r********7
发帖数: 229 | 1 看到这个公司开发的nanobody，最开始是从骆驼体内发现的。不同于一般的抗
体，它只取variable domain (VHH) of the heavy-chain antibodies。只有
一般抗体的1/10大小，还特别稳定（这说明constant region完全没作
用？）。在把抗体humanize一下，改几个氨基酸序列，可以直接用于人体。
Ablynx’s Nanobodies® combine the advantages of conventional
antibodies with important features of small molecule drugs. 感觉非常
有价值。不知道大家对这个技术有什么看法？
http://www.ablynx.com/research/index.htm |
|
l*********1
发帖数: 351 | 2 The half-life of nanobody can be tuned by a HSA binding module (tandem
repeats of nanobodies). Lack of cytotoxicity is definitely a major problem
of such alternative scaffolds in case of tumor treatment. Therefore,
conjugation of cytotoxic small molecules may come into play (kind of ADC
mimetics). |
|
s******y
发帖数: 28562 | 3 For example,the selection and cloning of the nanobody is more complicated.
The downstream effectors is also more complicated because |
|
s********x
发帖数: 472 | 4 想找一对不影响细胞自然功能的人造蛋白-蛋白binding partner。
现在只知道有nanobody和GFP可以用。不知道还有没有类似的好用的蛋白对？是否有什
么好的reference可以参考？
万分感谢大牛赐教。 |
|
l****y
发帖数: 398 | 5 我们做了一批anti-GFP和anti-mCherry的nanobody(15 KDa, single-domain antibody)
, 有两个用来做affinity purification/immunocapture很好用。
有需要的同学请通过站内信提供一个US non-profit research institute 的地址.
vector用e.coli 表达，periplasm加Ni-NTA纯化，一般可以拿到2mg/liter culture.
质量比多抗稳定，成本也低。适合需要做很多affinity purification的情况。 |
|
Q*****r
发帖数: 234 | 6 我们想用来做抗病，不知道有哪家公司可以提供从头筛选nanobody，特异识别细菌抗原
的服务？谢谢。 |
|
C*******e
发帖数: 4348 | 7 SbsB structure and lattice reconstruction unveil Ca2+ triggered S-layer
assembly
Nature 2012 doi:10.1038/nature11155
里面提到的这个nanobody就是camelid single chain antibody （heavy chain)
这个方法最初发表于去年
Nanobody stabilization of G protein-coupled receptor conformational states
Current Opinion in Structural Biology
Volume 21, Issue 4, August 2011, Pages 567–572
他们的做法是把目标蛋白打到驼羊身上
从血液里分离淋巴细胞，然后提RNA，做RT，得到antibody mRNA的pool
然后克隆到phage display vector里面
做粗筛
筛出只跟非变性目标蛋白结合的heavy chain antibody
然后跟目标蛋白共表达，做结晶，解结构
我的问... 阅读全帖 |
|
w****h
发帖数: 87 | 8 来自主题: Immigration版 - 审稿转让 某3分杂志, 微生物方向,
title: Construction of a complete synthetic phage-displayed nanobody library
with randomized CDRs regions for application
10个包子(100伪币)转让审稿, 如有研究方向相近愿意审稿的请站内给我你的官方联系
方式(包括单位名字,地址email)和研究方向, 如果有简历或者google scholar的信息更
好.
first come first serve |
|
|
s******y
发帖数: 28562 | 10 I heard about this antibody a few years ago.
It is indeed a cool tool with potential usage in pharmaceutics.
It of course has its own limitation. |
|
r********7
发帖数: 229 | 11 愿闻其详limitation：）
他们网站上介绍的优点：
http://www.ablynx.com/research/research.htm
recognising uncommon or hidden epitopes
binding into cavities or active sites of protein targets
drug format flexibility
gastro-intestinal stability
tailoring of half-life
ease and speed of drug discovery
ease of manufacture
与一般抗体相比可以识别更多的抗原位点，avidity/efficacy相似，一期临床
验证了安全性, 并且可以做到抗酸性，还可以调节half-life. 如果再来个定向
运输，再加上控制制造成本简直就无敌了。感觉就是完胜一般的单克隆抗体
呀。 |
|
|
|
c*********7
发帖数: 148 | 14 Nanobody主要是为了锚定 beta adrenoceptor active state吧。对crystal packing
有没有用就不知道了。
SbsB structure and lattice reconstruction unveil Ca2+ triggered S-layer
assembly
这文章我正要看。。。 |
|
s*******a
发帖数: 11 | 15 同意楼上的。（2,4,6,8,9,10,11）
1. No innovation was done in Stevens lab. Not even LCP, Martin Caffrey
modified the technology to for the success. Actually the machine they used
for crystallizing b2-T4L is from Martin Caffrey while Martin's name was not
even mentioned in the paper.
