v*******l
发帖数: 5042 | 1 "bead head是多重的？"
1/8 ounce，好像。重量不重要，主要是看和钩子的大小比例，不能太失调。 |
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v*******l
发帖数: 5042 | 2
霍霍，我这人比较懒，如果一种fly制作过于复杂，不管多么逼真，我就兴趣不是很大
。美其名曰：尽力追求简洁、有效的流派，实则是找借口。
我会逐步把一些常用的发上来供参考，例如bead chain leech、woolly bugger等，制
作都不是很复杂，但很常用、通用。 |
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l*******e
发帖数: 6436 | 3 我最近老拿它们钓sunfish玩，同样的尺寸材料颜色，leech总不如bead head，不知道
为什么 |
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p****u
发帖数: 22764 | 4 没法出去钓鱼的时候我也常用你推荐的bead head在附近玩，钓太阳鱼很灵，还隔三差
五来个大嘴 |
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S**********s
发帖数: 4534 | 5 bead sight足够了。
ghost ring至少要在25码-50码+的slug shooting优势才比较明显 |
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S**********s
发帖数: 4534 | 6 bead sight实际上是让你用枪管去指目标。 |
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a****c
发帖数: 54 | 7 我看见网上glass bead（lampwork)的图片， 羡慕的不行，找了几本书， 觉得还是应
该上个什么班学学， 至少摸清工具应用， 看看自己有没有天分， 才好决定是否投资
精力和时间。 毕竟光工具也要几百刀。 网上没找不到什么信息。 哪位高手给个指引
， 知道纽约附近有没有这样的artist / workshop / class...多谢多谢。。。 |
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o**w
发帖数: 469 | 9 kittybaby mm maybe busy with the beads I sent her in the mail last week haha
! |
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p***y
发帖数: 516 | 10 large hole的是穿皮绳用的吧？
你的silver bead是现成的，还是要新买啊，新买就买hole小点的，如果是现成的，可
以配别的用 |
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a***e
发帖数: 1010 | 11 how do you know your proteins are on the beads?
how about biotin competitive elution? |
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a***e
发帖数: 1010 | 12 其实可能是减速过程中，溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没
事了. |
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s******r
发帖数: 2876 | 13 那就不开刹车减速试试。
其实可能是减速过程中，溶液把 beads 重新冲起来。你把 50 ml 分成几个 15ml 就没
事了. |
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s******s
发帖数: 13035 | 14 rpm是够了，时间太短，延长到半个小时试试。
5min只够beads跑到ep管的管底，想象你50ml的管子有多长
5min |
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w******e
发帖数: 1187 | 15 thx for the input. I did that too. but when I tried to verify it
by directly measuring the proteins on beads, the result didn't add up... |
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w******e
发帖数: 1187 | 16 想找人交流一下心得。我现在瞎调各种condition，换buffer换pH换beads Protein
配比换salt concentration，誓死要把conjugation搞上去~嘿嘿 |
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s******e
发帖数: 1073 | 17 NI-NTA 和 Talon mental beads 相比， 纯化的效果那个好些？
谢谢！ |
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b******n
发帖数: 4225 | 18 取决于你的目的啦
Talon基于cobalt跟his tag结合，
优点是不太容易被lysate里面的巯基乙醇，DTT等还原
跟E.coli内源的含his的蛋白(如SlyD)结合力弱，纯化效果好
缺点嘛，就是有时候跟目的蛋白都不能结合
Ni-NTA的缺点差不多跟Talon反过来吧
NI-NTA 和 Talon mental beads 相比， 纯化的效果那个好些？
谢谢！ |
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m**i
发帖数: 47 | 19 我想把没有biotin的DNA（400bp)从有biotin的DNA（100bp)中分离出来。 之前做small
-scale的时候用的是NEB的streptavidin magnetic bead，效果非常好，而且很方便。
但是现在做large-scale, 感觉太贵了。之后试了pierce的streptavidin cartridge 和
resin, 都没有NEB的分得干净，而且还有20-30%的损失。我不确定是我操作不得法，还
是pierce确实没有NEB好用。
烦请前辈给推荐个好用的产品或者指点一下方法。
不胜感激。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 20 另外，你分离400bp和100bp的DNA，为什么不用胶？虽然没有beads方便，不过便宜太多
了。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 21 why not recycle the beads afterwards?
small |
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w******e
发帖数: 1187 | 22 I never tried myself either hehe. theoretically, there is a kd involved
(though it's very very low) so you can compete the DNA off. or some
harsh condition (heat, NaOH, etc) may elute the DNA off. don't know
whether you can still use the beads after that thou hehe |
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T**********t
发帖数: 1604 | 23 就是不知道一次上样量能多少。你可以先少上一点，然后慢慢加。反正柱子是反复用的
，绝对renewable。最后就是洗脱体积大一点。用concentrator浓缩一下再乙醇沉淀，
应该recovery也不会太差吧。总的来说比beads便宜，比跑胶方便。 |
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j*****a
发帖数: 658 | 24 I need do IP and 1st antibody is polyclonal. Can somebody recommendate a
company with good proteinA-coupled sepharose beads? I will order soon.. GE
health has protein A sepharose CL-4B seems veryyyyy expensive, they only
have 25ml size which is ~$1395. Can someone recommendate another one with
good quality and not so expensive? Thank you guys very much. |
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j*****a
发帖数: 658 | 26 10-20ul/reaction, right? Thank you for sharing your info. No, I don't need
25ml, but I know GE health's beads are very good, but they only have 25ml
size.. |
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r******y
发帖数: 21907 | 27 不错，我也需要m beads信息。。。
form, |
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T****s
发帖数: 915 | 28 之前是用 Na3N 加到 buffer 里面防菌，但是这东西是不是很毒？ 除此之外还有其他什
么保存方法吗？
如果用酒精或者 酒精＋buffer 保存，会不会影响beads 的效果？ |
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S*****s
发帖数: 287 | 29 我们买来的 beads 就是在 20% 酒精里，用之前离心，用 PBS 洗两次就可以用。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 31 其实一个biotin跟SA的binding ms没想象的NB。我把biotinylated aptamer
coat到SA beads上做过sandwich assay，结果发现heat后掉下来的
aptamer造成极大background。杯具。。。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 32 我的assay是biotin RNA beads+protein +unlabeled alternative RNA,
要elute unlabeled RNA的话除了heat外有什么比较保险的方法吗？
0.1M NaOH? |
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A******y
发帖数: 2041 | 33 Magnetic bead? I am using the invitrogen epoxy resin for IP (invitorgen co-
IP kit, expensive but amazing result), zero background and no light and
heavy chain at all. |
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z****g
发帖数: 3340 | 34 有个东东叫Dynabeads from invitrogen, you can order protein A or G beads.
