s****6
发帖数: 34 | 1 Western with ECL is not good for quant due to lack of linearity even though
densitometry itself is fine. |
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s******u
发帖数: 81 | 2 用了enhanced ECL，信号跳跃性很大，试试不加Enhanced，长时间regular曝光。 |
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Z******5
发帖数: 435 | 3 楼主做的啥实验啊？ 现在很多实验都可以用化学发光代替了。
我最近做EMSA用的是pierce家的kit，信号非常好。
说个小小的经验，这个EMSA带的ECL最好不要用在Western中，太强，压片出来经常一片
糊。 |
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V***b
发帖数: 3419 | 4 跑胶要自己做吗？如果 跑胶-转膜-封闭-加抗体-洗膜-曝光-定量-作图 一条龙就好了。这机
器还真有哇，我一直觉得是不可能实现的。
要是只能做转膜-加抗体-洗膜就没太大意思了，这部分工作量不是太大，而且估计一抗
，二抗，洗膜液，ECL，还得人来赔。
要是一切在电脑屏幕上点一点就好了。做一个western blot 5分钟。关键还得看质量，
最后出来歪歪扭扭的band就没意思了。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 5 我说的那个机器跑胶转膜还是要自己做的，机器只能换换液。
ECL 也得自己去做，所以只能省中间那几步（所以便宜嘛，才5000多美元）。
不过中间那几步总共要5个小时吧，所以能够腾出来去做其他事情还是很好的。
我们现在都是人手作，但是就是每隔一阵子得跑过去捣腾几分钟，还是很烦的，
尤其是multitasking 的时候有时候会打乱其他实验的节奏。
像你说的那个一条龙的机器也有，另外有人在另外一个主题贴了一个叫做
simon 的机器，就是那样的，把样品加上去后它就自动做到出图。
不过不知道多少钱。
了。这机 |
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n****e
发帖数: 327 | 6 Anyone who understands the basic principle of ECL knows its linearity is
quite limited. It turns to exaggerate differences between weaker signals but
minimize and underestimate the differences among strong saturated bands.
When the immunosignals are weak, a 2-fold change may appear to be 10-fold on
films. It is hard to know what the real result was given the information
here is limited, but it is rather puzzling that the author made such an
effort on flipping the images. Regardless of the tru... 阅读全帖 |
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h*******o
发帖数: 4884 | 7 p-PDK和PDK用得不是同一个抗体,不同抗体质量差距太大了, 强弱不能简单的比较
一般做pProtein/Protein都是先p在strip做总的,像你这种情况的话,我的建议是
parallel 跑两块一样的胶,一块做pPDK一块用个强一点的Femto显影做PDK就行了
至于AKT和P-AKT,我用过cell signaling 的p-AKT具体哪一个忘记了,band非常specific
.
另外二抗用的太高浓度了, 一般条带出不来,提高二抗是没有用的,反而会增加背景或者非特异性的条带
普通ECL的话,二抗我都是1:10000-20000 |
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s******r
发帖数: 2876 | 8 Oddysey一张小膜就要吭哧吭哧扫半天， 等的不耐烦，
另外，始终觉得灵敏度比Ecl还是弱一点。
Oddysey 的线性范围比胶片好。
我以前发的那片文章，一开始全部是用胶片做的，然后有一个审稿者逼着我们把所有重
要结果都用Oddysey 重复了一遍。 我现在的感觉是，除了有些放射成像(非磷）还必须
用胶片之外，
大部分规模比较大的地方都在往oddysey 过渡。
Oddysey 虽然贵，但是整个系一起买就还好。
啥的 |
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D*a
发帖数: 6830 | 9 没有觉得啊，我们用ECL看，线性很好啊。扫出来的pixel也很小啊。
也可能我们不经常做western，没比较。
Oddysey是专做western的？ |
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i***0
发帖数: 160 | 10 HI,I have a question about Western Blot. We have immunized rabbit and
obtained polyclonal antibody. using the purified antibody from rabbit serum,
we could see specific band toward our antigen. However, with ECL
luminescence, I always have a dirty background, with dots and cloudy smear
that make the image so ugly and not publishable. Do you have any suggestions
? I appreciate a lot for your help! |
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g***x
发帖数: 645 | 11 那个lane1 develop 的时候ecl没有覆盖上，后来又重新develop了一次就没问题。应该
和这个没关系
我做的LT 是根据文献做的，reducing agent 就是指beta－ME，DTT 这些，你说的对，
是打开氧化的键，主要包括二硫键的，我的dimer 不是二硫键，是范德华力。
你说的你的例子是不用reducing agent， 但是用煮的，这样也会破坏dimer 之间的键
，起到的也是尽量reduce 蛋白的作用吧，你说的也可以跑出好看的带型，是指二硫键
没有被破坏，dimer 也没有破坏么？ |
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l******g
发帖数: 1145 | 12 最近中心新买了一台，没人用过，现在刚开始摸条件。
原来wb用hrp的二抗，通常条件是一抗4度过夜，洗30分钟，二抗1：5000或10000一小时
，洗30分钟，然后ECL显影。
现在打算摸下萤光二抗的浓度，除此之外，一抗的条件和洗膜的条件也需要调整吗？
求任何tips！ |
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A******y
发帖数: 2041 | 13 Around 50K if you want to do multiplexing, <30k if you just do standard ECL.
