
发帖数: 1144 | 14 Cell Motil Cytoskeleton. 1994;27(3):262-71.
Cellular infrared detector appears to be contained in the centrosome.
Albrecht-Buehler G.
Source
Department of Cell, Molecular, and Structural Biology, Northwestern
University Medical School, Chicago, Illinois 60611.
Abstract
Previous experiments have suggested that 3T3 cells were able to extend
pseudopodia toward latex particles up to 60 microns away from the cell body
if the particles were irradiated by an infrared beam in the range of 700-900
nm [Al... 阅读全帖 |
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h******y
发帖数: 351 | 15 MEF在20%氧气的培养条件下，很快（6-8个passage以后）就会停止生长。 这是因为MEF
对reactive oxygen species很敏感，由此引起的DNA damage激活p53以及其他信号（正
常生长因子和matrix缺失等）激活p16-Rb通路，引起senescence。你应该问一下他们给
你的MEF的passage，最好要到分离后第1或第2代的细胞，这样你还能用几代。
但是如果你把这些停止生长的细胞保留着（不要传代），过几个星期你会发现细胞又长
起来了，而且越长越好，这就是自发immortalized的细胞。很多MEF细胞系就是这样建立
起来的，例如著名的3T3系列。但是我不建议你用这些immortalized的MEF做实验，因为
上述ROS引起DNA damage的原因，这些自发immortalized的MEF已经产生太多基因变异（
因为需要bypass p53和p16-Rb两个重要通路的抑制），即使你看到表型的差异，也很难
说是你的gene KO的结果。
如果确实需要长久使用MEF，一是拿到老鼠，分离新鲜的MEF做实验。二是利用低氧（3-
5%）条件培养MEF... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 16 对了，你有没有最新的比较温和而成功率又比较高的immortalization MEF的方法？
我们合作者那里有一个新的cell line, 他们用3T3 protocol 试图了好几次都没有
成功。现在我实在是等不及了，打算自己来诱导，但是既然他们没有成功，可能
我们也不一定能成功。
findings |
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n*****k
发帖数: 69 | 17 用EGFP-protein转染3T3细胞。
多谢！ |
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y**u
发帖数: 7459 | 18 too round and homogeneous in shape though, lipid droplets? considering that
it' s 3T3 |
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c*********8
发帖数: 369 | 19 请教各位大侠，最近花了很长时间想弄个GFP-golgi表达的3T3玩玩,但是用 Fugene HD
转染后效率很低， 荧光超级弱， 持续2-3天就不行饿了，想问下版上那位大牛玩过这
类稳定表达的细胞系，能否分享一点质粒或细胞，小弟愿意提供邮寄的费用及一定的报
酬，谢谢 |
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f*******e
发帖数: 354 | 20 这个版真的没有希望了，问个学术问题一个回答都没有，讲起八卦倒是很多人看。
找个阳性对照你为什么不加LY294002呢，U0126也可以的。calpain inhibitor也可以啊 |
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f*******e
发帖数: 354 | 21 去reasearchgate问吧，那里会得到很多回答的
increase
DMEM |
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i*********0
发帖数: 915 | 22 不想从头来做virus的东西了，准备买公司的kit。用过的童靴能不能推荐一个。
另外，我从immortalized MEFs来做 （用的是shARF和3T3）的方法，这种细胞可行么？
真心求教，以前从来没有搞过这种。 |
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y****u
发帖数: 1 | 23 最近开始做3t3l1的ip，但是由于lysate里面脂类太多，ip sample 的目标条带总是比
世纪mw大，而且条带比较弥散，不知道版上有谁有比较多3T3l1 ip经验可以分享一下？
wb我用lammeli buffer裂解所以没有脂类污染的问题，但coip没办法用这么harsh的裂
解液。 |
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W****7
发帖数: 426 | 24 不管什么裂解液，多离心几次取下面的清亮的部分，彻底去掉脂肪部分。话说回来，有
一点也不会影响你的coip的。 |
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W****7
发帖数: 426 | 25 不管什么裂解液，多离心几次取下面的清亮的部分，彻底去掉脂肪部分。话说回来，有
一点也不会影响你的coip的。 |
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d*********e
发帖数: 876 | 26 效果如何？打算试试ATCC的 MEF (CF-1) (ATCC® SCRC-1040™)。
或者有没有推荐的 mouse cell line 作为 transfection host?
之前用 NIH-3T3 做转染,但是很容易就长出 spontaneous foci, 不利于统计转染的
foci 数量。
谢谢！ |
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r******k
发帖数: 446 | 27 Regulation of PDGF-stimulated SHIP2 tyrosine phosphorylation and association
with Shc in 3T3-L1 preadipocytes
[email protected]
(function(){try{var s,a,i,j,r,c,l,b=document.getElementsByTagName("script");l=b[b.length-1].previousSibling;a=l.getAttribute('data-cfemail');if(a){s='';r=parseInt(a.substr(0,2),16);for(j=2;a.length-j;j+=2){c=parseInt(a.substr(j,2),16)^r;s+=String.fromCharCode(c);}s=document.createTextNode(s);l.parentNode.replaceChild(s,l);}}catch(e){}})();
/* ]]> */
谢谢！ |
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w***r
发帖数: 709 | 28 大多数细胞系同源重组率非常非常低。ES细胞同源重组比较高。
可能和细胞dna修复的machinary有关。nhej 比较强,等等。
不同的转染方法也影响重组率，比如ES,普通转染的重组效率远低于电转
另外细胞系,比如 3t3,都是多倍体，而且没办法通过交配形成KO。
有rnai,很多时候没必要做Ko. |
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m*******z
发帖数: 52 | 29 我用了好几个公司的ankyrin G 抗体检测 ankyrin G，都不work,
我用的是 precast SDS-PAGE, 5% milk block/incubation,
NIH/3T3 细胞
sc-28561 rabbit 抗鼠
有求帮忙分析分析 |
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t*x
发帖数: 1065 | 30 用feeder cell
3T3就行
10000rpm
了。 |
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b**s
发帖数: 589 | 31 the simplest 3T3
next time wish i can do some human cells |
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