p**5
发帖数: 2544 | 1 Anyone has use FPLC from Bio-Rad (the Biologic system -- medium pressure,
Duo Flow)? How is it compared to the GE healthcare AKTA FPLCs?
We are thinking to buy one FPLC, either Akta (GE healthcare) or Duo Flow (
Bio-Rad); we have been using Akta, but the repair/maintenance is too high
for Akta. |
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b********2
发帖数: 125 | 2 【 以下文字转载自 Chemistry 讨论区 】
发信人: bestwish12 (bestwishes), 信区: Chemistry
标 题: FPLC connector help
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Dec 16 15:54:17 2013, 美东)
实验室在组装一个古董级FPLC,Pharmacia P500,但是在搬家的时候丢了connector和
tubing.（如图）有经验的人能不能帮忙建议一下哪里能买到类似的产品？万分感谢！ |
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k****k
发帖数: 36 | 3 提纯蛋白，头一步用含有imidazole的buffer从NI-NTA column洗脱。用FPLC Q column
再次纯化之后，发现仍有imidazole残存。有人遇到过同样情况么？应如何解决？谢谢
。 |
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b********2
发帖数: 125 | 4 实验室在组装一个古董级FPLC,Pharmacia P500,但是在搬家的时候丢了connector和
tubing.（如图）有经验的人能不能帮忙建议一下哪里能买到类似的产品？万分感谢！ |
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T**********t
发帖数: 1604 | 5 SEC不是在FPLC上做么？
FPLC是仪器，SEC是柱子的种类吧我觉得。我用FPLC也跑sephadex柱子的，那个应该算
SEC吧。 |
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S*****a
发帖数: 63 | 6 【 以下文字转载自 Pharmaceutical 讨论区 】
发信人: Somalia (Anti-Pirates), 信区: Pharmaceutical
标 题: Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro Labs in Woburn, MA
关键字: Biologics,Discovery,Development,Antibody,Computational
发信站: BBS 未名空间站 (Wed May 31 20:28:52 2017, 美东)
Multiple Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro
Labs in Woburn, MA
www.abpro-labs.com
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1. Scientist/Senior Scientist, Antibody Display Technology
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S*****a
发帖数: 63 | 7 【 以下文字转载自 Pharmaceutical 讨论区 】
发信人: Somalia (Anti-Pirates), 信区: Pharmaceutical
标 题: Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro Labs in Woburn, MA
关键字: Biologics,Discovery,Development,Antibody,Computational
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S*****a
发帖数: 63 | 8 【 以下文字转载自 Pharmaceutical 讨论区 】
发信人: Somalia (Anti-Pirates), 信区: Pharmaceutical
标 题: Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro Labs in Woburn, MA
关键字: Biologics,Discovery,Development,Antibody,Computational
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p*****n
发帖数: 981 | 9 ☆─────────────────────────────────────☆
elity (elity) 于 (Sun Feb 4 12:10:55 2007) 提到:
实验室要新添一台纯化蛋白质的仪器，不知道大家觉得什么样的较好。现在在考虑的有
： ActaPrime, BioRad 的 BioLogic DuoFlow, 以及ISCO的Foxy。不知道大家有什么建
议。 谢谢。
☆─────────────────────────────────────☆
anoia (阿诺) 于 (Sun Feb 4 12:16:28 2007) 提到:
FPLC?
