a****d
发帖数: 1919 | 1 Y染色体上面的基因抑制卵细胞发育的可能性很高了，预计未来2-3年应该能看到类似工
作；
XX发育成为精子没有可能吧，总得需要Y染色体存在吧 |
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o***e
发帖数: 490 | 2 不知道这些pups会不会有发育缺陷？克隆羊生出来不久就死了。 |
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u**********d
发帖数: 573 | 3 性染色体对精/卵发育的重要性可能更多体现在支持性腺的发育上面，所以我不负责任
地乐观地估计带Y的卵是可以做出来的。
Xi染色体在iPSC里可以被重新激活。
前后两篇文章都是把人工PGC打到性腺里去，这个有点没意思。最好可以在管子里一条
龙生产出卵来，这样有人想研究早期胚胎发育（implantation前）就不用杀老鼠了哈哈
，也就没有人砸场子了，除了卖老鼠的。 |
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a****d
发帖数: 1919 | 4 估计Saitou's lab已经开始分离性腺里面重要的niche factor了，几年后在dish里面完
全分化functional精/卵是可以预期的
话说早期胚胎发育是发育领域里面为数不多的金矿了，也是epigenetics的大热门啊 |
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l**********1
发帖数: 5204 | 5 还是老祖宗强啊 刀枪不入的 铜肝铁心脏 by stem cell or ips 早就预言过了 |
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s******y
发帖数: 28562 | 6 试管婴儿不涉及对生殖细胞的修改，只是受精场所从体内换到了体外而已。 |
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a*****x
发帖数: 901 | 7 那么至少体外培养胚胎是可以接受的？
对生殖细胞修改在dish里面可以接受。那么两步就都可以接受了。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 8 是啊，如果这个技术能够被他们开发成熟的话，估计以后epigentics 和developmental
biology 的诺奖都应该有他们的份了。
不过这个技术如果成熟了的话，一大堆做鱼的人可就要饭碗被抢了。因为目前
做鱼的人有一大堆是在做胚胎早期发育的。 |
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s******y
发帖数: 28562 | 10 这个有个很大的麻烦在这里：
培养人胚胎是不可以中途终止的（否则视为堕胎）。
如果硬着头皮一直搞下去并最终搞出个小孩来，如果小孩健康，那么阿弥陀佛，
谢谢佛祖，然后研究人员就可以洗手等着瑞典的电话了。如果不巧的是孩子
有缺陷。。。那么你完了，准备逃亡到一个什么奇怪的国家去改名换姓从此
隐居生活吧。 |
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a****d
发帖数: 1919 | 11 斑马鱼体外受精，发育，这一点和老鼠比在技术研究上有优势，但是在理解体内受精，
早期胚胎发育方面就没得比了。做鱼的胚胎早期发育确实要有长远考虑才行。
developmental |
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a****d
发帖数: 1919 | 12 申请grant的时候，需要有特别款项用于制作多国护照 |
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s******y
发帖数: 28562 | 13 是啊，连我这个外行都对这个前景狂流口水。行内的人估计更是一个个磨掌擦拳
翘首以待。 |
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u**********d
发帖数: 573 | 14 是啊，以后可以拿10^7的受精卵或者8-cell阶段或者blastcyst来做实验了，是一件多
么爽的事情！ |
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a****d
发帖数: 1919 | 15 很多adult stem cell也都面临类似sample量过低的窘境 |
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m***i
发帖数: 4637 | 18 Retina 3d culture不要太容易
Saisi开始养小脑了 |
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u**********d
发帖数: 573 | 20 相对而言，preimpantation的胚胎发育可以在dish里进行，外界因素影响不大，细胞类
型较少，还是较容易研究一些的。据说ENCODE打算在未来5年内把所以细胞所以的转录
因子都ChIP一遍，如果这个所有细胞是指发育过程中的每种细胞，那么他们怎么分离得
到不同的细胞类型，得到足够的细胞数量，拭目以待。 |
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u**********d
发帖数: 573 | 21 我知道这位兄台是他的那篇zfp521的nature，号称找到了pax6、sox1之前的神经命运决
定因子，后来看到他在一个会议上讲3d retinal cup，这个体系看起来确实挺简单的，
