l*******i
发帖数: 153 | 1 现在基因治疗的第一问题都存在争议：安全性第一还是有效性第一？
参加过几次欧洲基因治疗的会议，很多人focus有效性上，但是最近的几个clinical
trial都是死在安全性上。
德国的WAS trial，10个孩子中现在4个都有大问题。几年前的CGD trial，两例病人两
年后都出现问题。
这些主要与目前用的病毒载体有关系，一是病毒载体的bcakbone本身有强的promoter/
enhancer的作用，而且病毒载体有偏向于插入TSS附近，一旦整合进基因组中，就很可
能影响neighboring gene的表达，这也是为啥造成oncogene激活的很重要一个原因。尽
管现在开发了第三代病毒载体（SIN）,但是这个效应还是存在。
第二，random insertion的问题。现在的技术方法，并不能保证病毒载体的单拷贝或两
拷贝插入基因组中，在造血干细胞上，甚至连确切的拷贝数都难于计算，只能用平均拷
贝数平评价。这样，在动物身上安全，translated 到人身上，整合就不一定就是相似
的模式；第一次试验和第二次试验 insertion profile也不一样。结果，有点像撞运气。
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l*******i
发帖数: 153 | 2 现在基因治疗的第一问题都存在争议：安全性第一还是有效性第一？
参加过几次欧洲基因治疗的会议，很多人focus有效性上，但是最近的几个clinical
trial都是死在安全性上。
德国的WAS trial，10个孩子中现在4个都有大问题。几年前的CGD trial，两例病人两
年后都出现问题。
这些主要与目前用的病毒载体有关系，一是病毒载体的bcakbone本身有强的promoter/
enhancer的作用，而且病毒载体有偏向于插入TSS附近，一旦整合进基因组中，就很可
能影响neighboring gene的表达，这也是为啥造成oncogene激活的很重要一个原因。尽
管现在开发了第三代病毒载体（SIN）,但是这个效应还是存在。
第二，random insertion的问题。现在的技术方法，并不能保证病毒载体的单拷贝或两
拷贝插入基因组中，在造血干细胞上，甚至连确切的拷贝数都难于计算，只能用平均拷
贝数平评价。这样，在动物身上安全，translated 到人身上，整合就不一定就是相似
的模式；第一次试验和第二次试验 insertion profile也不一样。结果，有点像撞运气。
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c******8
发帖数: 36 | 3 如果你有很好的标志物，就很容易做了。前段时间，我们也打算做。不过那一只老鼠要
2000块。
我们是做HSC。但是我们很多都是体外做。 |
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P****o
发帖数: 172 | 4 如果你的target 细胞是hematopoitic stem cell来源的，也可以试一下HSC
transduciton, 再转到irradiated rag-/- 老鼠。 |
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l***y
发帖数: 4671 | 5 癌症比二十年前好太多了吧。当时就是绝症，现在很多已经可以早期排查，延长存活时
间，减少复发了。现在 65% 的患者存活时间超过 5 年。随便查了几个英国的数据，
prostate cancer，86-90 年 50% 患者可以存活三年，95 年 则是存活 6 年以上，
2000 年则是超过 12 年。这么明显的改善，还是很可观啊。
至于鼓吹什么攻克癌症之类的，开始有几个 researchers 这么吹，要么是幼稚，要么
是作秀。最近这十几年没有多少 researcher 还这么说了吧？
stem cell for tissue engineering 被忽悠得更厉害，除了 HSC 以外，临床上取得的
进展更少。相比起来，如果以临床应用为标准，在癌症上的投资算是最近这几十年来
NIH 投资回报率最高的几个项目了。 |
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d*******s
发帖数: 24 | 6 感觉完全取决于细胞是增殖期 还是休眠期
增殖期的细胞会依赖glycolysis 癌细胞属于这一类
休眠期的细胞会依赖catabolic mechanism 比如pyruvate oxidation(TSC) fatty
acids oxidation(LT HSC)
分化期的细胞会依赖OXPHO
所以，细胞的内在需求决定了代谢方式。 这种内在需求又是有微环境保障的。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 7 谢谢，如果做western呢？
不知道这些细胞增殖如何，看到公司说的可以增值到75-300倍
这些HSC能分裂多少代，还可以冻起来下次再用吗？ |
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s********r
发帖数: 312 | 8 HSC目前最大的难题是不能像ES那样在体外一直养吧，就那一点细胞分化出来，即使不
考虑效率，又有什么用 |
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z*t
发帖数: 863 | 9 说得不错，现在要是HSC可以expand好多事情就解决了 |
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d******1
发帖数: 709 | 10 HSC可以expand,
这个可以拿nobel吧，一旦成功，基本所有血液，免疫有关疾病都有解了， |
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z*t
发帖数: 863 | 11 long term culture意义上的expand是可以.不过达到functional transplantation的标
准好像没有
必须的，HSC self-renewal挺关键的一个问题是niche，不光是secreted factor的问题
，cell-cell signalling也很关键 |
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s********r
发帖数: 312 | 12 HSC目前最大的难题是不能像ES那样在体外一直养吧，就那一点细胞分化出来，即使不
考虑效率，又有什么用 |
