发帖数: 1 | 1 美国当地时间6月25日，居住在美国加州的Rui Chen和Wenjian Gonzales通过代理律师
向加州北部地区法院提交了一份长达29页起诉书，将金融理财公司Premier Financial
Alliance及其公司五名主要成员集体告上法庭，起诉他们进行非法传销。起诉书同时也
把为PFA提供产品的国家人寿(national life group）保险公司列为共同被告，这可是
全美华人圈里最大传销公司，这要倒闭了，多少人的钱血本无归呀。
家里有做WFG和PFA的，或者大量购买了wfg和pfa保险的，这次要惨了... |
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k***u
发帖数: 15 | 2 PFA金融理财公司正在招募中！培训上岗，公司有丰厚奖励及福利待遇，同业人员优先
录用，可以享受聘才方案，机会难得，欢迎有志人士加盟！员工福利待遇包括:
1.时间.. 是自由的
2.收入.. 是不封顶的
3.培训.. 是免费的
4.旅游.. 是奖励的
5.晋升.. 是不靠关系的
6.心情.. 是倍爽的
7.公司.. 是成立27年最有潜力的公司
8.产品是全方位综合金融
9:分红是行业最高的
公司平台让你空手走上创业路！ 如果你想改变现状想有好的收获！请立即行动，PFA期
待您的加盟！！
招贤纳才:
1:准备创业的，请联系我。
2:上班不自由，心里不爽的，请联系我。
3:付出多回报少，心里憋屈的，请联系我。
4:求发展，需要更大平台的，请联系我。
5:想兼职工作，增加收入的，请联系我。
6:希望时间、财务自由的，请联系我。
7:想主宰自己命运，有大格局的请联系我。
8:身边有这样的朋友也请您告诉他联系我
机会就在眼前，圆自己一个梦。让我们一起共同打拼，互惠双嬴，明智... 阅读全帖 |
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l******2
发帖数: 5522 | 3 其洗脑效率超出我的想象，我认识几个过女，本来还算是正常人，但是去听了几次PFA
的付费课（120美刀），人就变了，到处拉客入会。
PFA的收入有两大来源，一是付费seminar, 每人每节120刀，我二是卖life & annuity,
据内部人士透露，客户买的理财产品公司和经济人对分 |
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d******d
发帖数: 199 | 4 最近身边一个朋友参加了湾区的PFA (Premier Financial Alliance ),我当时就告诉她
这个就是传销,要真的确保你年薪百万,干嘛他们要四处微信拉人买保险? 当我说完PFA
就是一个传销公司的时候,她就顿时火了,说我脑子有病,干嘛不自己上网查查是不是保
险传销公司. 看来PHD女博在找不到工作的时候,也会乱投医.... |
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X***n
发帖数: 366 | 5 Maybe not.
PFA cross-link proteins binding to RNA. You may try to heat to 65oC to
reverse the cross-link of PFA and add proteinase K to remove as much protein
as possible. |
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m******n
发帖数: 121 | 6 用于ihf的p4小鼠大脑需要先pfa perfusion么，还是直接挖出来扔pfa过夜就可以了？
老板说不用，有人说用生理盐水perfusion就可以了，到底怎么样比较好呢？ |
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k*****a
发帖数: 7389 | 7 【 以下文字转载自 Investment 讨论区 】
发信人: kaonima (卡奥宁马，蒙古巴喀部传奇英雄), 信区: Investment
标 题: 最近很多人鼓吹一个叫PFA的保险肩客，是老鼠会吗？
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Aug 22 19:22:10 2016, 美东)
有什么猫腻？ |
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s********r
发帖数: 154 | 9 PFA 大部分成员都是收入少学历低的，被洗脑后以为钱是可以天掉下来的 |
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s********y
发帖数: 831 | 10 哈哈，Jack Wu and Lan Zhang
It's everywhere.
PFA
annuity, |
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G*********1
发帖数: 438 | 11 说life insurance在生前可以使用
说有个program 可以替roth ira，pfa 投资收益从0-12%，tax-free，问 什么时候可以
取，说随时取，但是要收4%的利息，没搞懂有什么的优势在里面？
还有什么孩子的教育基金的？
就是感觉不靠谱，搞了两个来自国内的英文都不留到的，说第一年make 13w, 另一个
make 20w都是25岁 26岁的，好像卖保险的坐等天上掉钱似的。 |
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c*******3
发帖数: 1 | 12 最近老有人要我加入湾区的PFA，并购买他们的universal life insurance，看起来又
是个老鼠会，
有没有了解的人给说说？ |
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f******g
发帖数: 1003 | 13 I am working on extracting total RNA from few PFA-fixed cells (about 200
cells).