Alpha Innotech's top of line system I think it is still the best (but that
could be a personal opinion). Bio-rad should be the cheapest but also has
the lowest resolution and flexibility. I'm currently having access to Alpha
Innotech (very old one) and a GE system, which are not bad (we bundled with
GE InCell so I don't know exactly how much it costs). |
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C*******e
发帖数: 4348 | 14 Alpha Innotech其实做得挺好的我觉得
就是配套软件太不给力了
另外很有意思的是，公司来demo的时候我们准备的样品
在Alpha Innotech里面没出来信号
虽然它的灵敏度和分辨率理论上说应该比bio-rad的高
同样的样品，用Bio-Rad的出来很好
Bio-Rad的我们实验室用的足够了
DNA, protein,WB都行
软件好用
没觉得需要更高的resolution
另外没有直接扫的灵敏那是肯定的
从放WB的地方到CCD camera还有那么远呢
不像film或者扫描的那么就面对面贴着
不过如果一点东西都探测不到的话
实验优化才是关键啊
不过都是个人看法啦
ECL.
that
has
Alpha
with |
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C*******e
发帖数: 4348 | 16 你说的这些alpha家的还有bio-rad家的也可以的
alpha家有5个滤镜的位置
bio-rad是3个位置（虽然可以用的滤镜有5个还是6个的）
就是不能同时照
分两次照可以的，只要不动胶的位置，bin的设定一样，就可以merge到一起
bio-rad上可以分别放上pseudo color
出来效果一样的
也可以画框定量
ECL的话底物反应时间不过才5分钟
跟整个做western blog的流程相比
省个5分钟没有省很多啊 |
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e****s
发帖数: 1125 | 17 1）感觉还是可以尝试下Western.
为什么那么确定western不行呢？Western不完全取决于样品总量多少，更和目标蛋白丰
度，抗体灵敏度有关系。另外，可以考虑用更灵敏的ECL (fento)检测。
2）MS也许可以考虑，IP出来后，上MS？ |
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s*****g
发帖数: 7857 | 18 准备了些膜，
用了Li-Cor的荧光显影，也用了Themo的化学显影，更用了GE的化学显影。
目前自己觉得化学显影似乎更灵敏。而且blocking buffer, 2nd antibody 也许不受Li
-Cor的限制。微量信号可以通过一般或加强的ECL来控制。。。
大家用过这些机器的大牛们可以给些建议么？因为我们最终要取消dark room ，摆脱
film了。
谢谢！ |
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y****i
发帖数: 2194 | 19 普通的ECL都可以用在这个scanner上吧？
理论上是不是可以用superECL比如femto之类的来弥补灵敏度？
谢谢！ |
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L****T
发帖数: 169 | 20 传统的HRP-ECL曝光条带强度不是线性的，不是同一次曝光的胶片还真不大好定量。 |
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M******g
发帖数: 152 | 23 you can try 0.1 M glycine pH2.5 to strip the membrane 15 min twice. |
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M*******C
发帖数: 183 | 24 请问你用glycine PH 2.5之后，是水洗还是PBS/TBST之类的洗？
我看见网上一个类似的protocol，他们要PBS, TBST洗很久，这样strip耗时很长啊，不
知道有没有必要？ 以前我们NAOHstrip后，清水洗2min就好了。
http://www.abcam.com/protocols/western-blot-membrane-stripping-
Mild stripping
Buffer, 1 L
15 g glycine
1 g SDS
10 mL Tween 20
Dissolve in 800 mL distilled water
Adjust pH to 2.2
Bring volume up to 1 L with distilled water
Procedure
Using a volume that will cover the membrane, incubate at room
temperature for 5–10 min.
Discard buffer
Repeat incub... 阅读全帖 |
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M******g
发帖数: 152 | 25 After glycine 0.1 M pH2.5 striping twice, I normally just use TBST to
briefly rinse the membrane twice, and use 5% milk or 3% BSA to re-block the
membrane. |
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M*******C
发帖数: 183 | 26 今天试了我上面发的那个配方，
strip 5min/5min/洗。。， 不work， 以前的带还在，很强。
strip 10min/10m/洗。。。， 膜变的花了，新的带很弥散，没法看。
还得继续摸索
the |
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M*******C
发帖数: 183 | 27 请问你strip twice，每次几分钟？
the |
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M******g
发帖数: 152 | 28 2x strip, and each one for 15 min at room temp. make sure the pH of the 0.1
M glycine is below 2.5.