☆─────────────────────────────────────☆
goodpop (姚期智老师对我说不要自满) 于 (Sun Feb 4 15:09:47 2007) 提到:
蛋白纯化系统还是akta系列最好
有钱就买purify,甚至explorer
钱不够就FPLC
prime这种破烂货就别要了
你要是买了prime,大部分prepacked columns就别想用了
只要钱 |
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p******n
发帖数: 55 | 10 生物产业是一个有暴利的产业，而中国搞生物绝对是把大量资金往国外送。现在国内需
要的是精仪机械系做出能用的仪器，化工化学系做出能用的药品，药厂能做出有自己知
识产权的新药。
我们实验室老板刚回来的时候，喊着“支持国货”，可是发现除了摇床、冰箱、电脑，
什么FPLC、离心机什么的根本找不到国货。反正我们是能在国内找到的就全买了国产的
。结果摇床控温巨不准，靠着风口的一半37度，另一半还不到30度；小摇床们基本每月
修一次；超净台也是三天两头坏。国产仪器的好处是保修服务真好，24小时内一定有人
来修，坏处是整天坏，真误事。
关于实验室的试剂，只要国内有的，我们尽量不买进口的，但是由于我们用的药品纯度
要求高，很多只能买Sigma的。而细胞培养的培养基、血清什么的，大家都知道国内要
不没有，要不根本没法用。
实验耗材，如枪头、分子生物学的试剂盒基本都是国产的。
我个人的感觉，中国现在的生物产品产业基本都是浙江那一块的小作坊生产的，他们并
不求技术上的进步，而以仿制为主，以牟利，哪怕是微利为唯一目标。国内目前没有一
个大型的仪器制造厂可以生产精密仪器如高速离心机、FPLC、高档显微镜。
我们老板 |
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m*******r
发帖数: 4468 | 11 11点回家的时候， 看看实验室， 走进蛋白纯化的地方 听到什么东西滴答滴答的响，
仔细一看， 一台fplc跑干了， 上面还连着一个说s200 16/60的柱子, resin 都开叉了
。 看了一看booking sheet. 是一位华人同事， 还是RA， 我想， 那我帮你收场吧，
结果做了pumpwash以后pump 还没有rehydrate, 这台老的fplc 的pump 在里面， 我不
知道怎么rehydrate 他， 拿没办法了， 帮补了你， 只能留长纸条了。周一早上大家
来发现吧， 要不是我停了，要干着过周末了。幸好我们这里有5跟这种大的s200，不靠
着一根。 发生这种事情真是eye sore, 我不是当事人， 都有点不爽了。
this is fucked. 周一要有drama了。 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 12 Superdex 200应该可以用来分离这个蛋白和它的aggregate。但是你光有柱子不够啊，
还得有FPLC系统，你还得会用FPLC。
收集蛋白峰不是看颜色的，是看它的紫外吸收。这么大的蛋白肯定有280nm的吸收峰的
，所以不用担心错过它。 |
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a***a
发帖数: 40617 | 13 一个150kd，一个还大于500kd
不用UV都行，只要你柱子合适（s200）且上样量足够
组分手工收集的细一点（analytical的柱子，bed vol约28ml），那就0.5ml一个组分
prep柱子，bed vol约120ml，1ml一个组分
然后每个fraction取一点做bradford就可以判定峰的位置了（可以肉眼直接看）
如果你上样量不够，你没有连续动态监测UV的装置（如FPLC上自带的）
光靠取样用比色皿去自己测，那误差和variation都够你喝一壶的，你根本无法判断
峰的位置
结论就是
上样量必须够。如果上样量不够，还是得FPLC，虽然也是用UV的，但是那个很稳定
variation小，所以灵敏度和复现性都远远好于你用比色皿
这个讨论我看了半天，跟以前好多次一样，感觉学生物的大部分还是停留在书本 |
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a***a
发帖数: 40617 | 14 100ug，只能用FPLC了，别考虑比色皿了，根本测不出来，你测出来的都是
不同比色皿或者样品的variation
而且这个量，就是跑小柱子（而且基本跑完也不剩什么了，算上跑柱子，再浓缩
损失至少70%以上（因为你起始量就少，所以损失比例大）
你就你们学校或者附近学校找个有fplc的lab给你跑一下，equilibrate柱子30min
跑30min
1个小时的事情 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 15 FPLC看A220 absorbance还要换lamp和filter吧？反正我的FPLC只能看254和280。为了
看这一个蛋白的aggregation买一套lamp+filter，还挺费钱的。。。 |
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S*****a
发帖数: 63 | 17 【 以下文字转载自 Pharmaceutical 讨论区 】
发信人: Somalia (Anti-Pirates), 信区: Pharmaceutical
标 题: Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro Labs in Woburn, MA
关键字: Biologics,Discovery,Development,Antibody,Computational
发信站: BBS 未名空间站 (Wed May 31 20:28:52 2017, 美东)
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S*****a
发帖数: 63 | 18 Multiple Biologics Discovery and Development Positions Available at Abpro
Labs in Woburn, MA
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1. Scientist/Senior Scientist, Antibody Display Technology
We are seeking an experienced and highly motivated Scientist with strong
hands-on experience in antibody display (phage/yeast) to support discovery
research projects by screening to identify lead candidate therapeutic
antibodies, as well as engineering molecules for improved... 阅读全帖 |