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z*t
发帖数: 863 | 13 说得不错，现在要是HSC可以expand好多事情就解决了 |
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d******1
发帖数: 709 | 14 HSC可以expand,
这个可以拿nobel吧，一旦成功，基本所有血液，免疫有关疾病都有解了， |
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z*t
发帖数: 863 | 15 long term culture意义上的expand是可以.不过达到functional transplantation的标
准好像没有
必须的，HSC self-renewal挺关键的一个问题是niche，不光是secreted factor的问题
，cell-cell signalling也很关键 |
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r********y
发帖数: 18 | 16 在发育过程中HSC 来自hemangioblast |
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s*******d
发帖数: 370 | 17 这篇2011年blood的文章做的HSC向RBC分化，还有体内的半衰期实验，是法国的一个实
验室做的
Proof of principle for transfusion of in vitro–generated red blood cells
http://bloodjournal.hematologylibrary.org/content/118/19/5071.l
但是不知道叶永清是否是这个实验室出来的。
目前来说，按照文中的方法，培养一个Unit红细胞需要耗费的试剂盒材料是惊人的，不
知叶是否开发出来了更加先进的方法，如果成功的话，确实很有意义，希望不是一个在
国内忽悠投资的噱头项目，拭目以待。 |
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m********2
发帖数: 317 | 18 if B cell or other differentiated cells can be reprogrammed into HSCs,
then it would be significant contribution to clininc.
Some papers already show that iPS can be programmed into T cell. |
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l**********1
发帖数: 5204 | 19 >不知道叶永清是否是这个实验室出来的
Do you think true 巴黎第六大学 DR Professor Germain Trugnan can allow his
one master
student to do this kind of HSCs blood cell R&D in CN without EU permission ?
References:
i)
>http://www.fjrs.gov.cn/fjrc/ztzl/2012cyz/2012cyzhwrcyxm/201210/t20121019_532745.htm
No. 102
叶永清
生物医学
体外造血
硕士
法国
巴黎第六大学
及贝桑松大学
Biomedyyq'@'hotmail.com
已接洽投资方，拟在家乡福建福州创业吗，入驻福州留学人员创业园
ii)
>Germain Trugnan Directeur de l'ecole doctorale
10. UPMC Univ Paris 06; ERL INSERM U1057/UMR7203; FMPMC, F-75012 Paris
h... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 20 Xi Core as CP Top Secretary and Yuan Hua Amoi Lai CX both birth place,
how can you expect there has one HScs red blood R$D 专家评审团 ? |
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r********y
发帖数: 18 | 21 在发育过程中HSC 来自hemangioblast |
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s*******d
发帖数: 370 | 22 这篇2011年blood的文章做的HSC向RBC分化，还有体内的半衰期实验，是法国的一个实
验室做的
Proof of principle for transfusion of in vitro–generated red blood cells
http://bloodjournal.hematologylibrary.org/content/118/19/5071.l
但是不知道叶永清是否是这个实验室出来的。
目前来说，按照文中的方法，培养一个Unit红细胞需要耗费的试剂盒材料是惊人的，不
知叶是否开发出来了更加先进的方法，如果成功的话，确实很有意义，希望不是一个在
国内忽悠投资的噱头项目，拭目以待。 |
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m********2
发帖数: 317 | 23 if B cell or other differentiated cells can be reprogrammed into HSCs,
then it would be significant contribution to clininc.
Some papers already show that iPS can be programmed into T cell. |
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l**********1
发帖数: 5204 | 24 >不知道叶永清是否是这个实验室出来的
Do you think true 巴黎第六大学 DR Professor Germain Trugnan can allow his
one master
student to do this kind of HSCs blood cell R&D in CN without EU permission ?
