n********k
发帖数: 2818 | 1 It seems there are lots of options outthere now...Ambion, Exqon, Qiagen, PNA
, Mophorlino-Antisense, or 2-
MO ...etc etc, so any guru outthere, could you please tell me what are the
pro and con of each, or which one
to go with? Thanks a lot.... As well, for siRNA, which company is good, we
are looking at Ambion-Silenced
validated... |
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E****A
发帖数: 184 | 2 Ambion的strip-ez RNA kit不卖了，真郁闷，真不知道那么好用的kit为啥不卖了。给
ambion发信问原因，说一个工作日会给回信的，结果三四天了还不理我。
我是用dig-utp，如果用strip-ez kit的话，在68度incubate 10min就行，而且deprobe
效果非常非常好。现在这个kit不卖了，也没找到相关替代品。大家都是怎么deprobe呢？
80度煮两个小时？那膜能用几次啊？ |
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c*********r
发帖数: 1312 | 5 你确定是Epicentric吗？我没搜到。是不是一个拼写类似的品牌？我在想找一个比
ambion便宜的kit，我其实只需要酶和buffer就行了，Ambion的kit里的其它东西其实可
有可无。。。
多谢！ |
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w********2
发帖数: 632 | 7 http://forum.xitek.com/thread-916984-1-1-1.html
白银帝国——我的100支西德Silver镜头
为什么玩白银，无它，就是沉迷于寒光闪闪的金属色泽。
为什么玩白银，无它，就是执着于传统机械工艺的铿锵质感
为什么玩白银，无它，就是迷恋人类光学工业波折起伏的发展历程
为什么玩白银，无它，就是因为它们是Leica、Zeiss、Voigtlander、Rollei、
Steinheil、Schneider、Rodenstock、Enna、Agfa、ISCO………….
还有两天就要告别单身，步入围城，忙来忙去想来想去还是得写点什么纪念下混迹于色
影的十来年，趁着结婚前，把该玩的玩够吧～
第一组：Leica M/L39系统
如果按照平均价格计算，这可能是白银家族里“含金量”最高的一个系列，当然，也是
整体工艺和光学素质最高的一组，只要一沾上Leica这个魔咒，即使是同款镜，材质和
工艺也比起其他卡口的讲究许多，比方说Nokton，L39口的就比至尊口的外观材质要好
很多……这组俺只有8个，因为它们实在是太费银了～～
Leica M 50/1.4 ASPH... 阅读全帖 |
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w********2
发帖数: 632 | 8 http://forum.xitek.com/thread-916984-1-1-1.html
白银帝国——我的100支西德Silver镜头
为什么玩白银，无它，就是沉迷于寒光闪闪的金属色泽。
为什么玩白银，无它，就是执着于传统机械工艺的铿锵质感
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为什么玩白银，无它，就是因为它们是Leica、Zeiss、Voigtlander、Rollei、
Steinheil、Schneider、Rodenstock、Enna、Agfa、ISCO………….
还有两天就要告别单身，步入围城，忙来忙去想来想去还是得写点什么纪念下混迹于色
影的十来年，趁着结婚前，把该玩的玩够吧～
第一组：Leica M/L39系统
如果按照平均价格计算，这可能是白银家族里“含金量”最高的一个系列，当然，也是
整体工艺和光学素质最高的一组，只要一沾上Leica这个魔咒，即使是同款镜，材质和
工艺也比起其他卡口的讲究许多，比方说Nokton，L39口的就比至尊口的外观材质要好
很多……这组俺只有8个，因为它们实在是太费银了～～
Leica M 50/1.4 ASPH... 阅读全帖 |
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M****e
发帖数: 70 | 9 the essential step is to keep everything as clean as possible.
and do not use anything you are suspicious. Ambion is a good
company that has very good experience dealing with RNA. my
personal experience is that: ALWAYS aliquot reagents. i used
to use DEPC'd ddH2O, but now i would rather use commercial
nuclease free water. try to be a quick and clean hand, quick
and dead, you know that? i.e., you quick and RNase dead, no
no vice versa. when you deal with different biological samples,
you have dif |
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M****e
发帖数: 70 | 10 make sure that you are aware of the buffer effect:
It is estimated that DNA has 15% lower absorbance in TE
buffer, 23% lower in TE+saline compared to water.