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h*******i
发帖数: 5 | 20 找有机化学或药物化学的博后，详见如下：
Chemistry for Molecular Imaging (344)
The UT Southwestern Medical Center has recently established the Cyclotron
and Radiochemistry Program, which encompasses a GE PETTrace cyclotron, three
small animal scanners (a Siemens Inveon PET/CT Multimodality System, a
Bioscan NanoSPECT/CT Plus system, and an ASPECT M2 1T MRI system), and state
-of-the-art chemistry and radiochemistry laboratories and quality assurance
facilities equipped with high-end analytical instruments including ... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 21 嗯，我用在其他地方省出来的钱买了一台超高速离心机，两个带紫外消毒的细胞培养箱
，一个有双引擎的-80冰箱，还有一台FPLC, 这些都是我们系里其他人没有的。
我们这个楼旧，湿度大，年代久远，所以特别容易长霉菌。以前的那台普通的细胞培养
箱一直反复感染霉菌，直到我买了那个带紫外消毒的培养箱才消停了。 |
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z**m
发帖数: 48 | 22 【 以下文字转载自 Pharmaceutical 讨论区 】
发信人: zxnm (月到天心), 信区: Pharmaceutical
标 题: 求推荐protein science，protein purification 方面工作
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jan 19 03:43:16 2010, 美东)
求推荐protein science 方面permanent job，本人背景是结晶学，最精通的是
protein purification / analysis (同时有中等规模纯化经验,有非常多的 clonging,
PCR, plasmid design, protein expression，western blot 等等 经验， 有药厂
protein process development 实习经验， 有相当的化工经验
使用HPLC，FPLC 等等都很熟练，对大分子小分子分纯化都有很多了解。
求贵人帮忙推荐Ph.D 或者 master level 的工作（master level 没问题,我愿意干，
但是要人家肯，而且能给办H-1B）。 我愿意从事 |
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x**k
发帖数: 358 | 23 【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: xork (xork), 信区: SanFrancisco
标 题: 湾区蛋白纯化的工作机会
关键字: 蛋白
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 7 12:07:24 2011, 美东)
Scientist or Senior Research Associate
StemRD is seeking a scientist experienced in protein purification with a
focus on secreted proteins.
Requirements:
PhD, BS, MS or equivalent in biochemistry or a related discipline;
5+ yrs of relevant protein biochemistry experience;
Experience with FPLC and HPLC;
Hands on experience with cell culture techniques is highly p... 阅读全帖 |
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s*******e
发帖数: 1002 | 24 目前简历里有 ELISA，purification，vector，FPLC, filtration, SDS, Western
Blotting， flow cytometer 还有各种pcr
Employer Views一直是0.见鬼了 |
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F*D
发帖数: 361 | 25 【 以下文字转载自 Returnee 讨论区 】
发信人: ProteinDev (protein therapeutics), 信区: Returnee
标 题: 蛋白药物研发公司(沪宁杭) 招聘技术副总监
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Nov 4 02:11:16 2009, 美东)
正式的贴子，版主多关照，公司现在太缺技术骨干，方便的话请置顶一段时间吧
招聘pdf地址: http://www.scribd.com/doc/22089956
公司简介：
蛋白质药物研发公司（创业期）
工作地点：
沪宁杭地区
职位：
研发副总监
年薪：
不低于30万（税前），视情况给予年度奖金和一定期权
其它福利：
公司提供100平米住房（免房租），并为其争取省属重点大学正高职称
资历要求：
- 拥有生物化学、生物物理或相关领域的博士学位；
- 有对他人进行科研训练的经验；
- 5至10年从事蛋白质工程经验（针对特别优秀者，该条件可适当放宽）；
- 具备使用高通量以及FPLC技术进行重组蛋白表达纯化的实践经验；
- 具备运用晶体学、谱学、活性测试等生化、生物物理学技术，研究特定蛋白性质 |
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x**k
发帖数: 358 | 26 【 以下文字转载自 SanFrancisco 讨论区 】
发信人: xork (xork), 信区: SanFrancisco
标 题: 湾区蛋白纯化的工作机会
关键字: 蛋白
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 7 12:07:24 2011, 美东)
Scientist or Senior Research Associate
StemRD is seeking a scientist experienced in protein purification with a
focus on secreted proteins.