References:
i)
>http://www.fjrs.gov.cn/fjrc/ztzl/2012cyz/2012cyzhwrcyxm/201210/t20121019_532745.htm
No. 102
叶永清
生物医学
体外造血
硕士
法国
巴黎第六大学
及贝桑松大学
Biomedyyq'@'hotmail.com
已接洽投资方，拟在家乡福建福州创业吗，入驻福州留学人员创业园
ii)
>Germain Trugnan Directeur de l'ecole doctorale
10. UPMC Univ Paris 06; ERL INSERM U1057/UMR7203; FMPMC, F-75012 Paris
h... 阅读全帖 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 25 Xi Core as CP Top Secretary and Yuan Hua Amoi Lai CX both birth place,
how can you expect there has one HScs red blood R$D 专家评审团 ? |
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j******i
发帖数: 939 | 26 是adeno adeno是non-integrating virus 所以不能用到t细胞，hsc，iPSCs这些会分裂
的细胞上 |
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r*****i
发帖数: 117 | 27 造血系统特异表达的cre是什么比较好呢？
HSC-SCL-Cre-ER(T)?
我问过几个人，他们说目前还是Mx1cre比较好。
题外话，这两天刚刚有一篇文章出来，好像也是造血相关的，不错的杂志，第一作者就
是zhaohu，不会是你吧 |
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i*********0
发帖数: 915 | 28 各位牛牛，有没有好用点的antibody可以推荐的。
准备sorting一下HSC，然后做个IF staining。
谢谢！ |
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i*********0
发帖数: 915 | 29 这个问题可能问的比较的挫：我从同事们拿来几个cDNA的样品（不同gene 的KO HSC的
样品），想看看一个target gene的表达，在不知道同事们做1st strand synthesis 起
始RNA 样品量的情况下，仅靠reference gene （比如beta-actin）和target gene 的
相对ct数值的差异能确定不同样品中target gene 的表达么？样品浓度差异会不会对结
果造成影响？ |
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f******g
发帖数: 1003 | 30 最近一篇nature文章也发表了同样的结果，把人的血液分化细胞重编成到HSC |
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V******t
发帖数: 444 | 31 从mES细胞分化获得HSCs，培养扩增，再分化成committed hematopoietic cells，难
度很大吗？
为什么我看到有些paper，都声称自己能做到啊？ |
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a****d
发帖数: 1919 | 32 I believe no one has demonstrated an in vitro system to recapitulate the
niche environment for HSCs maintenance. |
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V******t
发帖数: 444 | 33 如果能把ES细胞诱导分化成HSCs，并且能保持和扩增，那很有意义吧。 |
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z****u
发帖数: 1007 | 34 找到一个marker后能开展研究的方向很多，上下游只是一方面。
除此以外，基于这个CreERT model研究其表达pattern ,Stem cell dynamic本身就很有
意义了。比如说Hans Clevers组做的Lgr5, Lgr6在肠道里的那几篇Nature, Science文
章，就只是研究其表达位置，还有拿confetti reporter来研究其激活后populate gut
epithelium后的方式。对其上下游signal pathway基本没咋研究。
就像你说的，其实很多干细胞marker真的只是凑巧在那里表达，没啥重要的功能意义，
比如NG2，nestin，俩都是最早是在brain里面被拿来标记神经干细胞的，然后做MSC的
发现其标记MSC不错。但这俩的knockout并不会导致啥MSC的功能缺陷。还有Gli1也是。
其功能对于MSC来说很弱，有点像是凑巧在干细胞那里表达。
干细胞的marker 可以是功能性的，比如ESC里的sox2, oct4啥的。也可以是非功能性的
，这个该占大多数，比如HSC里面的很多表面标记真的和功能没有明显联系，knockout... 阅读全帖 |
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z*t
发帖数: 863 | 35 HSC不能说表面marker没作用， ckit,flt这种突变是会导致leukemia的，CD48 KO也有
表型。
gut |
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f******g
发帖数: 1003 | 36 两年前，开会的时候看到一个牛人用Gata2 (or Tie2) reporter mice来trace HSC 分
化。
估计文章应该出来了吧
hierachical
lineage
mouse |
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z****u
发帖数: 1007 | 37 genetic barcoding技术很有意思啊。可是它只能定量，不能定位吧。
有点类似于confetti reporter.
问个问题。有人拿CreERT的方式检验HSC的lineage tracing吗。。比如CD34-CreERT 来
看其derivation. |
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z****u
发帖数: 1007 | 38 刚读完这文章。。好文。也回答了上面我的疑惑。
看来HSC缺乏lineage tracing model 基本是个研究传统问题。将来会有的。 |
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z*t
发帖数: 863 | 39 他们好像是Ko 了某个gene?或者select了好的data show出来
我的经验是一般没有advantage 的话HSC transduction在20%左右 |
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m********2
发帖数: 317 | 40 问题是我用他的质粒，用了不同的方法转染HSC，根本就没有成功。
转染一些细胞系倒是能看到绿色细胞。 |
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m********2
发帖数: 317 | 41 我们自己修饰了一个慢病毒载体，不用retronectin，也不用polybrene，转染
HSC轻轻松松能达到60％.