1 O.D.260 are 38, 45 and 50 ug/ml for DNA in ddH2O,
TE and TES, respectively. I assume the same for RNA,
and 1 O.D.260 are 40 ug/ml for RNA in TE (from Ambion).
btw, A260/A280 is different for pure RNA
DEPC'd H2O (pH5-6) 1.60
Nuclease free H2O (pH6-7) 1.85
TE (pH8.0) 2.14 |
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g****r
发帖数: 14 | 11 I have been using invitrogen 2 step RT kit for a while,
always give me very good result ...
On possible is in your case, your total RNA might
be partially degraded, so that you can only get the
shorter segment, instead of the 1kb product
suggestions:
1) double check your primer design
and PCR condition (TM, Mg conc. pfx? or taq, or pfu?)
2) if everything seems to be correct
be more strict with your RNA extraction
use the ambion RNaseZap to remove environmental factors
(just as much a |
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r******i
发帖数: 8 | 12 Dosen't matter.
Storage at –20°C can also be used for archival samples. Samples
will not freeze at –20°C, but crystals may form; this will not
affect subsequent RNA isolation. Samples can be stored at
–20°C indefinitely.
From Ambion |
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T****r
发帖数: 4006 | 13 ambion没用过
invitrogen，bio-rad都用过，印象中都还还不错 |
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H****N
发帖数: 997 | 16 作microarray为什么要合成第二链？很多公司都有合成第二链的kit,check invitrogen
, or ambion. |
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a****o
发帖数: 1786 | 17 而且就是标记时剂量大，真正的实验很小的，我通常1000cpm/样品
Ambion MaxScript |
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h***a
发帖数: 145 | 20 恩我不是问进入细胞后的效率，而是问delivery的效率。有人做过lung injection么？
intranasal 还是intratracheal 啊？
还有，有谁有经验那个公司好点啊？我知道ambion和invitrogen都有， 还有santa
cruz也有。 |
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p******d
发帖数: 3737 | 21 实验要用siRNA 瞬时knockdown贴壁细胞系老鼠的Notch1和Notch4。有没有人推荐哪个
公司的哪个
产品效率比较好的？
我初步看了一下ambion的产品，不知道买多少比较合适？怎么稀释？有没有前辈有转染
的protocol可
以参考一下。我打算是要做T25的小flask，因为要比较多的细胞跑流式的。 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 22 Ambion
他家有mRNA enrichment的kit
自己去看就好啦 |
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f***n
发帖数: 34 | 23 The kit from Ambion (now ABI) is very good. I did some RACE before. FYI |
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x******8
发帖数: 350 | 24 5RACE最重要的是你的RNA质量要好，其实clontech的挺好使的，ambion的比较复杂，我
就没有选。我已经全长克隆了3个基因。 |
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p******d
发帖数: 3737 | 25 有人用过鼠的Notch4 siRNA吗，有没有什么经验，已知work的sequence或者哪个公司的
产品好用
的？试过ambion presigned的 notch1 的siRNA，完全不管用。 |
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x*****d
发帖数: 704 | 27 最近老板让偶从Fibroblast里面分离mRNA. 试过了Ambion的microPolyA和invitrogen的
ribominus,感觉效率都不是特别好. 尤其是ribominus,用bioanalyzer检查感觉tRNA没
有除掉. 各位大牛有没有什么好推荐的? |
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t*********1
发帖数: 418 | 28 我用的是Ambion's Turbo DNase. 最近，用这种来除去RNA样品中的DNA老是有挺多的残
余DNA剩下。对了，RNA 是要用来做qPCR. |
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E****A
发帖数: 184 | 29 RNA probe的话，最好hybri和wash都用68度，可以最大程度减少背景和非特异杂交，我
用的是ambion的ultrasensitive hybridization buffer |
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C*******e
发帖数: 4348 | 30 你要的基因有多长？
一个是前面RNA提得要好
做后面的实验的时候如果有可能就加些RNaseIn之类的RNase inhibitor
Ambion,Promega之类的公司都有的
另外就是反转录酶要好
像ls有人说的invitrogen的
还有我用过USB的M-MLV的也不错 |
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C*******e
发帖数: 4348 | 31 这种kit太多了吧
现在几乎每个生产试剂盒的公司都有
被广泛使用的一个是qiagen的RNAeasy
还有就是Ambion的kit了
不过要看你材料是什么
有的东西其实还是phenol chloriform的效果好 |
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s********l
发帖数: 1195 | 32 we use Ambion kit on a constant base, pretty reliable. |
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w******e
发帖数: 1187 | 33 of coz there are many ppl in companies like ambion, invitrogen, etc.
