b*********2
发帖数: 35 | 1 用Cy3标记的siRNA很久了。一直都是红色荧光。
最近读两篇文章多说CY3是绿色荧光。
WiKi上也是这么说的：Cy3 dyes are green (~550 nm excitation, ~570 nm emission
and therefore appear green)。
到底怎么回事呢？ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 2 那是软件里为了区分不同荧光标记而设置的pseudo color吧，可以改的。你可以把它设
成自定义的任何颜色。显微镜捕捉记录下来的只是单色图像而已，颜色什么的都是软件
做的后处理。我曾经给它设过很漂亮的蓝紫色。
而且cy3和cy5的荧光用肉眼很难看见的，不信你直接用目镜看，绝对没有电脑屏幕上那
么亮的点。但是如果你眼力够好，用肉眼能看见，那荧光应该是绿色的。
据说女生的眼睛对cy3的荧光更敏感一些。 |
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Z**********g
发帖数: 222 | 3 这也取决于显微镜的emission filter吧.Filter设在570nm以上,肉眼看也应该是黄色的
,而不是绿色.Cy3的emission peak在570nm,已经是浅绿偏黄了,所以说Cy3是黄色也没错.当然,一切取决于detector filter. |
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s*********y
发帖数: 387 | 4 both green laser at 514 nm or red (actually yellow) laser at 568 or 550 nm
can activate cy3.
for the emission, 570nm is the peak (thus green), however, over 700nm can
still be detected, thus red.
not 100% sure though.
emission |
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e****l
发帖数: 204 | 5 Cy3在 532 nm 激光的激发下，出来的荧光应该是绿色的
但是在普通的光线条件下，标记的样品看起来是粉红色的。这时候看见的应该不是荧光。
同样，Cy5的荧光是红色的。但标记的样品在普通光线条件下看起来是蓝色的。
emission |
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b*********2
发帖数: 35 | 6 我用confocal拍的Cy3-siRNA，一直都是红色荧光。 |
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s******9
发帖数: 283 | 7 没啥经验，不想被评审挑剔，请教大牛怎样才是普遍接受的组合？
FITC, green?
Cy3, red?
Cy5, blue? |
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x*****o
发帖数: 441 | 8 最近需要cy3, cy5做标记, 发现实验室有的已经过期了, 今年5月过期的. 很纠结是重
新定一些还是就用这些过期的. 这个好像很贵, 一包200多. 实验室还有5,6包.
这种dye过期了有很大影响吗? 上网查了一下说是会影响label的产率和dye的亮度. |
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p******h
发帖数: 163 | 9 想染色两种不同蛋白，cy3和cy5能同时使用么？信号会不会互相干扰？ |
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k*****n
发帖数: 323 | 10 完全没问题。microarray用的就是CY3 VS CY5 |
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s*****i
发帖数: 315 | 11 没有问题，如果二抗浓度太高，信号太强的话Cy3会向Cy5微微bleed-trhough |
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C*I
发帖数: 4736 | 12 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 13 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 14 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
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H*******9
发帖数: 163 | 15 1 95BAB1 Macan S 49,900.00
2 2T Jet Black Metallic 690.00
3 VF Leather Package in Black 1,740.00
4 1D6 Trailer Hitch without Tow Ball 650.00
5 1NP Wheel Center Caps with Colored Porsche Crest 185.00
6 2ZH Steering Wheel Heating 250.00
7 3FU Panoramic Roof System 1,670.00
8 3Y4 Sunblind for Rear Side Windows 250.00
9 7G9 Porsche Car Connect 420.00
10 7X8 ParkAssist (Front and Rear) incl. Reversing Camera 0.00
11 7Y1 Lane Change Assist (LCA) 690.00
12 9AQ 3-zone Climate Control 510.00
13 9VL BOSE&... 阅读全帖 |
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Y***o
发帖数: 4135 | 16 重新排版。。。
===========
1 95BAB1 Macan S 49,900.00
2 2T Jet Black Metallic 690.00
3 VF Leather Package in Black 1,740.00
4 1D6 Trailer Hitch without Tow Ball 650.00
5 1NP Wheel Center Caps with Colored Porsche Crest 185.00
6 2ZH Steering Wheel Heating 250.00
7 3FU Panoramic Roof System 1,670.00
8 3Y4 Sunblind for Rear Side Windows 250.00
9 7G9 Porsche Car Connect 420.00
10 7X8 ParkAssist (Front and Rear) incl. Reversing Camera 0.00
11 7Y1 Lane Change Assist (LCA) 690.00
12 9AQ 3-zone Climate Control... 阅读全帖 |
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r**a
发帖数: 536 | 17
Do you mean witten's paper? That mirror symmetry is different with the "
normal" mirror symmetry. Normal mirror means for the CY3 compactification of
typeII strings there will be a pair of CY3s corresponding to the same low
energy physics. And mathematicians want to know the rigorous statements and
proof about it. It will relate with Gopakumar-Vafa, Donaldson-thomas, blabla
...
