f******e
发帖数: 125 | 1 How long is Sephadex G150 shelf time? We have one bottom of Sephadex G150 in
our lab. The bottom looks very old. I swelled the beads and when I prepared
the column a lot of beads came out of the column. The column is brand new
and this is the first time I used the column.
The column is supposed to hold beads larger than 20 micron.
Any suggestions? Do I need to buy new Sephadex? or something wrong with the
column preparation.
Thanks alot |
|
f******e
发帖数: 125 | 2 it is old so i want to know whether Sephadex degraded. BTW where to buy
Sephadex. It looks like they do not sell dry beads only slurry now. |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 3 你确定那瓶Sephadex是新的，不是用过的么？买瓶新的应该也不贵。 |
|
s******y
发帖数: 28562 | 4 How big is your protein? If bigger than 30kD you can use
mini desalting column with sephadex G-25. Done in less than 5 minutes.
If smaller than 30kD you can use sephadex G-10, or smaller. |
|
r****o
发帖数: 105 | 5 本文献给YL
（二十一）离子交换层析
做完硫酸铵沉淀以及等电点沉淀之后，下一步就是做离子交换层析
(ion-exchange chromatography)。离子交换层析原理很简单，利用蛋
白质表面的带电基团和resin上带相反电荷的ion exchanger group相互结
合来纯化蛋白。离子交换柱和affinity chromatography一样，属于
absorption/desorption型的层析方法，与gel filtration完全不一样，其中
一个最大的优点是，样品体积可以很大，最后的洗脱样品的体积可以小很
多，这样实际起到了一个浓缩样品的作用。还有一个优点是，离子交换层
析其实不需要柱子，可以用batch 的方法（在离心管里面混合beads和样
品）。当然如果beads量多情况下，batch方法平衡得不是很好，导致
resolution不是很好。这一点我们做实验的时候深有体会，以后的一篇中我
会提到。我们纯化钙调蛋白用了柱子做纯化，原因是因为所用的beads 相
当于Sephadex G-50再加上阴离子交换基团，所以实际上可以看成是 |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 6 哪里卖我还真不知道。GE和Sigma貌似这一型号都已经discontinued了。 |
|
|
T**********t
发帖数: 1604 | 8 对了，这么大量的DNA,跑胶不如跑柱子了。跑个sephadex柱子，400bp和100bp应该很好
分吧，洗下来乙醇沉淀一下。 |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 9 可以先跑个small scale的看看。我刚才说错了，用sephadex估计分不了，你的样品估
计要用Superdex 200来分，我没跑过DNA的制备柱，但是理论上应该比蛋白难不了多少
吧。 |
|
l******n
发帖数: 520 | 10 1. Phred/Phrap
2. try purification your "big dye PCR product" using sephadex, you can get
longer sequences |
|
T**********t
发帖数: 1604 | 11 SEC不是在FPLC上做么？
FPLC是仪器，SEC是柱子的种类吧我觉得。我用FPLC也跑sephadex柱子的，那个应该算
SEC吧。 |
|
l**********1
发帖数: 5204 | 12 Pls try
roche spin column protein
Quick Spin Protein Columns Sephadex G-25, fine
Catalog # Pack size Qty Price
03117936001 20 columns $116.00
//www.roche-applied-science.com/proddata/gpip/0_0_0_0_0_185.html
original hint is from:
[合集] 熟悉P32标记的大侠请进来帮个忙（重贴）
[版面:生物学][首篇作者：demoner] , 2009年01月21日
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31220531.html |
|
i*****g
发帖数: 11893 | 13 正好这几天干自己的事情，搜索 desalting的办法
看见了 pierce 有一堆产品
LZ可以串联两种方法，估计近乎100% desalting
http://www.thermo.com.cn/article.aspx?id=5157
Zeba desalting and sephadex，PAGE gel desalting
这些方法，无非两种，ion exchange, gel filtration，他们现成做好了产品可以用 |
|
K*F
发帖数: 120 | 14 请您转发 z******[email protected]
万分感谢！祝您身体健康，财源广进！
Biochim Biophys Acta. 1988 Apr 28;954(1):1-13.
The inducible trimethylamine-N-oxide reductase of Escherichia coli K12:
biochemical and immunological studies.
Silvestro A, Pommier J, Giordano G.
Source
Laboratoire de Structure et Fonction des Biomembranes, CNRS, Marseille,
France.
Abstract
The inducible trimethylamine-N-oxide reductase which migrates on non-
denaturing polyacrylamide gels with an RF of 0.22, has been purified from
the soluble fraction o... 阅读全帖 |
|
|
a********g
发帖数: 558 | 16 抱歉，也的确是俺没说的很具体，呵呵。
我在纯化一个９kd的蛋白，首先是GST-fusion protein，切掉GST后用Sephadex G-75纯
化，总是在大概６０kd左右有一个大峰，而在目的位置没有峰，或很小的峰。跑胶后发
现大峰里面的蛋白有目的条带也有杂带。小峰是目的条带很纯，但是浓度太低，浓缩后
才能勉强跑胶。
怀疑蛋白自身聚集了，不知道高手有什么好的办法。我目前用的buffer是 500mM NaCl,
50mM Tris-HCl, pH8.5. |
|
b****o
发帖数: 806 | 17 想买 GE Healthcare Life Sciences 的 一些 parts
* 17-0404-03,HITRAP PROTEIN G HP, 2 X 1 ML
* 17-0010-01,Sephadex G－10 100G
直接从GE网上买，一点折扣也没有，如果哪位能买到折扣的，我可以从你处买，并支付
佣金，谢谢 |
|