Now we have MagMAX™-96 Total RNA Isolation Kit (Cat:AM1830). This kit
is for RNA extraction from normal cells.
Did anyone have experience on it?
Thank you in advance, |
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l******u
发帖数: 936 | 14 laser microdissected cells? if you wanna do gene expresion microarray (not
microRNA
array), don"t recommend to use PFA-fixed cells.
kit |
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f******g
发帖数: 1003 | 15 They are Hematopoietic stem cell.
I do not want to do GeneChip, only RT-PCR.
Can I use normal RNA kit to extract RNA from PFA-fixed cells? |
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v*********d
发帖数: 382 | 17 Paraffin 包埋的不基本上都是PFA fix过的吗？
Qiagen的 |
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P******r
发帖数: 966 | 18 protocol写了fix overnight，但是忘了放在4% PFA有五天之久，还能做staining吗？ |
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y**u
发帖数: 7459 | 19 不是，我记不清具体的了，PFA会quench掉你的antigen，你还是可以试试，可能信号会
很弱。我一般做fluorescence会把样品切小或薄，只fix一两个小时室温 |
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a*****t
发帖数: 81 | 20 google antigen retrieval protocol, within one week in pfa still works for
many antigens |
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k***u
发帖数: 15 | 21 招聘创业伙伴
顺势而为成大为。没有拥有一辆出租车的Uber颠覆了美国传统出租车行业，没有拥有一
个电话的微信颠覆了中国传统电信行业。而PFA正在颠覆着美国传统的金融界！不是你
喜欢不喜欢，这世界变化快！只要你动作快，否则你被淘汰！要么你领头，要么你跟上
，要么你出局！
PFA金融理财公司招聘兼职创业者！越来越多的兼职创业人在PFA金融理财公司创业成功
，因为PFA的机制解决了想创业的有梦的人创业的这些难题:
1。没有资金 ，PFA是零投资创业。
2。没有平台。PFA的平台让有本事的人短期成功。
3。没有消费者信任 。PFA主打产品是美国167历史的巨头。
4。 获利时间太长。PFA当月或3个月获利 。兼职月入$3000-$5000美金，全职年收入$
100,000美金起至$4,000,000百万美金。...
PFA已经产生兼职2年全职2年半的年收入超过百万美金的百万富翁！PFA目标；3-4年打
造更多百万美金年薪的有梦者！若想了解详情，请电话：415-816-4378 或加微信：
ken9516 |
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k***u
发帖数: 15 | 22 PFA金融理财公司招聘兼职创业者！越来越多的兼职创业人在PFA金融理财公司创业成功
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2。没有平台。PFA的平台让有本事的人短期成功。
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k***u
发帖数: 15 | 23 PFA金融理财公司招聘兼职创业者！越来越多的兼职创业人在PFA金融理财公司创业成功
，因为PFA的机制解决了想创业的有梦的人创业的这些难题:
1。没有资金 ，PFA是零投资创业。
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n***w
发帖数: 2405 | 24 我也来搭个车来说说自己关于不同条件的fix下的对于IHC的影响。
我是做眼睛的， 我做过如下的比较，
1. Whole globe: O/N fix in 4% PFA
2. Whole globe: 1hour RT in 4% PFA
3. Slit the cornea (more access to PFA) : O/N in 4% PFA
4. Slit the cornea: 1hour RT in 4% PFA
I compared immunogenicity of CD31 and PDGFRb.
Results were:
1>=4>2=3
As for the brain, I usually perfuse and fix with 4% PFA and post-fix in 4%
PFA O/N.
Today I didn't perfuse, I guess I may just leave the brains in 4% PFA for
36hours.
别。 |
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j******e
发帖数: 282 | 25 Public Fishing Areas (PFAs) are great places
for family outings! You can fish from the
bank or a boat, picnic, hike, watch wildlife,
and enjoy the outdoors. Good bank fishing
opportunities are available at all PFAs and
many of them have special kids fishing areas
for young anglers. Remember, not all
PFAs have the ability to sell licenses on
site. Please call each PFA for details.