他的那个载体我浓缩了500倍，用了retronectin，根本没有GFP阳性细胞
的。 |
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j******i
发帖数: 939 | 42 不是你说的这些思路。具体怎么做，现在没法透露，我也没有把握。治疗乙肝确实难度
挺大，我觉得比hiv还大。hiv的基因治疗如火如荼，改造HSC的项目已经批准临床了，
成功的机会是很大的。hbv的基因治疗和免疫治疗一致落后其他疾病，一个可能是难度
确实大，一个可能是发达国家这个病毒感染的比例很低，不大重视。国内真正做基因治
疗和免疫治疗的人太少了，可能多数人真觉得这些技术不现实，因此即使做的也是打打擦
边球。这两年，car为代表的肿瘤免疫治疗火了，这才重视起来。 |
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j******i
发帖数: 939 | 43 你跟Sangamo和它的投资者说去，说你们的东西行不通没前途。‘试图改造CCR5的基因
疗法都失败了’请问你是怎么得出这个结论的？Sangamo那篇NEJM的hiv文章在你看来难
道是失败的？ccr5的ko的T细胞具有生长优势，理论上只要有一小部分ccr5-/-的t细胞
，它们就能dominant. 修改t细胞比较安全，所以是第一选择，但t细胞的问题是寿命有
限，因此sangamo最近在张罗直接修改HSC的临床。关于hbv你都不了解，就敢断言基因
治疗没前途，这果真科学吗？
HIV |
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v********a
发帖数: 646 | 44 Scientific Manager – Stem Cell (Job 34333)
Are you interested in pioneering Stem Cell Research? We are seeking a
Scientific Manager for the new Developmental Neurobiology Stem Cell
Laboratory. As the Scientific Manager you will lead collaborative research
projects with investigators in the Developmental Neurobiology Department.
The Scientific Manager will be responsible for:
· Developing new differentiation protocols aligned with the
research interests in the department.
· Modeli... 阅读全帖 |
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j******i
发帖数: 939 | 45 有动物实验的话可以试一下Nature biotech, Nature Methods和Molecular Therapy（
他家虽然IF低，但现在新政策没动物的投稿基本不考虑）。没有动物的话, eLIFE,
Genome Research和NAR都有Methods/Tool的版面。A细胞如果不是HSC，估计以上杂志都
不会太有兴趣。 |
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发帖数: 1 | 46 Bioinformatics Specialist at USC
Informatics Specialist for Bioinformatics
University of Southern California
Requisition ID: P01464151
GENERAL INFORMATION
The University of Southern California Health Sciences Libraries is seeking a
creative, enthusiastic, and service-oriented individual to join its
bioinformatics service program. Since its inception in 2005, the Norris
Medical Library (NML) Bioinformatics Service has provided bioinformatics
support to USC faculty, postdoc, staff, and students, a... 阅读全帖 |
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z*t
发帖数: 863 | 47 1). mouse HSC和CD34难不难搞 我们做RNP的deletion效率很高
2). 快上市的产品你说Bluebird的lenti-globin吗？但是整个欧洲都禁止virus在gene
therapy的使用，这个整么破...这样RNP打了就跑的优势就能发挥出来
3).估摸着Crispr要发给化学奖了，哈哈。
咱们下游用户做着乐呵就行了，关键是咱也不评诺贝尔奖，不用操那个心 |
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i*********0
发帖数: 915 | 48 最近想在sorted LSK中稳定高表达某个6kb左右的基因，不知道那种载体或者系统可以
做。
板上牛牛众多，求助一个。
谢谢！ |
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发帖数: 1 | 49 The University of Southern California (USC) Health Sciences Libraries (HSL)
is seeking an innovative service-oriented individual who is passionate about
providing cutting-edge bioinformatics support to our research community.
Since its inception in 2005, the Norris Medical Library (NML) Bioinformatics
Service has provided bioinformatics support to USC faculty, postdoc, staff,
and students, and is now one of the leading library-based bioinformatics
service programs in the nation. Its recent imple... 阅读全帖 |
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C**e
发帖数: 97 | 50 Anchor Electronics, Walsh Avenue, Santa Clara, CA
HSC Electronic Supply, 3500 Ryder Street, Santa Clara, CA 95051 |
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