h****g
发帖数: 439 | 1 测肿瘤血管的渗透性。sacrifice老鼠前2小时iv注射FITC-dextran，取肿瘤块OCT
frozen. 然后切成5um的切片，用acetone固定。
但是只能看到很少的大血管有荧光，绝大部分cd31（血管内皮marker）阳性的地方都没
看到dextran阳性。
想来想去也不知道哪出错了。是不是用acetone固定对FITC-dextran有影响，或者我切
片固定的过程中没注意避光？
哪位有经验的给说说？ |
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h****g
发帖数: 439 | 2 不同组织处理和固定方式的对FITC-Dextran的影响：
1，tumor tissue-OCT-section-acetone: fail
2, tumor tissue-OCT-section-PFA:fail
3, tumor tissue-PFA-sucrose-OCT-section: work!
看来FITC-dextran 和YFP一样，要用PFA固定，然后再OCT |
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g*********5
发帖数: 2533 | 3 I try DAPI, But if scan in the same time, fitc would show DAPI pattern,
anyone know a good dye for nuclear and not overlap with FITC? |
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s******y
发帖数: 28562 | 4 The principle is to choose dyes with emission spectra that are separated enough without major overlap.
I believe the spectra of FITC and TRITC are not overlapped.
You should check here:
http://www.mcb.arizona.edu/IPC/spectra_page.htm
I think your problem is probably due to:
1. the unspecific binding of your 2nd ab
2. one dye has too strong a signal and leak into the other detection channel |
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s******y
发帖数: 28562 | 5 I suggest you to use other fixation methods, because acetone likely washed
out the FITC-dextran. |
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h*****o
发帖数: 342 | 6 我一直都用4%的pfa固定组织，fitc-dextran的荧光保存很好
没试过acetone |
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h****g
发帖数: 439 | 7 另外，你一般切多厚来观察FITC-Dextran？ 10um？
还有，最后怎么分析结果呢？是根据像素值大小来分辨哪是血管里的，哪是血管外的?
还是染cd31还判断？
谢谢！！ |
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s******9
发帖数: 283 | 8 没啥经验，不想被评审挑剔，请教大牛怎样才是普遍接受的组合？
FITC, green?
Cy3, red?
Cy5, blue? |
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A*******e
发帖数: 284 | 9 请问有无人用过FITC偶联的一抗做过western，做完后直接让typhoon扫膜成像。不用用
AP或HRP，如果能直接扫就很方便 |
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b*****l
发帖数: 9499 | 10 我估计你用的是激光。对于一般的灯，excitation wave lenth 也是一个分布，也就是
说，光源不是单色的。
AF488 被 label 成 FITC channel 啊。一个 channel 被 label 成 FITC，是说用来看
FITC 的，这个应该是业界标准。AF488 就是按照 FITC 的标准设计的。
同意你说的 label 成颜色是不对的。
贴个 cube 的图片，你可以看到 cube 上 label 成 FITC 的的确是用来看 FITC 的。
TRITC,
blue","
most
because
最短
明 |
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d********2
发帖数: 3 | 11 尝试用FITC（荧光剂）来标记 dopamine；然后通过CE-laser induced Fluorescence（
LIF）来分析。然后appliy to real samples。
通过对FITC分析，LOD已经到了1nM，甚至0.5nM也有比较明显的peak。
问题1：就是standard的FITC（F7250），在CE-LIF spectrum中的peak也不是唯一的；
问题2：不论如何改变反应条件，每次反应后，总是和control sample的spectrum基本
相同；没有任何明显的product peak（FITC+Dopamine）出现；
反应条件：25度-12小时 和45度-3小时
pH 7.5, 9, 和10.5
buffer：water，NaBO3， 和aSCF
所有的review和paper上说，label很容易，为什么我在label的时候总是不成功。