从DNR查到以上这句话。是不是PFAs是指一些专门designed for fishing的地方，可能
那里的鱼比较好钓，比较多。但是需要特殊的维护和管理，所以就有需要另外贵一些的
WMA license。这是我的理解。不知对错。 |
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b*****n
发帖数: 1841 | 26 一个knock in 的老鼠，目的基因与GFP融合表达。我的目的是让GFP和其它抗体共染色。
发现如下：
Harvest tissue，fix with 4% PFA overnight at 4 degree，切片后GFP无需染色可见
微弱信号，但是其它的抗体无法染色
如果直接用OCT在干冰上速冻，切片后再用4% PFA固定，其它抗体染色没有问题，GFP的
直接信号不可见，GFP抗体染色后一片smear，但是与control无GFP的tissue相比可明显
看到smear的GFP信号。
如果fix with 4% PFA for 2 hours at RT，然后incubate with 30% sucrose
overnight，那么GFP和其它抗体的染色都没有问题。
虽然我根据别人的protocol找到了解决的办法，但是一直想不清楚为什么。
为什么4% PFA固定过夜其它抗体就不能染色？为什么速冻后再用4% PFA固定，GFP信号
减弱或者变得smear？为什么固定两小时再用sucrose处理，则GFP和其它抗体的染色都
得到恢复？
大牛出来解答一下原理。 |
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D*A
发帖数: 1169 | 27 Interesting, this could be a way to play, not best though
even PFA/F can be complicated as well,say a bunch of rule like:
JJ up ,PFA any position/blind/betting
Ax up, PFA at later position/unraised/less then 5 players
Q8 down,PFF any postion/blind/betting/
and， for heads up, PFA with even lower hand。。
if write a code, many variables can be take, like no of players, postion,
Chips/blinds/bet-raise condition,could be complicated..
May be a very nice way to play for Double or Nothing
a reasonable w |
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w********r
发帖数: 1431 | 28 你的实验可以用PFA固定么？
我之前用PFA处理细胞，加入PFA之后在显微镜下看，可以很清楚的看到GFP的信号就没
有了，
但是去掉PFA之后用PBS泡着，慢慢的GFP的信号就又恢复了，
挺好玩的，就像关灯开灯一样 |
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a****c
发帖数: 339 | 29 这一步可以是ice, room temp, 37 degree, 可以是2% PFA, 4% PFA, 2% PFA/2%
sucrose, 4% PFA/4% sucrose, 时间从10min到30min不等。你自己特别关心的话，做个
小实验比较下。绝大多数情况下不会有什么关系，但是保不准哪个antibody或者cell
type需要特别的fixation condition。 |
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D*A
发帖数: 1169 | 30 Interesting, this could be a way to play, not best though
even PFA/F can be complicated as well,say a bunch of rule like:
JJ up ,PFA any position/blind/betting
Ax up, PFA at later position/unraised/less then 5 players
Q8 down,PFF any postion/blind/betting/
and， for heads up, PFA with even lower hand。。
if write a code, many variables can be take, like no of players, postion,
Chips/blinds/bet-raise condition,could be complicated..
May be a very nice way to play for Double or Nothing
a reasonable w |
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s******0
发帖数: 78 | 31
发信人: berg2007 (berg), 信区: SanFrancisco
标 题: 台胞着的，写的不错，谁有兴趣组织一一遍历？ （转载）
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Oct 31 14:19:31 2010, 美东)
11. San Francisco
San Francisco旧金山最早由西班牙人建立，快速成长于十九世纪中的淘金热中，二十
世纪初的大地震曾经对这个城市造成毁灭性的打击，后来又迅速复甦，是美国西岸最有
文化历史，被誉为世界最美丽城市之一。Skyline城市地平线是举世闻名景色。旧金山
也是被认为是最有欧洲风味的美国城市，彷彿与外界隔绝般，在山与海的环抱下，金门
大桥与环美金字塔耸立着，叮当车行驶在丘陵起伏的地面，维多利亚式房屋和中国城形
成最主要特征。
矗立在海湾的橘色Golden Gate Bridge金门大桥，背景一面是完全的山，而另一面是高
耸的城市，那样完美镶合一起，当从城市内丘陵起伏的地形，往海边俯冲而下时，忍不
住让人赞叹不已。这样一个美丽的城市，拥有独特地标建筑，半岛地形三面环海，海外
又有山，是美国最适合无车自助旅行的几个城市之一。不... 阅读全帖 |
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s***a
发帖数: 384 | 32 发的时候巨慢，想加一句话的，后来就瞬间给发了。。。-_-|||
接着实验室的故事。
早上一到实验室看到台子上老板用marker巨醒目的用大体字写着：
PFA是非常有害的！！必须要放在通风橱里用！！否则会危害其他人！！blabla！！！
然后旁边摆着俺的一个试验杯，盖了两层铝纸
还在想呢，昨天里面是PBST+gelatine，谁给俺装成PFA了？接开一闻，没味啊。。。不
确定是在说俺呢
接着进了办公室，看到所有的同事都以同情的眼光看着俺。没有说话，其实是还没喝咖
啡醒过来呢。。打开信箱，看到老板一封群体信件，警告所有的人注意不要放PFA在试
验台上blabla。每次杀鸡都会送群体信件。看来俺真的是只冤鸡了。
好心的同事还安慰俺，俺告诉他们实情，说想跟老板谈谈，这样其实打击积极性地 (以
前还会赶结果，现在5点就走，实验放下明天做)。同事后来劝说没有用，这里的每个人
都是这样过来的。老板娘每天都会站在试验架子后面监视谁在干什么。这两天俺就觉的
老是有火辣辣的射线投过来。自嘲说俺这是有吸引力，让老板娘的目光都不能离开。。
。:D
当然后来告诉老板他们了，不过也就一个ok完了。
——————— |
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h****g
发帖数: 439 | 33 不同组织处理和固定方式的对FITC-Dextran的影响：
1，tumor tissue-OCT-section-acetone: fail
2, tumor tissue-OCT-section-PFA:fail
3, tumor tissue-PFA-sucrose-OCT-section: work!