"Mirror symmetry" in GL is different. This mirror borrowed the initial
physical meaning of mirror symmetry. But the co |
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x****k
发帖数: 661 | 19 大白兔摔了，zoom ring和focusing ring变得很紧，autofocus还能work。在保修期内
。送到canon repair第一个quote要charge我1450刀！！！
后来我去和客服聊给了我100% labor discount，现在所有的parts加税一共1050刀：
CY3-2358-000 SLEEVE ASS'Y, FIXED 126.66 1
YB2-5661-000 RING, ZOOM ADJUSTMENT 80.46 1
YG2-3529-000 RING ASS'Y, ZOOM 151.05 1
YG2-3536-000 RING ASS'Y, TRIPOD 105.19 1
YG2-3544-000 RING ASS'Y, FOCUS 55.97 1
YG2-3545-000 LENS ASS'Y, 4-5TH GROUP 433.38
我觉得有的东西，比如说YG2-3536-000 RING ASS'Y, TRIPOD ... 阅读全帖 |
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a****a
发帖数: 3905 | 20 oligo microarray实际上不是print, 而是在solid surface上合成.
基本的原理是, 先将一个碱基固定上去,(当然, 是按照一定的pattern
固定大量的碱基在很小的一个区域内, 不过一个点只有一个), 然后通过
光化学反应合成oligo. 一次加入一个碱基, 每回光照的时候都通过
一个特定的mask, 所以有些点加入了这一碱基, 有些点没有.这样就
可以在一个chip上合成各种不同的oligo.
一般而言, 会由若干个不同的oligo代表一个gene, 有些是特异的,有些
是非特异的, 这样根据不同的hybirdization intensity就可以得出所
检测的DNA的量.
PCR类的, 从技术上讲要简单的多, 实际上就是把PCR产物通过极细的针尖
点在slide上, (就是一般的slide啦), 然后固化, 后处理. 一般而言, 在
2cm见方的区域内点上5000到6000个点是可行的.
Probe的标记一般是用荧光染料, Cy3-UTP和Cy5-UTP是最常用的. |
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l*****k
发帖数: 587 | 21 involves fixation of sample, primary antibodies, secondary antibodies(with
fluorescence).
use primary antibody from different source, say, Protein A with rat derived,
while protein B with mouse derived, better be monoclonal, if not,
pre-absorption using irrevalent sample from the same organism is usually
required.
The secondary antibodies are all commercially available, like anti-Rat,
anti-mouse... they are fluorescence labeled, there is a lot of choice...
I personally think cy3 gives the strong |
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g****u
发帖数: 1422 | 22 这是个好方法，我在考虑能不能用个label system直接在SDS-PAGE上做标记。查了一下
最近有这方面的研究，有种Ni-NTA-Cy3可以用来labeling |
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h******u
发帖数: 602 | 23 检测一单链DNA是否形成HAIRPIN， 是不是Nuclease S1就是做好的方法了？初步打算用
Cy3-label 5'end，然后用Nuclease S1处理，如果形成HAIRPIN的话，LOOP就会被降解
，产物RUN PAGE GEL。
从来没用过Nuclease S1,有啥要注意的吗？谢谢了！ |
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h******e
发帖数: 44 | 24 大家一般喜欢用488 543 633.商业化的机器，滤镜组多数是为这个组优化的。另外常用
的激光器也多和这组match.
别的光主要可能你的机器并没有相应的滤镜组或激光器。另外405因为和核染料吸收发
射谱相近,在抗体标记时也少用。
我做的一般是405 488 561 633. alexa dye会比别的染料好一些。特别cy3 cy5时不时
会出现诡异的问题。
再多了会用quantum dot.
你需要看你的机器硬件来决定具体的选择。另外多色标记一般需要很严的对照，扫的时
候最好是弱激光，窄谱线接收，不然假的会很多。 |
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N*****1
发帖数: 404 | 25 请问有人做过CY3 DNA PROBE，它在DMSO中的溶解性怎么样？ |
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Q**********r
发帖数: 214 | 26 50 mer的oligonucleotide，想至少每条上标上5个fluophore（比如cy3），可能吗？
用什么kit
探针是用来做FISH的 |
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b*********2
发帖数: 35 | 27 我记得以前看过confocal的最佳分辨率是 ～0.5 nm。对吗？
这个范围适用于荧光基团的分辨吗？
如果只有一个Cy3标记的RNA，可能用Confocal观察到吗？ |
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Z****9
发帖数: 738 | 28 分辨率指的是能分辨两个物体的最小的距离
如果你有两个荧光团，彼此之间的距离小于比如 0.2 nm，通过普通的confocal是无法
分别出来时一个荧光图还是两个
confocal 能否监察到到一个cy3 标记的RNA，取决于你的系统的灵敏度，和分辨率没有
任何关系 |
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M*****n
发帖数: 16729 | 29 why not google it?