It works for me most of time. It is inexpensive and each to make. I
normally make a stock solution of 1 M glycine pH 2-2.5. |
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z********8
发帖数: 818 | 29
Oddysey用的真有种便秘的感觉，很郁闷。只用了几次，我们就不用Oddysey，转回胶片
，老板没有办法，只好自己出钱买GE的。GE也是ECL显色，其实原理应该和胶片一样，
而且还可以扫描DNA胶。 |
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z*****h
发帖数: 172 | 30 我觉得扫描的resolution都比较低。我还是喜欢胶片的。用ECL的好处是可以用比较强
的底物，比如femto，弱的条带都能看到。相比而言Oddsey荧光灵敏度就不那么高了。 |
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z********8
发帖数: 818 | 31
Oddysey用的真有种便秘的感觉，很郁闷。只用了几次，我们就不用Oddysey，转回胶片
，老板没有办法，只好自己出钱买GE的。GE也是ECL显色，其实原理应该和胶片一样，
而且还可以扫描DNA胶。 |
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z*****h
发帖数: 172 | 32 我觉得扫描的resolution都比较低。我还是喜欢胶片的。用ECL的好处是可以用比较强
的底物，比如femto，弱的条带都能看到。相比而言Oddsey荧光灵敏度就不那么高了。 |
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z********8
发帖数: 818 | 33
一般的肿瘤细胞都有表达，但是normoxia表达很低，hypoxia表达很容易检测。
如果是nomoxia，用piece的最强ECL显色。 |
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w***o
发帖数: 1 | 34 A postdoctoral position supported by an NSF CAREER award is currently
available in the Department of Chemistry and Biochemistry (www.usm.edu/chem)
at the University of Southern Mississippi (www.usm.edu). Applicants with
strong academic and research background in electrochemistry,
electroanalytical chemistry, electrochemical biosensors, and
electrogenerated chemiluminescence (ECL) in particular are encouraged to
apply. The initial appointment will be one year, with a possibility of
renewal up to ... 阅读全帖 |
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b*******g
发帖数: 1309 | 35 你是缺乏sandwich assay 的常识
不管是用 raman，还是很Fluorescence，还是其他的
基本原理都是用antibody 识别analyte，然后 antibody 本身连一个信号reporter（或
者上第二个antibody，上面连reporter），
可以是这里的raman，也可以是酶催化的荧光，还可以是ECL，等等
因为antibody 跟antigen 是特异性结合，所以有antigen在，才有antibody，有
antibody 就有reporter的信号，而且这个信号说不准还是放大了几千几万倍，这样灵
敏度才高。 |
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b*******l
发帖数: 217 | 36 如果哪位是electrochemiluminescence领域的，烦请您给我回个信，我有几个专业方面
的问题向您请教。非常感谢！可在此回信，或站内信箱，或[email protected]
/* */。
谢谢 |
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s**g
发帖数: 66 | 37 Q3: remove rx side cap
you listed one reason: line + cap would have filter effect
I like to push the envelope:
driver normally handles its immediate load better, e.g. linear driver with
voltage mode feedback. Load cap at TX side won't affect output waveform by
much. However, receiver side cap causes delay/ISI/filtering, which can't be
corrected by TX side feedback and thus shall be avoided.
Similar effect can be found in CML/ECL logics. |
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t**********1
发帖数: 26 | 38 There is an equation in this book (page 7) as shown below.
l=Tr/D
where l=electrical length of rising edge,in.
Tr=rise time,ps
D=propagation delay, ps/in.