看来FITC-dextran 和YFP一样，要用PFA固定，然后再OCT |
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S*****s
发帖数: 287 | 34 你用 4% PFA fix 20 分钟是不是顺便破细胞了？如果是的话你可以考虑用 BD
Biosciences 的 CytoFix/CytoPerm。我同时染两组细胞，一组用 1% PFA fix 15 分钟
染细胞表面蛋白，另一组用 CytoFix/CytoPerm fix 15 分钟染全细胞，CytoFix 处理
的细胞贴壁非常好，PFA fix 的细胞还是很容易掉。我用的是 glass bottom dish，
poly-L-ornithine 37C 处理过夜，第二天用水洗三次。 |
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b******s
发帖数: 1089 | 35 固定组织需要考虑组织大小，否则不能彻底固定。如果组织小于1mm，2hr PFA足够了。
否则需要4度过夜固定。或者先固定2小时，再切成小块固定。
上面有人说0.1%的glut都会影响抗体结合。你可以自己试试，如果是这样的情况，可以
只用4% PFA。
固定完之后，需要dehydration和infiltration，再包埋切片。
glut: glutaraldehyde
PFA: paraformaldehyde |
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k***u
发帖数: 15 | 36 如果肯吃苦就能获得成功，那么最有钱的就是普通劳工了，努力就可以获得成功，那么
满街打工者都是成功的人！选择比努力重要，眼光比能力重要，突破比苦干重要，改变
比勤奋重要，态度比专业重要。想成功先要选对方向，握对工具，在正确的时间做正确
的事，再加上努力才会成功！
PFA金融理财公司打造最好的平台，最棒的团队，让创业者能实现创业梦想，人因梦想
而伟大！PFA公司火热招聘创业伙伴，意者私聊，电话：415-816-4378 或加微信：
ken9516 |
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k***u
发帖数: 15 | 37 PFA金融代理公司正在招募中！培训上岗，公司有丰厚奖励及福利待遇，同业人员优先
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1.时间.. 是自由的
2.收入.. 是不封顶的
3.培训.. 是免费的
4.旅游.. 是奖励的
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6.心情.. 是倍爽的
7.公司.. 是成立27年最有潜力的公司
8.产品是全方位综合金融
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招贤纳才:
1:准备创业的，请联系我。
2:上班不自由，心里不爽的，请联系我。
3:付出多回报少，心里憋屈的，请联系我。
4:求发展，需要更大平台的，请联系我。
5:想兼职工作，增加收入的，请联系我。
6:希望时间、财务自由的，请联系我。
7:想主宰自己命运，有大格局的请联系我。
8:身边有这样的朋友也请您告诉他联系我
机会就在眼前，圆自己一个梦。让我们一起共同打拼，互惠双嬴，明智... 阅读全帖 |
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g***y
发帖数: 201 | 38 yes, you can.
Basically,
1. snap-freeze the tissue (presumably unfixed) in Tissue-Tek by liquid
nitrogen.
2. cut sections(I prefer 5-7um). It seems the thinner, the better the
sections stay on the slide. We use plus slide from fisher
3. air-dry at room temperature for 3-5 hours.
4. 2xPBS 3min each to clear tissue-tek
5. Postfix in 2% to 4% PFA in 1xPBS for 5-10 min
6. Wash away PFA by 3xPBS 3 min each
7.PBS+Triton x-100 0.05% 5 min(optional)
If you are going to do immunofluorescence, you can go |
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w*******s
发帖数: 10 | 39 perfusion with saline or PFA?
saline is to remove the blood from the tissue; and PFA is to fix the large
tissue that takes a long time to be fixed by immersion.
correct me if i'm wrong. |
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w********u
发帖数: 5457 | 40 warm PBS wash only once, or without PBS wash, suck out the medium and
directly fix cells by PFA.
try 1% PFA, or ice-cold methanol.
try lower cell confluence
try BD poly-D-lysine coated chamber slides |
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m*****n
发帖数: 760 | 41 1. do not wash the plate.