you should try taociing with tech support w/ chinese names:) |
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w******e
发帖数: 1187 | 34 我同学做过。直接打就行。需要点仪器（比如syringe pump之类）。
也可以考虑买点dharmacon/ambion的所谓self-delivering siRNA呵呵 |
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m***T
发帖数: 11058 | 35 二代技术靠什么赚钱？机器本身只是一部分，另外的可持续性的营收还是在于reagents
。SOLiD的一个优势正在于此，invitrogen和ambion分别提供DNA和RNA的kits，这点儿
ILMN是比不上的。另外，由于是dibase，所以accurate rate会略高些。ILMN的优势在
于市场份额（处于dominate的地位）以及简单的workflow。至于454的位置则比较尴尬
，throughput比不上前两家，read length又比不上三代技术，所以市场应该会进一步
萎缩。
三代技术目前看还不够成熟，以领先的PacBio为代表，error rate高及throughput低的
问题都还没有得到有效的解决，而且这些不是短期内就能解决得了的。我个人感觉
PacBio野心太大，最近一年来扩展的步伐相当大，招了不少可招可不招的人，对于一个
产品没有上市，完全靠烧钱过日子的startup来说它的步子太大了点儿。它的这种
marketing strategy比较risky，如果成功可以一下领先对手不少，一旦结果不好，甚
至有可能会重蹈helicos的覆辙。
严格意义上讲Comp... 阅读全帖 |
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V*f
发帖数: 171 | 37 siRNA transfection only gives transient knockdown (3-7 days). If the
phenotype takes longer than 3-7 days to show, then siRNA hardly works.
Also some cell types are not easy to transfect.
Dharmacon and Ambion are good companies for siRNAs. |
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F*****e
发帖数: 182 | 38 genotype最快也得2-3个小时吧，把胚胎的尾巴拿来用NaOH煮一下，Tris-HCl中和以后
离心取上清
直接做PCR，PCR run一个半小时，跑胶20min。
今天听说Ambion也有一个RNAlater solution，把tissue放在里面很稳定，据说很牛。
我们就是想看看mutant里面哪些基因的RNA水平有变化，然后跟phenotype联系起来好找
mechanism
啊。
做library的话facility用的是illumina mRNA sequencing sample preparation kit，
两天完成library，似乎不用花太大力气。有没有做过的朋友？ |
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c**A
发帖数: 1474 | 39 才发现Ambion不卖这个东东了。
有人知道哪里可以搞到 guanylyltransferase enzyme 么？
我需要5'cap labelling my RNA transcripts.
多谢。。 |
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a****o
发帖数: 1786 | 40 买个Ambion的kit, 里面就有Promoter序列 |
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m******5
发帖数: 1383 | 41 specifically which kit from Ambion?