520 and 550 are excitation peaks
570 is the emission peak
however, there is also an emission shoulder at 600
if you excite with 550, it is difficult to observe emmision at 570 with dichrome filter, unless you have confocal with slit or Leica's AOTF. |
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s*****j
发帖数: 6435 | 30
dichrome filter, unless you have confocal with slit or Leica's AOTF.
为什么? confocal with slit 是个什么东西? Leica's AOTF? 所有公司都用AOTF呀
. |
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M*****n
发帖数: 16729 | 31 你要一个可以调节的emission filter, 只能detect 570nm+-几个nm.
否则你的550nm激发光会干扰的。
我以为AOTF是leica的专利呢。 |
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c**p
发帖数: 36 | 32 Should be AOBS, acoustic optical beam splitter。
AOTF is acoustic optical tunable filter. You can get it everywhere, but
Leica patented AOBS. |
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f*******e
发帖数: 628 | 34 吸收最强的在绿色光谱，所以白光的自然光下，肉眼看到的是绿色的互补色，也就是红
色。而荧光的 emission 最强在 570，所以荧光检测到的应该是绿色。
emission |
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b*****l
发帖数: 9499 | 35 相机未必是单色的。还可能是三色的。我一直不理解为啥有人买三色相机。但是，对于
录像来说，可能很重要 -- 毕竟不能随时切换镜头么，分光到不同录像机上又太奢侈。 |
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w******e
发帖数: 1187 | 36 thanks! I'm doing cy3 now, which seem to have an ab also. just want to
find whether there is better alternatives hehe.
BTW, have you used those anti fluorophore Ab? can it achieve nM affinity
as other Abs? Thanks! |
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T**********t
发帖数: 1604 | 38 应该没有吧。
如果激发光是488nm，已经是介于蓝色和绿色边缘了。发射光的波长只会比激发光更大
，所以至少是绿色，甚至会是黄色。
看一下光谱： |
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e**r
发帖数: 1144 | 39 细胞表达的EOSFP, 用弱光激活一下,
另外还跟人要了点作tracing的dye, 应该是cy3 但不知道是free dye还是某种
conjugate
两种样品都看到星光闪闪
激活 |
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f*****f
发帖数: 195 | 40 pseudocolor怎样都无所谓，都可以接受，看你主要想显示哪个通道了，因为人视觉原
因，最无关紧要的弄到blue，这样merge看得更清楚些。三色一般 red, green,blue，
四色一般magenta,red, green,blue |
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s******9
发帖数: 283 | 41 太感谢了！还想问两个问题：
关于四色，ImageJ四色默认为red/green/blue/gray。是不是magenta比gray要更受欢迎
？blue在黑色背景下有点暗，用cyan代替好不好？ |
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v***a
发帖数: 1242 | 42 谢谢提醒！我的滤镜上显示有FITC，CY3，还有TRITC，代表680无法用吗？
558 |
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s******y
发帖数: 28562 | 43 不但无法使用680，连 635 都不一定能看见。
你们为什么同时有CY3 和 TRITC？ 这两种颜色相当靠近， 不合适做共染。
我建议你到其他实验室去看看他们有没有合适的滤镜可以用。
另外，除了滤镜，还有考虑你们的相机的敏感范围，很多相机对红外光不敏感，
所以不能用680 |
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C******8
发帖数: 136 | 44
谢谢了
但为什么老鼠的文章里很少有荧光染色的？secondary antibody都是公司买的，连HRP
或者cy3没有什么区别， 而且我听不少老鼠的老板类似开玩笑的提及很羡慕果蝇文章里
一堆堆漂亮的图。
还有，老鼠的antibody是不是最喜欢用兔子的？ |
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a*q
发帖数: 2109 | 45 看怎么保存的了，一般说来没事。而且如果标记效率下降的话，多用点染料就是了。 |
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x*****o
发帖数: 441 | 46 按照包装上面说得, 4度保存. 里面是粉末状态存在的,应该没问题.
对,多用点染料应该就没事了. |
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h**********5
发帖数: 1636 | 47 我们lab，-80保存，用的都是10年前的dye |
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x*****o
发帖数: 441 | 49 是不是不发光就不行了? 或者光强不高就是不太好了? |
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