2. add 4% PFA into the well immediately after you withdraw the medium
(one well each time, never let the well dry)
3. or add same volume of 8% PFA directly into the culture
without the withdrawl of the medium.
4. 10 minutes fixation, then wash with PBS. |
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S*****s
发帖数: 287 | 42 不好意思一直没登陆 MIT。我以前试过 Lysotracker。按照 Invitrogen 的 Manual 做
的染色，不过我染色之后试了一下Paraformaldehyde 固定。没有加 PFA 的细胞能看
到类似于网上图片的染色 pattern，加了 PFA 的细胞就没信号了。1000uM 看起来浓度
有点高。我刚查了一下 Invitrogen 的 Manual，推荐的浓度是 50-70nM。你是不是重
新 dilute 一下原液？ |
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c*********r
发帖数: 1312 | 43 多谢！不过我的问题其实不是是否能够用PFA，dextran、DiI和CM-DiI都有可以用PFA的
种类。但是我的实验中甲醛固定是在切片之后，因为切片时会把切开一部分细胞，而在
甲醛固定之前染料是不会和组织交联的，所以水溶性的染料比如dextran在固定的时候
就被洗掉了。
这个FluoroGold我看了一下也是水溶性的，不知道会不会也有这个问题…… |
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M******s
发帖数: 138 | 44 pfa灌过得组织一定要过糖，绝不能直接冻，否则你的组织切出来全是末子，这个一定要注意。
这个程序大致是灌注》PFA固定》过糖》冰冻包埋》切片
所以你的组织还是需要固定的 |
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s*********a
发帖数: 1409 | 45 老板要交grant，天天逼data，我快被逼疯了。
实验室学生切的片子，是PBS perfuse的小鼠脑子，然后在4%PFA 4度过夜fix，然后放
到pbs里，室温切片，40UM厚。我第一次觉得片子太厚了，用了漂片法，荧光染色，染
完了再mount到slides上，效果还马马虎虎。可是老板不喜欢荧光，喜欢DAB染色。说是
同时有人的脑染色，人脑用的是DAB，鼠脑也要用DAB才行。我也不知道是什么理论。我
只好又做DAB染色。可是我没做过DAB，完全照实验室的protocol做了两次，没做出来。
用的是贴片法，我想是不是片子太厚了，所以染不出来。可我老板偏认定是抗体浓度的
问题，让我继续试抗体浓度。我觉得真不是浓度问题，因为啥也没出来。
这个实验室染色用的protocol和我以前lab的很不一样。我们以前都是pbs+PfA灌流，然
后fix过夜，蔗糖沉降，oct包埋冷冻切片，从来没超过10um厚，然后荧光染色。这个
lab染色就没怎么做出来过，可是老板偏要按照他那套来。我觉得他就是火星来的。 |
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s*********a
发帖数: 1409 | 46 老板要交grant，天天逼data，我快被逼疯了。
实验室学生切的片子，是PBS perfuse的小鼠脑子，然后在4%PFA 4度过夜fix，然后放
到pbs里，室温切片，40UM厚。我第一次觉得片子太厚了，用了漂片法，荧光染色，染
完了再mount到slides上，效果还马马虎虎。可是老板不喜欢荧光，喜欢DAB染色。说是
同时有人的脑染色，人脑用的是DAB，鼠脑也要用DAB才行。我也不知道是什么理论。我
只好又做DAB染色。可是我没做过DAB，完全照实验室的protocol做了两次，没做出来。
用的是贴片法，我想是不是片子太厚了，所以染不出来。可我老板偏认定是抗体浓度的
问题，让我继续试抗体浓度。我觉得真不是浓度问题，因为啥也没出来。
这个实验室染色用的protocol和我以前lab的很不一样。我们以前都是pbs+PfA灌流，然
后fix过夜，蔗糖沉降，oct包埋冷冻切片，从来没超过10um厚，然后荧光染色。这个
lab染色就没怎么做出来过，可是老板偏要按照他那套来。我觉得他就是火星来的。 |
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n***w
发帖数: 2405 | 47 depends on how well you want to finish your tissue, which may affect your
following procedures like IHC.
I have never done on livers. What I may do, is to perfuse with 4% PFA and
post-fix in 4% PFA for a bit longer. |
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