大部分的活细胞自己干了，人就看着，不是想象的那样要不断地加各种诱导因子。不知
道养小脑又是怎么个思路？ |
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l**********1
发帖数: 5204 | 23 反磁场 正电子的外星人世界 iron 不一定易磁化的 |
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l*******i
发帖数: 153 | 24 这是一个理所当然又直观的思路。
但是，人不同于小鼠，有一个伦理问题在里面，如何拿到足量的oocyte，从2C stage开
始观察，直到blastocyst，这个过程中一系列变化是否和小鼠相似呢？比如说，在小鼠
2C stage,虽然有OCT4转录，但是却不翻译的，即没有OCT4蛋白形成，这是区分
totipotency与pluripotency一个很好的marker。
另外一点，就marker而言，小鼠的ES细胞与人的ES细胞不一样，比如人的ES细胞没有
SSEA1，而小鼠ES细胞有；这个SSEA1是否可以用于区分naive和prime stage呢？似乎没
有这方面的报道，就我个人的看法，我持怀疑态度，因为将普通的人的ES/iPS诱导成
naive状态后，有的文章说，hES-specific的marker(如Tra-60,Tra-81)仍然表达，而
SSEA1不表达；而另一篇文章，直接将human fibroblast诱导成naive-like iPS cells,
后者不但拥有小鼠ES细胞的形态,而且还表达SSEA1,相反,Tra-81却没了。这两组的研究
都表明自己的naive... 阅读全帖 |
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i*****g
发帖数: 11893 | 25 我搞错了，是mESC的东西
Here we show that mouse androgenetic haploid ES (ahES) cell lines can be
established by transferring sperm into an enucleated oocyte. The ahES cells
maintain haploidy and stable growth over 30 passages, express
pluripotent markers, possess the ability to differentiate into all three
germ layers in vitro and in vivo, and contribute to germlines of chimaeras
when injected into blastocysts.
不过，这样子很惊人啊，haploid ESC |
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z*t
发帖数: 863 | 26 reprogram to ips state, induce the oocyte/sperm differentiation? |
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b*****g
发帖数: 119 | 27 谢谢拉~
oocyte genotype没有做 太费尽了..本来想涂个捷径的
反过来的交配也没有做呢 不好意思 打错了, 不是lethal, 是offspring存活率很差.
么？ |
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D*a
发帖数: 6830 | 28 也就是说P1的应该都有存活了？那么我建议你养四五只母老鼠交配一下看看，是不是后
代出现+/-和-/-的比例大概是一比一，-/-的genotype带是不是纯的，如果表型很独特
的话还可以看看它们是不是显示-/-的表型。虽然四五只母老鼠也不多，但是比例不应
该太离谱，如果你的oocyte理论上能100%敲除的话，有条件多养几只准确性会更高点。
这个不一定比你提卵子麻烦的，而且老鼠也死不了。我倒是好奇怎么提卵子啊，取卵巢
还是superovulation？感觉卵巢里面很难分离卵子啊，而且你的cre在active的里面表
达还是所有卵子都表达啊
我暂时也想不起来更好的检验办法了，对这个cre也不熟 |
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b*****g
发帖数: 119 | 29 谢谢, 那个fl/+ 和 fl/fl的比例是大致1:1的 现在就是要去研究它在卵子里面的表型
所以也是个未知数
卵子还是很好提取的 先打激素催卵 然后取卵巢 把follicle一弄破里面的卵子就都跑
出来了
按理论上来说Cre 是在所有的卵子里面都表达的 ZP3 是zona pellucida 3 是用来制造
卵子外面一层的糖蛋白 用于sperm egg interaction 但是得等到oocyte 发育到一定的
阶段才表达 但是距里zp3表达到我做实验应该有1个月了 哎 就是不明白为什么还能看
到蛋白 |
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b*****g
发帖数: 119 | 30 哇 一看就知道遇上行内人了
要是真这样的话我做梦都要笑醒了
我还是乖乖的去看看究竟没有没有在oocyte里recombine吧 |
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D*a
发帖数: 6830 | 31 fl/+ 和 fl/fl的比例应该是没什么疑问，因为你这一步只是剪尾巴看体细胞。但是现
在你对oocyte敲除有疑问，让被敲除掉的卵子受精看看是不是能长成-/-，我觉得这个
应该比pool卵子更有效一些。