Requirements:
PhD, BS, MS or equivalent in biochemistry or a related discipline;
5+ yrs of relevant protein biochemistry experience;
Experience with FPLC and HPLC;
Hands on experience with cell culture techniques is highly p... 阅读全帖 |
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h*******i
发帖数: 5 | 27 找有机化学或药物化学的博后，详见如下：
Chemistry for Molecular Imaging (344)
The UT Southwestern Medical Center has recently established the Cyclotron
and Radiochemistry Program, which encompasses a GE PETTrace cyclotron, three
small animal scanners (a Siemens Inveon PET/CT Multimodality System, a
Bioscan NanoSPECT/CT Plus system, and an ASPECT M2 1T MRI system), and state
-of-the-art chemistry and radiochemistry laboratories and quality assurance
facilities equipped with high-end analytical instruments including ... 阅读全帖 |
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y*******g
发帖数: 4 | 28 Postdoctoral Research Fellow Position in Institute of Glycomics, Griffith
University, Gold Coast, Australia
Prof Yaoqi Zhou’s group http://sparks-lab.org is built up a strong term for his molecular biology laboratory to interact with his computational laboratory at the Institute for Glycomics, Griffith University, Gold Coast, Australia. Initial exciting discovery in protein expression optimisation, antibiotic inhibitor discovery and protein design leads to the current expansion of the team. We... 阅读全帖 |
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f******e
发帖数: 541 | 29 I am a molecular biochemist with rich research experience in macromolecular
purification and biological function screening, such as polysaccharides, DNA
, RNA and proteins extraction and purification by FPLC,gel filtration,
chromatography, TLC etc.My multidisciplinary expertise can be demonstrated
by more than 10 peer-reviewed papers that were published in leading
biochemistry journals, such as J Biol Chem., Biochem J. , Mol Cell Biol.,
DNA Repair (Amst). , PLoS One. etc.
PS:
M.S., Ph.D., Curren... 阅读全帖 |
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y**h
发帖数: 9 | 30 Welcome to the GREAT community of Victoria Woods. BARRINGTON SCHOOLS. 9 FT
CEILINGS-1ST FLR. HUGE COUNTRY KITCH W/ISLAND & PANTRY. MARBLE LOOK CERAMIC
IN ENTRY & FPLC SURROUND. 1ST FLR DEN. OAK CROWN MOLDING. LIGHT,BRIGHT FULL
FIN. BSMT. LARGE DECK. Close to Train Station
Living Room 13X15 Main Level Hardwood
Dining Room 12X11 Main Level Carpet
Kitchen 10X11 Main Level Ceramic Tile
Family Room 14X13 Main Level Carpet
Den 12X12 Main Level Carpet
Eating Area 13X9 Main Level Hardwood
Foyer 15X9 Mai |
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x**k
发帖数: 358 | 31 Scientist or Senior Research Associate
StemRD is seeking a scientist experienced in protein purification with a
focus on secreted proteins.
Demonstrated proficiency in the design, execution, optimization and
troubleshooting of protein purification
processes is required. Proven experience in characterization of proteins is
essential. Ability to analyze,
interpret and effectively present data at group meetings or to customers is
required. Experience in cell
biology is highly desirable.
In retu... 阅读全帖 |
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x**k
发帖数: 358 | 32 Scientist or Senior Research Associate
StemRD is seeking a scientist experienced in protein purification with a
focus on secreted proteins.
Requirements:
PhD, BS, MS or equivalent in biochemistry or a related discipline;
5+ yrs of relevant protein biochemistry experience;
Experience with FPLC and HPLC;
Hands on experience with cell culture techniques is highly preferred;
A team player that works independently, but closely within a small group;
Excellent organizational, communicational and multi-... 阅读全帖 |
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x**0
发帖数: 6149 | 34 因为我完全不知道mRNA可以用FPLC纯化啊，我太失败了 |
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a***a
发帖数: 40617 | 35 只要是个resin，柱子，flow体系，都可以搭fplc |
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h*d
发帖数: 19309 | 36 【 以下文字转载自 LifeScience 讨论区 】
发信人: tfmm (不是mm), 信区: LifeScience
标 题: 和研究生们分享一些实验室小经验(zz)_颜宁
发信站: 水木社区 (Sun Mar 25 01:12:14 2012), 站内
http://t.cn/zO6Vxfd
师父领进门，修行在个人 -- 和研究生们分享一些实验室小经验
前两天和学生讨论课题，一个不做这个课题的学生也跑过来听，虽然不说话，但明显用
心。讨论完课题，我对这个学生大加赞扬 -- 他让我想起了读研究生时候的自己（咦？
好像在自我表扬呀）。
想想我做研究生时候的一些经验和教训，似乎有两条比较可取，记下来与大家分享一下。
1. 用心观察实验室senior成员的操作，不放过每一个参加实验室内部讨论的机会
2. 记住自己和别人的每一个实验失误，同样的错误绝不重犯
1. 用心观察实验室senior成员的实验，不放过每一个参加实验室内部讨论的机会
记得上大学本科的时候，有一位教授在课上给我们讲本系毕业的牛人，提到了钟毅（好
像是），说他读研究生的时候，每次导师一到实验室谈课题，他就凑过去听，久而... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 37 FPLC or HPLC Gel filtration column, viscosity assay or sedimentation velocity
assay can be used for dimer/polymer assay. Native gel is also used for such
purpose. SDS-PAGE is NOT!