2. The innovation from Kobilka lab include T4L-fusion, nanobody stabilizing
active conformation, antibody to get the first structure, and believe me,
more is coming; and from collaborators, which Brian Kobilka emphasized ever... 阅读全帖 |
|
s********x
发帖数: 472 | 16 use GFP nanobody, they are much better. |
|
|
|
|
c**********n
发帖数: 177 | 20 不负责任猜想下，少了三个CDR，specifity应该不如双domain的好吧，变化也少了一半
啊。。 |
|
s******9
发帖数: 283 | 21 你是说affinity吧？如果能够不断提高affinity呢？ |
|
l*********1
发帖数: 351 | 22 structural diversity不如mAb问题不大。关键的是molecular weight不合适，再怎么
提高affinity，肿瘤部位的聚集效果不如mAb。直接的造成的问题就是biodistribution
比较烂，造成off-target effect，心脏肾脏尤为明显。Wittrup有两篇相关的文章，理
论上推到出这个结论。Darpin的实验结果也符合Wittrup的模型。所以现在Darpin也开
始做PEGylation了。。。 |
|
l****y
发帖数: 398 | 23 It is cleared too quickly from the body.
Lacking the constant domain means it cannot activate effector cells. |
|
l****y
发帖数: 398 | 24 yes, magic bullet may be the future. |
|
w********g
发帖数: 447 | 25 that's Albudab. Actually, we observed some renal lesion for Albudab. No clue
about why |
|
|
s********x
发帖数: 472 | 27 GST是结合Glutatione，是个小分子 怎么算protein binding partner？
同理， rampamycin 介导的 FKBP， FRB也有问题，因为需要加rampamycin。 |
|
|
l******n
发帖数: 143 | 29 nanobody对膜蛋白结构的帮助也许也可以算个技术方面的突破？
nano-disk and etc |
|
l****y
发帖数: 398 | 30 想干嘛？考虑一下nanobody吧， 15kd,小小的，fuse个信号肽或者直接和一种什么肽
coincubate,都可能钻进去。 |
|
s********x
发帖数: 472 | 31 前面有人提了，nanobody很小十几kd，而且可以在胞内工作，不必须有二流健。细胞内
还原环境让一般的抗体二流健破坏无法正常折叠，但是很多那 nobody可以在报纸内发
挥作用。 |
|
S****B
发帖数: 17 | 32 Nanobody……10-15KDa
[在 yuban (java) 的大作中提到：]
:我需要一个很小的affinity tag pair，不知道有没有比下面这些还小的呢？
:FLAG/MYC/HA/HIS & antibody， 120+ kDa
:biotin & Streptavidin, 52 kDa
:HaloTag & ligand, 34 kDa
:SNAP tag & ligand, 20 kDa |
|
y***n
发帖数: 109 | 33 有FLAG/MYC的nanobody吗？光见过GFP的。 |
|
z*t
发帖数: 863 | 34 受教了！您怎么看alpaca里搞得nanobody?
：hybridomas筛的是🐭源抗体，需要人源化。前期需要免疫动物。immune
：response 是个问题。优点是有in Vivo quality control,一般不再需要affinity
：Maturation and solubility/stability optimization.
：相比较，display 可以从人工库筛，库可以很大(10e7-10e11)，用时短，不用考虑免
疫问题。但是往往需要affinity maturation.
：Phage display 筛fragment.
：yeast display可以 筛full length antibody.
：方法上，phage display 简单。主要是Elisa and affinity binding/washing.
：yeast display 用到FACS,可以对筛选有很好的控制，同时筛Antibody expression/
：stability 和antibody-antigen binding. |
|
f***x
发帖数: 1524 | 35 Nanobody or VHH 表达简单，优点细胞/组织穿透性好。抗体分子结合上，可以到达大
分子不能到达的位
点（epitope).但是体内半衰期短，这是因为
分子量小，易被肾排除，而且缺少一般抗体的回收机制。
由于没有fc,也没有adcc and cdc.免疫原性也是个挑战。不过在一些疾病上VHH 是发展
趋势。 |
|
z*t
发帖数: 863 | 36 所以说immuno-oncology的target VHH就不好用了？
VHH在哪些疾病上有优势呢？
：Nanobody or VHH 表达简单，优点细胞/组织穿透性好。抗体分子结合上，可以到达大
：分子不能到达的位
：点（epitope).但是体内半衰期短，这是因为
：分子量小，易被肾排除，而且缺少一般抗体的回收机制。
：由于没有fc,也没有adcc and cdc.免疫原性也是个挑战。不过在一些疾病上VHH 是发
展趋势。 |
|
|