如果你用收获的卵细胞来做PCR或者RT PCR，如果混有别的细胞，会有污染，到时候你
也不知道是因为体细胞污染，还是因为你的卵细胞敲除不完全。
如果这个蛋白敲除不影响卵子受精和胚胎发育，-/-的老鼠我觉得是最有说服力的。
genytype的问题毕竟还是用genotype最有说服力。这是我能想到的方法了，不知道其他
人都是怎么做的。
PS我突然想到卵细胞是单倍体啊，按你写的母鼠genoytpe，你的Cre应该只能进一半的
细胞里啊，所以你的卵细胞不是应该只有一半是KO的？还是Cre相当多没有allele的卵
子里面也会有Cre蛋白？反而你的细胞里都是flox单倍体，没有两个等位基因需要敲除
啊，跟两个flox还是一个flox的效率没关系啊。 |
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f*******o
发帖数: 150 | 32 可以用gdf9cre， zp3primaryfolicle 表达，gdf9在primodiaal 就表达了，早不少，
尤其你的蛋白在卵泡发育早期就有的话，更要用gdf9,说不定有时候还要尝试在PGC中剔
除基因，western blot 完全可以测定，如果用18天小鼠，pmsg后一个老鼠可以娶到100
个gv oocyte, 用14天的你可以娶到200－300个growing oocytyes。 |
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b*****g
发帖数: 119 | 33 谢谢, 这就是我们当时决策上的失误,当时没有好好考虑用了别人免费提供的zp3-cre
现在超级后悔....
我从来没有试过那么早做pmsg诶 如果14天就去 pmsg能200-300个oocyte? 太振奋人心
了 对了我的是B6 background 正题感觉比我用的B6X SJL F1要小很多的样子 只要不做
功能性的实验应该不会有影响吧?
100 |
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b*****g
发帖数: 119 | 34 我比较惊讶的是在14天follicle就会respond to PMSG嘛? 可不可以丢一个reference
给我呀 当然这些分离出来的oocyte应该不具备meiotic competence 对吧? |
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f*******o
发帖数: 150 | 35 对不起，我没有说清楚，12－14天你取的是incompetent oocytes, 直径小一些，不能
用pmsg， 要用胶原酶消化卵巢组织，可以娶到280左右。
reference |
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a********k
发帖数: 2273 | 36 cell封面文章。犹他HHMI Cairns和中科院刘江的背靠背文章，斑马鱼精子甲基化可以
reprogram卵子基因组。
Reprogramming the Maternal Zebrafish Genome after Fertilization to Match
the Paternal Methylation Pattern p759
Magdalena E. Potok, David A. Nix, Timothy J. Parnell, Bradley R. Cairns
Sperm, but Not Oocyte, DNA Methylome Is Inherited by Zebrafish Early Embryos
Lan Jiang, Jing Zhang, Jing-Jing Wang, Lu Wang, Li Zhang, Guoqiang Li,
Xiaodan
Yang, Xin Ma, Xin Sun, Jun Cai, Jun Zhang, Xingxu Huang, Miao Yu, Xuegeng
Wang, Feng Liu, Chung-I W... 阅读全帖 |
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m******g
发帖数: 467 | 37 Nature 14.06.26
小知识：
1. Magnetic compass guides butterflies
2. To and from the Horn of Africa
Humans were moving back to the Horn of Africa as early as 23,000 years ago
before the advent of agriculture
3. Tanning might be addictive
4. Human oocytes reprogram adult somatic nuclei of a type 1 diabetic to
diploid pluripotent stem cells
5. Decoding the regulatory landscape of medulloblastoma using DNA
methylation sequencing
6. Structural biology: Wobble puts RNA on target
The selective tRNA aminoac... 阅读全帖 |
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m******g
发帖数: 467 | 38 Nature 14.06.26
小知识：
1. Magnetic compass guides butterflies
2. To and from the Horn of Africa
Humans were moving back to the Horn of Africa as early as 23,000 years ago