This book also gives an example of a 10kHz ECL signal with a rising edge
of
1ns. This rising edge has a length of 5.6 inch when propagating along an
inner trace of an FR-4 PCB. The electrical length will help you understand
if you need to treat a trace as a lumped or distributed component(
transmission line) for a digital signal. |
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p**f
发帖数: 3549 | 39 见过team manager给实习offer，hr通不过的例子，说不给办export control license。
这两家到底有中国学生做实习吗？ECL得多久下来？3个月？ |
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b***i
发帖数: 3043 | 40 给你打了两次电话都没有人接，还是在这里讨论比较好，有多个人给你参考。
这个电路说简单也简单，说复杂也复杂，教授就是眼高手低。他自己做肯定做不出来。
8位没有问题，你到底什么精度的要求要说清楚。你内存给出32位的数然后4个一组进行
并串转换，就很容易得到8路的信号。这样150M也就需要150/4<40MHz的内存访问。我看
你直接用MCU去读内存都可以。要不用计数器什么的，Binary counter,比如MC10E016:
ECL 8-Bit Synchronous Binary Counter。不用串行并行转换，直接8位也可以。
用FPGA更适合。移位就是说你定义一个模块，有时钟输入，有reset输入，有输入端，
输出端，再加一个开关决定是从输出来循环到输入，还是从输入端读数。最后每个时钟
下进行移位，这个verilog最多20行程序完成。然后你把这个模块实例8个就是8位，根
本没有难度。你告诉教授你用SRAM+FPGA。然后你既可以完全用FPGA搞定，又可以用
FPGA+SRAM。
125MHz |
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g***e
发帖数: 577 | 41 【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
发信人: geome (老网友), 信区: Stock
标 题: QTS_Research Updates
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Mar 7 18:00:08 2017, 美东)
Hi,
Continue on the project, I would like to post the preliminary result of
backtest for all SP500 underlyers using Moving Average Stategy for the last
10 years: (ie, buy/sell signal by crossing of 10day and 25day average ).
Sorry for the messy format - you can get a cleaner download of the csv file
in-
http://www.icanbeatmarket.com/research_reports.html
ticker return ... 阅读全帖 |
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l********g
发帖数: 221 | 43 我做耗材生产。你想卖给谁？美国耗材基本被Covidien,Medline,Cardinal & DeRoyal
垄断，防护类被KC，ECL垄断 |
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m*******e
发帖数: 6358 | 44 free loan
15m purchase mandatory in summer
2m bonus for bayern
1m if qualify ECL
1M if player appear 15 times |
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B*******i
发帖数: 637 | 45 a good sign for ECL away game with Barca? |
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b********y
发帖数: 5829 | 46 【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
发信人: badcompany (哥玩的不是股票，是心跳！), 信区: Stock
标 题: 一些 Swing Pick
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 12 18:25:15 2010, 美东)
Time frame 2-5 天的那种。 如果你觉得有用就给我几个包子吧。欢迎评论！
ACIW, ASCA, CSGS, RDEN, FSYS, GRMN, NTRI, SIGM, WYNN, AYE, AEE, AXP, GSK,
LVS, LZ, MGA, PH, TXT, TGI, ECL, PII, BID, BGP, CNL, ELN, KND, SLE, ZZ, SCS,
SUPR, XRX |
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w******e
发帖数: 1038 | 47 谢谢，我喜欢你的GRMN,NTRI， SIGM， AYE， ECL，ZZ, SUPR。
我不敢追涨，所以选个股没有心得，要听听大家的。
SCS, |
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u*****n
发帖数: 778 | 48 【 以下文字转载自 JQCLUB 俱乐部 】
发信人: urqueen (You suck. I rock.), 信区: JQCLUB
标 题: Oct SP500 ER schedule ZT
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Oct 11 17:12:38 2010, 美东)
DATE | TIME | COMPANY NAME AND PERIOD | SYMBOL | EPS ESTIMATE | No.OF
EST | EPS YEAR AGO
12 Oct AMC Q3 CSX Corp. (CSX) 1.04 26 0.74
12 Oct 12:00 Q3 Fastenal & September Sales Release (FAST.O) 0.50 11 0.32
12 Oct Q3 Intel Corp. (INTC.O) 0.50 40 0.33
13 Oct AMC Q4 Apollo Group (APOL.O) 1.30 20 1.06
13 Oct BMO Q3 Host Hotels & Resorts Inc. (HST) -0.... 阅读全帖 |
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y*****l
发帖数: 5997 | 50 【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
发信人: Banlangen (板蓝根), 信区: Stock
标 题: 股神杯标普五百ticker symbol列表
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Jun 8 16:31:50 2012, 美东)
Here you are: (most update 05/25/2012)
MMM
ACE
ABT
ANF
ACN
ADBE
AMD
AES
AET
AFL
A
GAS
APD
ARG
AKAM
AA
ALXN
ATI
AGN
ALL
ANR
ALTR
MO
AMZN
AEE
AEP
AXP
AIG
AMT
AMP
ABC
AMGN
APH
APC
ADI
AON
APA
AIV
APOL
AAPL
AMAT
ADM
AIZ
T
ADSK
ADP
AN
AZO
AVB
AVY
AVP
BHI
BLL
BAC
BK
BCR
BAX
BBT
BEAM
BDX
BBBY
BMS
BRK.B
BBY
BIG
BIIB
BLK
HRB
BMC
BA
BWA
BXP
BSX
BMY
BRCM
BFB
CHRW
CA
CVC
COG
CAM
C... 阅读全帖 |
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