希望有高人指点，谢谢。如果可以，希望通过电话联系，我在多伦多。 |
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h*****o
发帖数: 342 | 12 you can conjugate FITC to your molecule, and use the anti-FITC antibody to
detect it (antibody available from Vector Lab). FITC is also detectable
under any epifluorescent microscope. |
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C*I
发帖数: 4736 | 13 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 14 一直在误导，现在还在误导。 说说明corona virus 不可以从蝙蝠直接传染给人，必须
经过一个中间宿体性的其它动物才能传染给人。所以，病毒发生后，就故意误导全国人
民去海鲜市场找证据，找其它野生动物的麻烦。 而且还是病毒所去找的，找完了还装
模做样化验呀，分离呀什么的。最后把责任全部推给了海鲜市场的动物。可是那种动物
，一直不敢说，说了其它相关已经在人就会去早那种动物监测。 所以压根不说，打马
虎眼。
事实上，早在2013 年，就是这个武汉病毒研究所，已经从来自云南的蝙蝠身上所携带
的corona virus中分离出第一株蝙蝠SARS类似样的冠状病毒的活病毒，其中就包含了类
似于S类型的基因。从而证实这株病毒能够使其接受和SARS病毒相同的受体，并能够感
染人的细胞。对此新发现，武汉病毒所还把它以武汉病毒研究所的英文简称命名“WIV1
”，以彰显这一发现的重要价值和属于自己第一个发现的巨大研究成果。这个成果刊载
于2013年11月的《自然》杂志。
就是说，从云南弄回来的这种蝙蝠所携带的类似于sars的 corona virus， 可以不经过
其它受体/宿体，而直接传染给人。 他们... 阅读全帖 |
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C*I
发帖数: 4736 | 15 Published: 30 October 2013
Isolation and characterization of a bat SARS-like coronavirus that uses the
ACE2 receptor
Xing-Yi Ge, Jia-Lu Li, Xing-Lou Yang, Aleksei A. Chmura, Guangjian Zhu,
Jonathan H. Epstein, Jonna K. Mazet, Ben Hu, Wei Zhang, Cheng Peng, Yu-Ji
Zhang, Chu-Ming Luo, Bing Tan, Ning Wang, Yan Zhu, Gary Crameri, Shu-Yi
Zhang, Lin-Fa Wang, Peter Daszak & Zheng-Li Shi
Nature volume 503, pages535–538(2013)Cite this article
Abstract
The 2002–3 pandemic caused by severe acute respirator... 阅读全帖 |
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d*********s
发帖数: 390 | 16 Someone used follow Ab,Please let me know which Ab is better for confocal
microscope!
1. c-Myc Antibody (9E10): sc-40
2. c-Myc Antibody (9E10) FITC sc-40 FITC
Many thanks!
God bless you! |
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S*****P
发帖数: 323 | 18 多谢回答.正在用FITC-dextran,就是有点branch,效果不理想.
标 题: Re: 请问哪里有卖发荧光的水溶性polymer
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Jul 20 23:21:59 2005), 转信
FITC-dextran 不好么？
有分子量到2×10^6，挺大了 |
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c******u
发帖数: 42 | 20 转审稿如题。请站内发信告知专业背景。这个杂志一年内给我发了十几个审稿邀请，如
果你认真审稿，他们会源源不断给你发审稿邀请。
稿件关键字： Functionalized Graphene Oxide/Fe Oxide Hybrids, Cellular MRI,
TEM, AFM, Raman, FT-IR, XRD, FITC. |
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s***l
发帖数: 42 | 21 This is what i would do if i were you:
1. Check if the 2nd ab cross-react with the species of your tissue sample
2. Use cold acetone to permealize and fix the tissue in step2
3. decrease the 1st ab concentration,and try O/N incubation in 4 degree
4, mix 2 2nd ab and spin at max speed for 2min. Sometimes, Texas red and FITC
form small particle precipitates.
I think the wash is enough in your protocol.