Good luck.
cruz的
A |
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v******n
发帖数: 257 | 35 你们实验室用这个做ChIP吗？还是做普通的IP？
普通的IP我没问题，用什么beads都行，就是ChIP做不出来 |
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s******s
发帖数: 13035 | 36 应该有这样的技术吧，就是表达某个跨膜biotin蛋白，然后用beads
纯化这样的细胞。有没有什么paper做这个的，或者名字我可以google的
多谢了 |
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b*******g
发帖数: 1040 | 37 本人没做过蛋白纯化，对其一无所知。现以构建了GST表达质粒，要转化到rosetta 2
感受态细胞中，然后纯化蛋白，请大家推荐beads. 请告知详细信息，如公司，catalog
number.
本人菜鸟一个，望大家帮助！
谢谢！！！！！！ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 38 //products.invitrogen.com/ivgn/product/G2879
is half price of GE Life Glutathione Sepharose™ High Performance
Description
Glutathione agarose prepared by linking the sulfur atom of glutathione to crosslinked beaded agarose can
be used for purification of GST fusion proteins. Each milliliter of gel can bind approximately 5-6 mg of
boivine-liver GST.
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GE Life Glutathione Sepharose™ High Performance
Binding capacity* » 10 mg recombinant GST/ml medium
* Binding capacity wil... 阅读全帖 |
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A*******e
发帖数: 284 | 39 E.coli表达的GST融合蛋白，需要纯化。 请推荐一款简单好用的beads。 多谢！ |
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w*********n
发帖数: 439 | 40 各位大虾，我是新手，正准备开始做拿小鼠T cell作 CHIP assay。
请问你们都是用的那个公司的protein A/G beads？ protein A 和G 该选择那个？
非常感谢~ |
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s*********t
发帖数: 600 | 41 GE的beads
A还是G跟抗体有关
兔子多抗用a
老鼠单抗g |
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w*********n
发帖数: 439 | 42 多谢回复，请问你用magnitic beads吗？ |
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m*********r
发帖数: 49 | 43 都准备从Sigma买Protein A beads了然后自己crosslink了，又从Thermo搜到Crosslink
+ CoIP的kit，用的是disuccinmidyl suberate (DSS)，貌似也不贵多少，还省事。有
人用过这个的推荐么？Kit好像也有magnetic和agarose的可以选，是不是一般magnetic
的方便点？ |
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f*****f
发帖数: 195 | 44 我自己一般用DMP 自己crosslink，没用过那个kit。
crosslink也没什么繁琐步骤，kit和买粉末应该也没啥区别。
一般magnetic beads总体上要贵些，好处是可以用磁铁吸附，大小很均一，而且不像
agarose那样容易变形，不必离心。
Crosslink
magnetic |
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s********n
发帖数: 248 | 45 我想做cytokine bead array比较wildtype 和mutant 的mouse GM-CSF dendritic cell
的cytokine expression区别。之前的数据表明，mutant GM-CSF DC有增强的migration
，和antigen presentation。我还想比较一下cytokine secretion。
目前有BD的mouse inflammation kit，还有life technologies的luminex kit (10 and
20).大家谁用过他们的或者别家kit，能帮忙推荐一下吗？ |
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C**1
发帖数: 57 | 46 我将靶基因与Strepdavidin tag 融合表达质粒转染在293T细胞，然后准备通过蛋白免
疫沉淀方法找到与靶蛋白相结合的蛋白复合物。第一次做这个实验，想问问有经验的用
哪个公司的Streptavidin beads效果最好？Perice 的还是invitrogen的Dynabeads&#
174; M-280 Streptavidin？谢谢！ |
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g*****s
发帖数: 1016 | 47 各位朋友，
小弟最近需要将ssdna immobilize到beads上 要求是这些dna在高温下不脱落 求方法！
用过几个月straptavidin-biotin 总会看到少量的脱落 不理想 |
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g*****n
发帖数: 241 | 48 RT，我用FLAG beads(M2) IP了我的蛋白，结果跑WB之后蛋白对应的带只被蛋白自己的
抗体认，却不被anti-FLAG认？请问大概是什么原因？
谢谢 |
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h****6
发帖数: 229 | 49 Don't know if this is the right forum to ask. but any way, does anyone know
who makes carboxyl magnetic beads 磁珠 (polystyrene coated, not silica coated)in
China? |
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f***a
发帖数: 11477 | 50 谢谢版上各位大牛的帮助
现在问题解决了
换成了lacey support film，然后增加了真空干燥这一步骤
现在可以非常稳定地观察这么大的mag beads了 |
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