f******e 发帖数: 125 | 1 How long is Sephadex G150 shelf time? We have one bottom of Sephadex G150 in
our lab. The bottom looks very old. I swelled the beads and when I prepared
the column a lot of beads came out of the column. The column is brand new
and this is the first time I used the column.
The column is supposed to hold beads larger than 20 micron.
Any suggestions? Do I need to buy new Sephadex? or something wrong with the
column preparation.
Thanks alot |
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f******e 发帖数: 125 | 2 it is old so i want to know whether Sephadex degraded. BTW where to buy
Sephadex. It looks like they do not sell dry beads only slurry now. |
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T**********t 发帖数: 1604 | 3 你确定那瓶Sephadex是新的,不是用过的么?买瓶新的应该也不贵。 |
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s******y 发帖数: 28562 | 4 How big is your protein? If bigger than 30kD you can use
mini desalting column with sephadex G-25. Done in less than 5 minutes.
If smaller than 30kD you can use sephadex G-10, or smaller. |
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r****o 发帖数: 105 | 5 本文献给YL
(二十一)离子交换层析
做完硫酸铵沉淀以及等电点沉淀之后,下一步就是做离子交换层析
(ion-exchange chromatography)。离子交换层析原理很简单,利用蛋
白质表面的带电基团和resin上带相反电荷的ion exchanger group相互结
合来纯化蛋白。离子交换柱和affinity chromatography一样,属于
absorption/desorption型的层析方法,与gel filtration完全不一样,其中
一个最大的优点是,样品体积可以很大,最后的洗脱样品的体积可以小很
多,这样实际起到了一个浓缩样品的作用。还有一个优点是,离子交换层
析其实不需要柱子,可以用batch 的方法(在离心管里面混合beads和样
品)。当然如果beads量多情况下,batch方法平衡得不是很好,导致
resolution不是很好。这一点我们做实验的时候深有体会,以后的一篇中我
会提到。我们纯化钙调蛋白用了柱子做纯化,原因是因为所用的beads 相
当于Sephadex G-50再加上阴离子交换基团,所以实际上可以看成是 |
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T**********t 发帖数: 1604 | 6 哪里卖我还真不知道。GE和Sigma貌似这一型号都已经discontinued了。 |
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T**********t 发帖数: 1604 | 8 对了,这么大量的DNA,跑胶不如跑柱子了。跑个sephadex柱子,400bp和100bp应该很好
分吧,洗下来乙醇沉淀一下。 |
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T**********t 发帖数: 1604 | 9 可以先跑个small scale的看看。我刚才说错了,用sephadex估计分不了,你的样品估
计要用Superdex 200来分,我没跑过DNA的制备柱,但是理论上应该比蛋白难不了多少
吧。 |
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l******n 发帖数: 520 | 10 1. Phred/Phrap
2. try purification your "big dye PCR product" using sephadex, you can get
longer sequences |
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T**********t 发帖数: 1604 | 11 SEC不是在FPLC上做么?
FPLC是仪器,SEC是柱子的种类吧我觉得。我用FPLC也跑sephadex柱子的,那个应该算
SEC吧。 |
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l**********1 发帖数: 5204 | 12 Pls try
roche spin column protein
Quick Spin Protein Columns Sephadex G-25, fine
Catalog # Pack size Qty Price
03117936001 20 columns $116.00
//www.roche-applied-science.com/proddata/gpip/0_0_0_0_0_185.html
original hint is from:
[合集] 熟悉P32标记的大侠请进来帮个忙(重贴)
[版面:生物学][首篇作者:demoner] , 2009年01月21日
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31220531.html |
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i*****g 发帖数: 11893 | 13 正好这几天干自己的事情,搜索 desalting的办法
看见了 pierce 有一堆产品
LZ可以串联两种方法,估计近乎100% desalting
http://www.thermo.com.cn/article.aspx?id=5157
Zeba desalting and sephadex,PAGE gel desalting
这些方法,无非两种,ion exchange, gel filtration,他们现成做好了产品可以用 |
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K*F 发帖数: 120 | 14 请您转发 z******[email protected]
万分感谢!祝您身体健康,财源广进!
Biochim Biophys Acta. 1988 Apr 28;954(1):1-13.
The inducible trimethylamine-N-oxide reductase of Escherichia coli K12:
biochemical and immunological studies.
Silvestro A, Pommier J, Giordano G.
Source
Laboratoire de Structure et Fonction des Biomembranes, CNRS, Marseille,
France.
Abstract
The inducible trimethylamine-N-oxide reductase which migrates on non-
denaturing polyacrylamide gels with an RF of 0.22, has been purified from
the soluble fraction o... 阅读全帖 |
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a********g 发帖数: 558 | 16 抱歉,也的确是俺没说的很具体,呵呵。
我在纯化一个9kd的蛋白,首先是GST-fusion protein,切掉GST后用Sephadex G-75纯
化,总是在大概60kd左右有一个大峰,而在目的位置没有峰,或很小的峰。跑胶后发
现大峰里面的蛋白有目的条带也有杂带。小峰是目的条带很纯,但是浓度太低,浓缩后
才能勉强跑胶。
怀疑蛋白自身聚集了,不知道高手有什么好的办法。我目前用的buffer是 500mM NaCl,
50mM Tris-HCl, pH8.5. |
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b****o 发帖数: 806 | 17 想买 GE Healthcare Life Sciences 的 一些 parts
* 17-0404-03,HITRAP PROTEIN G HP, 2 X 1 ML
* 17-0010-01,Sephadex G-10 100G
直接从GE网上买,一点折扣也没有,如果哪位能买到折扣的,我可以从你处买,并支付
佣金,谢谢 |
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