Good luck
谢 |
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O******e
发帖数: 4845 | 22 ☆─────────────────────────────────────☆
icepiao (icepiao) 于 (Sun Sep 17 00:44:40 2006) 提到:
我转染后利用Anti-V5-FITC进行荧光染色，买的是invitrogen的抗体，目的是看
plasmid transfection后一个protein的表达情况，V5是该蛋白的Fusion protein tag
，因此只要该protein表达，理论上V5应该也表达，基因的启动子是CMV启动子。
步骤为首先co-transfection，利用另外一个report plasmid看transfection
efficiency, 48小时后PBS洗两遍，利用100%甲醇固定5min,然后PBS洗5遍，2min每次，
加入含10%胎牛血清的PBS Block20分钟，然后加入荧光抗体，置暗处1h,然后荧光显微
镜下观察，但是在荧光显微镜下几乎什么也看不到，偶尔有几个有可能有荧光的细胞，
但是太少了。
随后我也采用了4% PFA fix 0.1%Triton x-100 permeabilize, |
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O******e
发帖数: 4845 | 23 ☆─────────────────────────────────────☆
xfeng (風儿～長逝入君懷) 于 (Wed Jan 24 21:48:22 2007) 提到:
在multi-color调compensation的时候，是一定都要调到firstdecade以内，还是觉得保
证能分开就可以了呢？经常觉得如果调到所有events都在10以内，大部分events就都在
轴上了，不知道对不对？
今天做老鼠骨髓的multi-lineage：PE-CD3, PE-TxRed-B220, APC-Mac1, FITC-CD45.2
and PC5.5-CD45.1。发现，总是有PE-TxRed and PE， 或者PE-TxRed and APC double
positive的细胞。很清楚的population。不知道是我的compensation调的不够，还是FC
block的不完全。如果是FC block的问题，应该用多少抗体，block多久呢？
谢谢！！
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Kobune (Trou |
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c*******r
发帖数: 440 | 24 如题，大家是如何选择二抗的荧光抗体的？ 只为确定两蛋白的共定位。
因为 Red TEXAS 染料在荧光显微镜下很弱，难以检测到。 |
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h******y
发帖数: 1374 | 25 为啥DAPI不需要compensation啊？
会不会和另外两个dye，FITC，CellVue(excitation= 655nm,emission=675nm)冲突啊
7- |
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r****m
发帖数: 46 | 26 已经选择了Alexfluro594 590nm和617nm的激发吸收波长
FITC是490和525nm的激发吸收波长
最后一个能选择Pacific Blue（PB） 405nm和455nm的激发吸收波长吗？
谢谢 |
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h****g
发帖数: 439 | 27 Really?
how about PFA?
and do you think I need keep the tissue from light when the tissue is cut
and fixed? Thanks, |
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s******y
发帖数: 28562 | 28 当然是避光比较好。但是其实也没有那么敏感啦！我们平时做抗体的时候只要不对着强
光就没有事。
你用的是Dextran, 应该更加没有事。
PFA应该可以，只要不会破坏细胞膜结构的都可以（不要加detergent!) |
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h****g
发帖数: 439 | 29 为什么要保持细胞膜（endothelial cell 吧）的完整性？ dextran不是通过bind到
endothelial cell 的细胞膜上起作用的吧?
anyway, i will try. thanks,
只要不会破坏细胞膜结构的都可以（不要加detergent!) |
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s******y
发帖数: 28562 | 30 Dextran是水溶物，一般是用来看溶液跑到哪里去用的。
如果跑坏了细胞膜结构，那么dextran就会漏出来，然后就被洗掉了。
你当时用的acetone可以很好的沉降蛋白，但是会把细胞膜破坏，所以小血管里面的
信号就全部损失了。 |
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a****c
发帖数: 339 | 31 Do you have a way to keep dextran while doing permeablization ? I'm researching on this all afternoon.
I'm thinking about using 70kD dextran. |
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s********l
发帖数: 1195 | 32 Hi, I'm pretty new to the field of immunoflurescence.