I knew the sequence, but I was not sure if we can directly add the sequence
in a 5' to 3' manner upstream of antisense primer, is there any requirement
in the regards of linker or flanking sequence? |
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c*********r
发帖数: 1312 | 42 T7 TAATACGACTCACTATAGGG
T3 AATTAACCCTCACTAAAGGG
这是Ambion里的序列。
我都是直接加在引物5'直接P下来做模板，起始模板量足够的话，产量还不错。 |
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p********i
发帖数: 116 | 43 请问 现在在线的shRNA都用哪个设计，给推荐一个吧。找了个ambion在线的，弄了6个
一个都没效。谢谢！ |
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m***o
发帖数: 272 | 46 在做5-race，目的是得到一个蛋白的short form。已经得到了一个从exon6开始转录的
短的RNA，而且也得到一些UTR序列在5intorn。 用的是ambion First choice RLM RACE
KIT. 得到的片段测序，mRNA起始的位点总是不一样。起始点最长有60bp的差别。而且
在UTR序列里面有3个ATG都在读码框架里，请问怎么知道哪个ATG是真正的翻译起始点？
除了RACE，还有什么实验可以确定mRNA的起始点呢？
另外一个问题，在做另一个蛋白的RACE时候，得到过两次先表达Exon5,然后是exon2的
序列，有这样的exon rearrangement 吗？就是先转录下游的exon然后再回过头转录上
游的exon? 第一次得到这个结果的时候觉得可能是artificial，但是用不同的primer又
得到了一次这样的结果。而且还是complete的exon序列。请各位发表点意见建议吧，我
google也没有找到类似的事情。 |
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f****n
发帖数: 114 | 47 小弟最近在做RNA in vitro transcription，用的是ambion 的MEGAscript kit。
可是不论是用PCR产物直接做模板，还是连接到质粒上再线性化做模板，都得不到sharp
的条带，size比预期小很多并且有拖尾，但kit里阳性对照可以出来。
已经排除了RNase污染。估计是DNA模板纯度的问题，请问各位PCR产物用啥方法纯化？
另外，我在T7promoter序列前面加了7个碱基，难道是这个影响酶的效率？
请各位高手帮忙！ |
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s******y
发帖数: 28562 | 48
抑制剂？
这两个已经几乎是最好使的了。要研究半衰期特别长的话就只能上同位素了
有人已经说了，就跟下水道塞子和龙头的关系一样。如果一个蛋白降解得快的话，
用MG132会导致它出现积累，相对于不降解的蛋白就会有比较大比例的升高。
当然，你不能同时加cycloheximide，否则就成了左脚踩刹车右脚踩油门了
还可以用其他方法标志的氨基酸或者核酸。比方说我记得某个公司（either promega
or Ambion) 有卖用biotin 或者荧光标记的amino acid/Nulceotide kit, 似乎可以用
来做pulse-chase |
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m***T
发帖数: 11058 | 49 楼上shakuras的几个贴子已经解释得挺清楚了。每个平台都有它的优缺点。Ion的优势是
simplicity, speed and scalability。说得通俗些，它的机器本身就是一台敏感度很
高的pH meter，核心技术其实都在chip里，所以它的运营成本会比较低。这些优点在
IVD方向都是比较重要的几个因素。
但它目前也有自己的缺点，比如throughput相对低，再有就是还需要emulsion PCR，都
是不利因素。好在目前整个公司对Ion项目的支持力度很大，有了invitrogen和ambion
的reagents，再加上AB这么多年在仪器方面的经验，所以Ion的前景应该还是不错的。
比如，Ion能在这么短的时间内发布OneTouch（自动化地emPCR），和整个公司对它的大
力支持是分不开的。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 50 btw，我觉得invitrogen/ambion的路线就很赞：那些产品，基本都是行家动动
脑子搞点白菜价的chemical就能组装起来，但对外行来说比较难搞。他们
做做troubleshooting、optimization，写个破傻瓜protocol后拿出去当猪肉卖。
今天看到一个labeling kit，3 reactions for $300。。。
当然了，逐渐的都要变lo-tech。生命需要折腾lol |
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