Antibody? Buy it from commercial company.
Actually, for your question, you DON"T have to do those dimer things at all.
They are the properties of a protein but has NOTHING to do with purity.
A proper folding is needed, if your lab is gonna to test it's activity.
However,if only the protein sequence is corncerned (e.g., |
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a*****a
发帖数: 32 | 38 GE只有100 ul 或者500 ul，还他娘的爆贵。。。 |
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m****m
发帖数: 395 | 39 这次加了BME了，还是有这个现象，明明是同一个蛋白，在不同泳道上，却跑得一前一
后，虽然间隔极近，几乎就快要一直线了，但是还是有明显的前后。我用FPLC分离的，
看曲线分段取样，然后跑在不同的道上，其实肯定是同一个东西，条带很深，杂蛋白不
带HIS-TAG，之前WASH步骤应该就洗掉了，不可能结合得那么牢，最后ELUTE的时候下来
一大堆，肯定是样品，但是不知道为什么还是这样。或者跟上样量也会有关吗？比如上
得多会跑得慢点？
我是提纯了用来测结构的，所以希望尽可能纯。 |
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m****m
发帖数: 395 | 40 Ni柱，最近就试着改Imidazole的浓度、筛选detergent,但是我想问问NaCl的浓度有什
么讲究吗？还有Tris溶液要从头到尾都加吗？这些盐对提纯蛋白有何影响？（PS.我
NaCl浓度试过500mM，300mM，100mM） |
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k********u
发帖数: 2209 | 41 NaCl在纯化过程中主要的作用是维持离子强度，离子强度太低了，有些蛋白
会沉淀的。是做膜蛋白吗？如果是的话，还可以试试看cobalt的柱子，
和Ni差不多的东西，很多做功能的人更喜欢cobalt。 |
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W*********e
发帖数: 247 | 42 会影响蛋白的稳定性或者能否形成复合物
Tris是buffer, 不同的pH也会影响蛋白的稳定性和溶解度 |
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l*******1
发帖数: 128 | 43 NaCl在Ni柱纯化中是用来避免杂蛋白非特异性地以离子交换方式吸附到介质上。
如果没有记错，至少0.3M是必须的。0.5M很多人用。0.1M太低了。 |
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m****m
发帖数: 395 | 44 谢谢。就是膜蛋白，不过我做结构，暂时不做功能。。 |
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m****m
发帖数: 395 | 45 有没有情况用0.5M太浓啊？太浓的话会怎么样？是不是从头到尾NaCl都要加呢？ |
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I*****y
发帖数: 6402 | 48 这个好像非常labor intensive吧？ 就是不停的提纯这些酶蛋白，还要买好多FPLC之类
的。 |
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s********n
发帖数: 2939 | 49 Mass spec, phage display, FPLC, HPCL, high throughput XXX... |
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x**y
发帖数: 46 | 50 跟我最近的EMSA相似，给你一些有用的意见：
1. 如果你的蛋白有aggregation，加一些Triton100(0.1，0.5or1%). 听很多人说，这
很有用。
2. 用4-12% TBE gel （Invitrogen）。如果自己配，用4%。或者3%，下层加三分之一
15%防止free probe run out。
3. 如果还不行，用垂直配胶系统（Bio-rad配PAGE gel用的， 1.5mM）配Agrose胶（1%
？ 2%？记不清了）。里面可以加Triton & glycerol。
我的蛋白80kD， oligomerization 后500 or 1000kD （FPLC测定）。6%TBE gel完全在
well上，4-12%能进一点点，3%可完全进入但很难看。最近我们lab新来的Postdoc用了
Agrose胶，效果不错。我让他加了一些Triton & glycerol，效果更好了，binding
affinity 都增加了几倍。但具体浓度，我得问问他。 |
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