I need to order an antibody specific for a nuclear protein. The antibody
used was rarely published and only one paper cited that monoclonal antibody
302-18 and 302-22 are specific to this protein. I need to order the mouse
type and use FITC as the second antibody for furescent labeling.
Is it enough to only provide this much info to the antibody provider
companies and to place an order? Anybody please provide some suggestions.
Thanks in advan |
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h****g
发帖数: 439 | 33 sunnyday真是《十万个为什么》啊
还有个问题，我们实验室的荧光显微镜上，有一个蓝光channel，一个绿光channel，这
两个channel都能看YFP信号和FITC信号。 这两个channel有啥区别
spectra |
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s******y
发帖数: 28562 | 34 In most microscopes, the "color" label of the channel means the excitation
light permitted by the filter cube (or other spectra dividing instrument)
inside. Therefore, the "blue" channel should be used to visualize GFP, YFP
or FITC, and the "green" channel should be used for TRITC or RFP.
Most likely you guys put in two filters with similar cutting ranges,
and arbitrarily label them as "blue" and "green" but it is not really "blue"
and "green". So don't take these label too serious. If you reall |
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b*****l
发帖数: 9499 | 35 r u sure?
in my lab, blue is labeled as DAPI, green FITC, and red RHOD.
blue"
，这 |
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p*****r
发帖数: 805 | 36 我想Sunnyday的意思是，mercury lamp的光通过excitation出来的光的颜色（肉眼看到
的，objectives照到样品上的颜色，不是eye piece里看到的颜色），如果是“蓝色“
，那么通常是GFP或者FITC的filter（eye piece里应该看到绿色的fluorescence)；如
果是“绿色“，那么往往有可能是TRITC或者RFP的filter(eye piece里应该看到红色的
fluorescence）。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 37 In my understanding, the most professional way is to label it with the
exitation wavelength, simply because the excitation is strictly controlled
by the sysytem, but the emission is not. The emission wavelength is mainly
controled by the chromophore whichever you use.
However, for the convenience of most user, the labeling of the channel are
often changed to its target chromophores, for example, DAPI, FITC,and TRITC,
which is also appropriate.
But it is not exactly appropriate to label it as "em |
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m******5
发帖数: 1383 | 41 很多文章用相差视野说明核完整细胞形态正常，你可以试试 |
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x*****a
发帖数: 972 | 44 其实我不太会操作flow的仪器，都是那个technician在做，他经验蛮多的，之前让他做
单染的，都挺好。这次是三染，就有问题了。我用的PE，Cy5, FITC。问题主要是PE的
部分。
之前我单染PE，试了很多浓度，找了个最合适的，效果挺好的。然后再三染的时候，PE
就开始乱七八糟了 |
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t******n
发帖数: 33 | 45 use PI to gate out dead cells
use isotype control
use single color control
use Fc receptor blocker
check FITC and PE compensation
PE |
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p****l
发帖数: 291 | 46 It seems that compensation of PE and FITC is the problem.
If in single color staining PE works well, in three colors staining ab
itself and the dilution should still be ok.
I think vial-to-vial variation probably is another problem.
PE |
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c********e
发帖数: 1740 | 48 要有这3个dye偶联的peptide做microscopy的实验，哪个dye更好些？特别是quenching
rate。
谢谢！ |
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e**o
发帖数: 345 | 49 第一次做FACS。 用了PI 和Annexin-V 去染死亡和凋亡细胞。结果出来后，他们告诉我
PIsorting 最上边的是死细胞，下边是活细胞，然后中间就是凋亡细胞。但问题是中间
的细胞很大一部分都是 FITC Annexin-V negative。该怎么解释阿？ 细胞没有固定和
permeablize。下星期要给老板汇报。不知道怎么解释。特向大家请教。提前谢谢你的
回复。 |
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t*e
发帖数: 47 | 50 你的用来做sortdecision的dot plot的x-axis和y-axis分别是什么？
x-axis: FITC Annexin-V
y-axis: PI
是这样么？ |
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