before the advent of agriculture
3. Tanning might be addictive
4. Human oocytes reprogram adult somatic nuclei of a type 1 diabetic to
diploid pluripotent stem cells
5. Decoding the regulatory landscape of medulloblastoma using DNA
methylation sequencing
6. Structural biology: Wobble puts RNA on target
The selective tRNA aminoac... 阅读全帖 |
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q******g
发帖数: 3858 | 39 发现一个新的化合物，可以特异性地抑制某个转运蛋白的活性。我们是用oocytes来表
达该蛋白，然后做的转运试验。我们投了nature chemical biology,但编辑说我们缺少
证据来证明蛋白和化合物直接结合。不知道什么样的实验才能说明他们直接结合？
另外，还有什么杂志可以投呢？
谢谢大家了。 |
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m******5
发帖数: 1383 | 40 楼主是专门做转运的？
可以考虑做 Invitro-nuclear import assay
就是用纯化的转运体系在digitonin permeablized 的Hela 细胞核上做。
因为整个体系都是体外重建的，理论上不会出现非直接影响的情况
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3261132/
不过好奇地问一下，这个化合物阻断核转运你们是propose和哪个转运蛋白结合？
importin beta? alpha? or exportin?
如果真的只特异某个subtype的importin的活性的话还是很有意思的，不过鉴于楼主能
在oocyte里做出来，可能性不大。 |
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q******g
发帖数: 3858 | 41 For example, within this transporter, can you identify the key amino acid
residues or protein domains that affect the compound binding?
We will examine the amino acid uptake in oocytes expressing mutant with
compound.
Second, can you synthesize a fluorophore or radiation conjugated version of
this new compound you discovered? If yes, you should be able to test its
interaction with your transporter by IP.
This is a revesible inhibitor for transporter. I am afraid that compound
will not bind to t... 阅读全帖 |
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t********n
发帖数: 64 | 42 Genome Analyses of Single Human Oocytes
Genome-Wide Detection of Single-Nucleotide and Copy-Number Variations of a
Single Human Cell
Probing Meiotic Recombination and Aneuploidy of Single Sperm Cells by Whole-
Genome Sequencing
Rare event of histone demethylation can initiate singular gene expression of
olfactory receptors
这是为了欢度圣诞么。。太霸道了 |
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i*****y
发帖数: 44 | 43 恳求审稿机会（蛋白质结晶学，分子生物，微生物，细菌抗药性，钾离子通道小分子药
物，电生理等）
对杂志if高低没有要求，谢谢。
本人英国博士，structural biology方向，主要技术是膜蛋白纯化，结晶和晶体解析，
研究方向是通过解析膜蛋白结构阐述细菌抗药机理。
现在美国博士后，一直做细菌抗药分子机理相关方向，最近两年研究钾离子通道跟疾病
的关系，主要技术是电生理 （two electrode voltage clamp in oocytes), yeast
assay, structural-function study..。
恳求大家有机会转让给我，或者推荐本人。email: l*******[email protected] |
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s*********m
发帖数: 15 | 44 如何把人的多能干细胞分化为卵子or精子？
有哪些重要的signaling pathway参与？ 估计Wnt, BMP, FGF这些pathway少不了。
如果这样可以做的话，就可以实现自身产精子和卵子 |
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n******7
发帖数: 12463 | 45 你是不是也听了那个变性人的节目？
我刚问了一个一样的问题 |
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f****y
发帖数: 104 | 46 浙大的：
CORRECTIONS AND CLARIFICATIONS
Reports: “CRL4 complex regulates mammalian oocyte survival
and reprogramming by activation of TET proteins” by
C. Yu et al. (20 December 2013, p. 1518). The authors wish
to acknowledge contributions of Tadashi Nakagawa and Yue
Xiong (University of North Carolina—Chapel Hill). Nakagawa
and Xiong initiated the VprBP-Tet project and made substantial
contributions to the published study. Xiong’s lab generated
and provided us the VprBP conditional mutant mice on
th... 阅读全帖 |
|
a****n
发帖数: 43 | 47 这个例子也很有意思。
到底该多大程度上跟别人分享数据呢？难道合作者之间也是手快有手慢无？
Qing-Yuan Sun & Heng-Yu Fan:
CRL4 Complex Regulates Mammalian Oocyte Survival and Reprogramming by
Activation of TET Proteins. Science 2013
Yue Xiong:
CRL4VprBP E3 Ligase Promotes Monoubiquitylation and Chromatin Binding of TET
Dioxygenases Molecular Cell 2014
投稿时间差半年，Yue Xiong实验室的那个日本人估计郁闷死了。 |
|
f****y
发帖数: 104 | 48 浙大的：
CORRECTIONS AND CLARIFICATIONS
Reports: “CRL4 complex regulates mammalian oocyte survival
and reprogramming by activation of TET proteins” by
C. Yu et al. (20 December 2013, p. 1518). The authors wish
to acknowledge contributions of Tadashi Nakagawa and Yue
Xiong (University of North Carolina—Chapel Hill). Nakagawa
and Xiong initiated the VprBP-Tet project and made substantial
contributions to the published study. Xiong’s lab generated
and provided us the VprBP conditional mutant mice on
th... 阅读全帖 |
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a****n
发帖数: 43 | 49 这个例子也很有意思。
到底该多大程度上跟别人分享数据呢？难道合作者之间也是手快有手慢无？
Qing-Yuan Sun & Heng-Yu Fan:
CRL4 Complex Regulates Mammalian Oocyte Survival and Reprogramming by
Activation of TET Proteins. Science 2013
Yue Xiong:
CRL4VprBP E3 Ligase Promotes Monoubiquitylation and Chromatin Binding of TET
Dioxygenases Molecular Cell 2014
投稿时间差半年，Yue Xiong实验室的那个日本人估计郁闷死了。 |
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S***J
发帖数: 1210 | 50 靠，实在是看着不爽，凭啥清北撕逼就大家一致讨伐，浙大范衡宇更加恶劣的剽窃别人
成果却没人关注？下面转帖，是从张生家和谢灿那个帖子里看到的，其他几位ID不愿意
单开一贴，我实在看不下去，特开一贴。这个范衡宇据说还拿到了杰青，国内科研真是
尼玛无底线了啊。
如果有知道内情的，在此帖讨论吧，不然都被清北的刷屏了。当然，也许有其他隐情冤
枉了范衡宇，也可以内部人出来解释解释。如果确定是剽窃，这尼玛妥妥的应该上新语
丝头条啊。
以下转帖：
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发信人: forjoy (三分华盖), 信区: Biology
标 题: Re: 能拿炸药奖吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Sep 16 17:25:42 2015, 美东)
浙大的：
CORRECTIONS AND CLARIFICATIONS
Reports: “CRL4 complex regulates mammalian oocyte... 阅读全帖 |
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